Sulfo-Cy7.5 NHS ester

目录号: V43456 纯度: ≥98%
Sulfo-Cy7.5 NHS 酯是一种近红外水溶性(H2O 溶性)亲水性染料,也是用于胺改性的 NHS 酯。
Sulfo-Cy7.5 NHS ester CAS号: 2736437-44-6
产品类别: New3
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
磺基-Cy7.5 NHS酯是一种近红外水溶性亲水性染料,也是一种用于胺修饰的NHS酯。磺基-Cy7.5 NHS酯含有三甲基炔桥,并具有连接臂,可用于连接蛋白质、肽和其他分子。磺基-Cy7.5 NHS酯可用于近红外成像应用的研究。
磺基-Cy7.5 NHS酯(CAS号:2736437-44-6)是一种近红外(NIR)水溶性菁染料,其与N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯反应基团偶联。该化合物专门用于蛋白质、肽、抗体和其他含胺生物分子的胺基修饰。NHS酯在中性至弱碱性pH条件下能高效且特异性地与伯胺(例如赖氨酸侧链或N端)反应,形成稳定的酰胺键。其分子量为1104.29 g/mol,化学式为C49H50KN3O16S4。其激发/发射最大值分别为778/797 nm(近红外区)。
生物活性&实验参考方法
靶点
Sulfo-Cy7.5 NHS ester is not a pharmaceutical drug and does not bind to a biological receptor; it is a chemical labeling reagent. Its target is primary amine groups (-NH2) present on proteins, peptides, and antibodies. Upon conjugation, the fluorescent dye becomes covalently attached to the target molecule, enabling its visualization and tracking in biological systems. The sulfonate groups confer high water solubility, which reduces nonspecific binding and improves handling in aqueous buffers.
体外研究 (In Vitro)
在体外,磺基-Cy7.5 NHS酯可用于对纯化的蛋白质、抗体和肽进行荧光标记。NHS酯基团在温和条件下与伯胺具有很高的反应活性,形成稳定的酰胺键。近红外荧光(激发/发射波长778/797 nm)使其能够深入组织并最大限度地降低背景自发荧光,因此特别适用于活细胞成像和体内成像研究。标记的生物分子保持其生物活性,适用于多种应用,包括蛋白质印迹、酶联免疫吸附试验(ELISA)、流式细胞术和荧光显微镜。
体内研究 (In Vivo)
在体内,磺基-Cy7.5 NHS酯并非直接给药,而是用于预先标记生物分子(例如抗体、肽、纳米颗粒),然后将这些标记后的生物分子注射到动物体内,用于近红外荧光成像研究。磺基确保了良好的水溶性并减少了聚集,而近红外荧光团则能够对活体小鼠体内的组织分布、肿瘤靶向和生物分布进行非侵入性成像。长波长最大限度地减少了血红蛋白和水的光散射和吸收,从而实现了高达1-2厘米的成像深度。这对于追踪药物递送、可视化肿瘤边界以及评估临床前模型中的治疗效果具有重要价值。
酶活实验
对于非细胞标记实验,采用标准方案将磺基-Cy7.5 NHS酯偶联到目标蛋白上。将目标蛋白(例如,IgG抗体,2-10 mg/mL)溶于PBS缓冲液(pH 7.4)或0.1 M碳酸氢钠缓冲液(pH 8.5)中。将染料溶解于无水DMSO中,配制成10 mM的浓度。向蛋白溶液中加入10-20倍摩尔过量的染料,并轻轻混匀。反应在室温下避光孵育60分钟,或在4℃下过夜。未偶联的染料通过尺寸排阻色谱(例如,Sephadex G-25)或透析去除。使用分光光度计分别在280 nm(蛋白)和778 nm(染料)处测量吸光度,计算标记度(DOL)。
细胞实验
对于体外细胞实验,将细胞接种于玻璃底培养皿中,并使其过夜贴壁。向培养基中加入预标记蛋白(例如,Sulfo-Cy7.5标记的抗EGFR抗体,10 ug/mL),并在37℃下孵育30-60分钟。对于活细胞成像,用PBS洗涤细胞三次以去除未结合的标记抗体,并在不含酚红的培养基中培养。使用配备785 nm激光器和800-830 nm发射滤光片的共聚焦显微镜采集荧光图像。对于固定细胞研究,在成像前用4%多聚甲醛固定细胞。由于近红外范围内的背景自发荧光极低,信噪比通常很高。
动物实验
在体内动物实验中,使用磺基-Cy7.5 NHS酯制备的抗体-染料偶联物经尾静脉注射给荷瘤小鼠(例如,皮下移植表达靶抗原的肿瘤异种移植瘤的裸鼠)。小鼠接受50-200 μg标记抗体(浓度0.5-2 mg/mL)。使用2%异氟烷进行麻醉,并在注射后不同时间点(1、6、12、24、48、72小时)使用配备745 nm激发光和800 nm发射光滤光片的体内成像系统进行近红外荧光成像。通过测量肿瘤和主要器官(肝脏、肾脏、脾脏、肺脏、心脏)中的荧光强度来评估标记抗体的生物分布。
药代性质 (ADME/PK)
磺基-Cy7.5 NHS酯是一种水溶性近红外染料,其最大激发波长为778 nm,最大发射波长为797 nm。它具有高达222,000 M⁻¹cm⁻¹的消光系数和0.21的荧光量子产率。由于NHS酯基团在水溶液中易水解,因此该染料应在使用前立即溶于DMSO中,并在1-2小时内加入蛋白质溶液中,以获得最佳的偶联效率。标记后的蛋白质应在4℃或-80℃下保存,长期保存时可加入甘油(50%)等防腐剂。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
NHS酯基团具有化学活性,直接接触可引起皮肤和眼睛刺激。处理该化合物时,应遵循标准化学品安全操作规程:佩戴手套、实验服和护目镜。避免吸入粉尘。溶液中的染料应避光保存,以防止光漂白。NHS酯水解生成低毒性的N-羟基琥珀酰亚胺。该化合物不适用于人类治疗或诊断用途,应作为研究用化学品处理。目前尚无具体的急性毒性数据。
参考文献

[1]. Ultrafast, Ultrasensitive Detection and Imaging of Single Cardiac Troponin-T Molecules. ACS Sens. 2020 Nov 25;5(11):3576-3583.

其他信息
磺基-Cy7.5 NHS酯因其优异的水溶性和近红外荧光特性,成为体内成像和流式细胞术的常用选择。其近红外荧光特性可最大限度地减少组织自发荧光,并实现深层组织渗透。三磺酸化结构可防止其在生物体液中聚集,并减少与细胞膜的非特异性结合,从而提高成像实验的信噪比。该染料常用于荧光引导手术、肿瘤成像以及临床前研究中药物递送系统的评估。本产品仅供研究使用,不得用于临床诊断或治疗。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C49H52KN3O16S4
分子量
1106.30599021912
精确质量
1103.171
CAS号
2736437-44-6
PubChem CID
171975657
外观&性状
Light green to green solid powder
tPSA
327
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
17
可旋转键数目(RBC)
13
重原子数目
73
分子复杂度/Complexity
2770
定义原子立体中心数目
0
SMILES
CC1(C(=[N+](CCCCCC(=O)ON2C(CCC2=O)=O)C2C=CC3=C(C=C(S([O-])(=O)=O)C=C3C1=2)S(O)(=O)=O)C=CC1CCCC(=CC=C2N(C3C=CC4=C(C=C(S(O)(=O)=O)C=C4C=3C2(C)C)S(O)(=O)=O)C)C=1)C.[KH]
InChi Key
HDBJLDCQQJVKRA-UHFFFAOYSA-M
InChi Code
InChI=1S/C49H51N3O16S4.K/c1-48(2)41(50(5)37-17-15-33-35(46(37)48)25-31(69(56,57)58)27-39(33)71(62,63)64)19-13-29-10-9-11-30(24-29)14-20-42-49(3,4)47-36-26-32(70(59,60)61)28-40(72(65,66)67)34(36)16-18-38(47)51(42)23-8-6-7-12-45(55)68-52-43(53)21-22-44(52)54;/h13-20,24-28H,6-12,21-23H2,1-5H3,(H3-,56,57,58,59,60,61,62,63,64,65,66,67);/q;+1/p-1
化学名
potassium;(2Z)-3-[6-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxy-6-oxohexyl]-1,1-dimethyl-2-[(2Z)-2-[3-[(E)-2-(1,1,3-trimethyl-6,8-disulfobenzo[e]indol-3-ium-2-yl)ethenyl]cyclohex-2-en-1-ylidene]ethylidene]benzo[e]indole-6,8-disulfonate
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~50 mg/mL (~45.28 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (1.13 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 12.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;再向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (1.13 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 12.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.9039 mL 4.5195 mL 9.0391 mL
5 mM 0.1808 mL 0.9039 mL 1.8078 mL
10 mM 0.0904 mL 0.4520 mL 0.9039 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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