Tamibarotene   中文名称: 他米巴罗汀

Retinoic acid receptor α (RARα)

在 T 细胞淋巴瘤细胞中，他米巴罗汀 (20, 40 μM) 抑制与细胞周期相关的基因的表达。当将他米巴罗汀 (5 μM) 添加到 RARA 过表达细胞中时，与 RARAlow 细胞相比，它显着增强了 RARE 活性。此外，由于 RARAwt 过度表达，用他米巴罗汀治疗可增强 CDK2、CDK4 和 CDK6 的抑制程度 [1]。他米巴罗汀直接抵消经转化生长因子-β1 处理的真皮成纤维细胞的促纤维化表型，抑制内皮细胞中 ICAM-1 的表达，并在体外刺激 M1 巨噬细胞的发育 [2]。在 VSMC 中，他米巴罗汀 (4 μM) 剂量依赖性地增加 apelin mRNA 和蛋白质水平。由于与预先结合到 apelin 启动子的 TCE 位点的 KLF5 和 Sp1 相互作用，RARα（视黄酸受体 α）在他米巴罗汀刺激期间被招募到 apelin 启动子。然后，该转录激活复合物触发 apelin 表达。 VSMC 升高。通过直接与 apelin 启动子上的 TCE 结合，KLF5 和 Sp1 共同介导他米巴罗汀诱导的 apelin 表达 [4]。

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Am80抑制CD4+T细胞中IL-4、IL-17A和IFN-γ的产生。 Am80抑制巨噬细胞的M2极化。 Am80降低真皮微血管内皮细胞ICAM-1的表达。 Am80直接改善TGF-β诱导的人皮肤成纤维细胞纤维化表型[2]。

在用博来霉素 (BLM) 治疗的小鼠和紧肤 1 小鼠中，Tamibarotene (Am80)/他米巴罗汀（1 mg/kg/天）分别显着减少真皮和皮下纤维化。他米巴罗汀持续显着抑制 BLM 治疗小鼠病变皮肤中与组织纤维化相关的几种分子的表达，包括转化生长因子-β1、结缔组织生长因子、IL-4、IL-10、IL-13、IL- 17A，肿瘤坏死因子-α、IFN-γ和单核细胞趋化蛋白1。此外，在用BLM治疗的小鼠的引流淋巴结中，他米巴罗汀增加了幼稚T细胞的比例，并降低了CD4+ T中效应T细胞的比例细胞[2]。与未接受治疗的小鼠相比，患有牙周炎的小鼠在接受他米巴罗汀（2.5 mg/kg，口服）后血清中 AST、ALT 或 ALP 水平没有表现出任何明显的变化。他米巴罗汀可减少牙龈卟啉单胞菌诱导的小鼠破骨细胞的数量并增强牙槽骨吸收。与 EPD 小鼠相比，他米巴罗汀显着提高了 CD4+ Foxp3+ Treg 细胞的百分比。此外，他米巴罗汀成功降低了 P 中 Th17 (CD4+ROR-γt+) 细胞的表达。CLN 和牙龈组织被牙龈线虫感染[3]。当给予他米巴罗汀（1 mg/kg，口服）时，动脉球囊损伤的大鼠表达更多 apelin，这与培养的 VSMC 的研究结果一致 [4]。服用他米巴罗汀（1 mg/kg/天）后，老年 SAMP8 小鼠的海马 ADAM10 水平有所改善。服用他米巴罗汀后，Hes5和Ki67恢复，空间工作记忆增强[5]。

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他米巴罗汀（Am80）是一种合成维甲酸，可调节各种自身免疫性和炎症性疾病及其动物模型的病理过程。我们在这里使用动物模型研究了他米巴罗汀（Am80）对系统性硬化症的治疗潜力。Am80分别显著减轻了博莱霉素（BLM）治疗的小鼠和皮肤紧绷1小鼠的皮肤和皮下纤维化。一致地，他米巴罗汀（Am80）显著抑制了BLM治疗小鼠皮损皮肤中与组织纤维化相关的各种分子的表达，包括转化生长因子β1、结缔组织生长因子、IL-4、IL-10、IL-13、IL-17A、肿瘤坏死因子-α、IFN-γ和单核细胞趋化蛋白1。此外，Am80降低了BLM治疗小鼠引流淋巴结中CD4+T细胞中效应T细胞的比例，同时增加了幼稚T细胞的数量。[2]

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他米巴罗汀（Am80）是一种合成的视黄酸受体（RAR），是一种对RARα和RARβ具有高度特异性的激动剂。维甲酸激动剂已被证明可以抑制Th17细胞极化，并在炎症性疾病过程中增强叉头盒P3（Foxp3）的表达。本研究的目的是评估Am80在口腔微环境中调节牙周炎免疫反应方面以前未被认识的作用。通过口腔感染牙龈卟啉单胞菌W83诱导小鼠牙周炎实验模型。我们的结果表明，Am80有效地抑制了牙龈卟啉单胞菌W83诱导的牙槽骨吸收，并减少了破骨细胞的数量。我们阐明，这些影响与牙龈组织、颈部淋巴结和脾脏中CD4（+）类维生素A相关孤儿受体（ROR）γt（+）细胞百分比的降低和CD4（+。此外，在牙龈卟啉单胞菌感染的小鼠中，Am80下调了白细胞介素-17A（IL-17A）、核因子κβ配体受体激活剂（RANKL）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平。同时，Am80上调了牙龈组织和CLN中IL-10和转化生长因子β1（TGF-β1）的表达水平。我们的研究结果表明，Am80可以防止牙周骨吸收，主要是通过调节口腔微环境中的免疫反应，并证明了Am80作为预防牙周炎的新临床策略的潜力。[3]

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一项体内研究表明，他米巴罗汀（Am80）增加了大鼠球囊损伤动脉中apelin的表达，这与培养的VSMCs的结果一致。[4]

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视黄酸（RA，一种维生素a代谢产物）受体（RAR）是一种转录因子。维生素A/RA给药可改善小鼠模型中阿尔茨海默病（AD）和与年龄相关的记忆/学习衰退。最近，一种含去整合素和金属蛋白酶结构域的蛋白质10（ADAM10）被鉴定为RA介导的抗AD机制中的关键分子。我们研究了长期服用RAR激动剂Tamibarotene（Am80）对衰老加速小鼠（SAMP8）ADAM10表达的影响。此外，我们估计了ADAM10介导的淀粉样前体蛋白（APP）、淀粉样β蛋白（Aβ）和分裂毛/增强子（Hes）表达的变化。在这些小鼠中还评估了空间工作记忆和海马增殖标志物（Ki67）的水平。13个月龄SAMP8小鼠海马ADAM10 mRNA和蛋白表达显著降低；Am80给药后，它们的表达显著改善。此外，Am80给药后，Hes5和Ki67的表达水平恢复，工作记忆的恶化得到抑制，而APP和Aβ水平保持不变。我们的研究结果表明，Am80给药通过激活海马ADAM10Notch-Hes5增殖通路有效改善了痴呆症[5]。

siRNA转染[4]
Sigma-Aldrich设计合成了针对大鼠RARα和KLF5序列的siRNA，Invitrogen设计合成了对抗大鼠apelin序列的siRNA。使用si-NS（非特异性siRNA）和Sp1特异性siRNA。针对RARα的siRNA序列（si-RARα）为5′-CUCACAACGUGUCUCU-3′和5′-AGACACGUGUGUCUG-3′。针对apelin（si-apelin）的siRNA序列为5′-GGCUAGAGAGCAACAUTT-3′和5′-AUGUAGUCUCUCUCUACCTT-3′。按照制造商的说明，使用Lipofectamine™试剂进行输血。转染后24小时，用或不用他米巴罗汀（Am80）（4μM）处理VSMCs。然后收获细胞并用于PCR、qRT-PCR和蛋白质印迹分析。

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EMSA[4]
根据制造商的建议，使用LightShift化学发光EMSA试剂盒进行EMSA。简而言之，合成了一种含有apelin启动子TCE-1位点的生物素标记探针。序列如下：5′-CTCCTGCCTCCCCCCCCCCCCCCCCTCTCTCTCTTCTAATGACCAC-3′。将用Tamibarotene (Am80)处理24小时的VSMCs的总共5μg核蛋白与生物素标记的探针在室温下孵育30分钟，装载到6%的非变性聚丙烯酰胺凝胶上，在100 V下运行40分钟，然后电转移到尼龙膜上。通过暴露于254 nm紫外线辐射15分钟，将探针交联到膜上。最后，根据制造商的说明，通过化学发光检测生物素标记的探针。为了特异性鉴定结合复合物中的KLF5、RARα和Sp1蛋白，将2mg抗KLF5、抗RARα及抗Sp1抗体加入到结合反应混合物中，并在室温下孵育30分钟，然后加入探针。

萤光素酶报告检测[1]
RARE报告子和pCI空载体或pCI-RARA（野生型）通过电穿孔共转染到HuT78细胞中。恢复24小时后，用含有2%炭剥离FBS的RPMI中的他米巴罗汀（Am80）或载体（二甲亚砜）处理转染细胞24小时。如前所述，使用Centro XS3 LB 960微孔板光度计，按照制造商的协议，使用双荧光素酶报告分析系统测量荧光素酶表达。每种裂解物的总蛋白浓度用于归一化。

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转录组分析[1]
Mac-1、Karpas 299和HuT78细胞在含有2%炭剥离FBS的培养基中用他米巴罗汀（Am80）（0μM、20μM或40μM）、ATRA（0μM、10μM或20μM）或贝沙罗汀。如前所述进行RNA测序。简而言之，在提取总RNA后，构建mRNA文库，并在Illumina HiSeq仪器上进行100碱基对配对末端测序。测序数据被映射到hg19，并保留了至少一个样本中至少100个读数的基因进行分析。每种药物的剂量依赖性效应是通过配对t检验（EdgeR）进行中低和高中比较来确定的。如果基因在两次比较中都符合倍数变化和P值标准（log2倍数变化≥0.5或≤-0.5，P值≤0.05），则认为基因表达不同。GSEA是在0μM与40μM AM80比较的折叠变化符号和对数（P值）的乘积生成的排名数据集上进行的。使用Ingenuity Pathway analysis软件对差异表达的基因进行通路分析。

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巨噬细胞极化[2]
如前所述，从野生型小鼠制备巯基乙酸诱导的腹腔巨噬细胞（Matsumoto等人，2007）。在存在或不存在他米巴罗汀（Am80）的情况下，用20ng/ml的IL-4刺激24小时，将培养过夜的腹膜巨噬细胞极化为M2巨噬细胞。从培养的细胞中分离总RNA，并通过定量实时逆转录PCR进行分析。此外，巨噬细胞用抗CD204和抗CD206抗体染色，并用流式细胞术定量。

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THP-1细胞的细胞培养[2]
THP-1细胞购自美国典型培养物保藏中心。处于对数生长期的THP-1细胞用100ng/ml的IFN-γ预处理6小时，并在有或没有他米巴罗汀（Am80）的情况下用100ng/ml脂多糖刺激24小时。如上所述，从细胞裂解物中分离出总RNA。

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人皮肤微血管内皮细胞的细胞培养[2]
使用人皮肤微血管内皮细胞。在用0.5 ng/ml TNF-α刺激前1小时，用指定浓度的他米巴罗汀（Am80）或等量的DMSO处理人皮肤微血管内皮细胞。将细胞再培养24小时。如上所述，从细胞裂解物中分离总RNA。

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免疫印迹[2]
在有或没有他米巴罗汀（Am80）的情况下，用TGF-β1刺激人皮肤成纤维细胞24小时。制备细胞裂解物并进行免疫印迹，如前所述（Noda等人，2014）。

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细胞、细胞培养和处理[4]
雄性Sprague-Dawley大鼠（80-100g）用氯胺酮（60mg/kg体重）和甲苯噻嗪（5mg/kg体重）腹腔麻醉，并如前所述从胸主动脉提取VSMCs。接下来，在麻醉下通过放血杀死大鼠。VSMCs在37°C、5%CO2的加湿气氛中，在添加了10%FBS的DMEM（Dulbecco改良Eagle培养基）中维持。本研究中使用的细胞传代三到六代。在他米巴罗汀（Am80）刺激之前，VSMCs在无血清DMEM中维持24小时。然后将其在含有2%FBS和4μMTamibarotene（Am80）的DMEM中培养指定时间。

小鼠：感染模型中，小鼠每日自由摄取10 mL磺胺甲噁唑和甲氧苄啶的口服混悬液（溶于去离子水中），持续10天，以减少原有菌群并促进牙龈卟啉单胞菌W83的定植。抗生素治疗结束后4天，通过口服接种建立牙周感染模型。将10¹⁰ CFU的牙龈卟啉单胞菌悬浮于100 μL 4%羧甲基纤维素（CMC）溶液中，持续7天。首次口服接种后4周处死小鼠。他米巴罗汀（2.5 mg/kg）悬浮于0.5%羧甲基纤维素溶液中，每日以0.1 mL/10 g体重的剂量经食道灌胃给药。在诱导牙周炎前 1 小时给予他米巴罗汀，然后按照方案每日给药，直至第 28 天。患有牙周疾病的对照组小鼠接受相同体积的 0.5% 羧甲基纤维素溶液。每 3 天测量一次每只小鼠的体重。

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\n\nTSK1 小鼠 [2]
\n使用 TSK1 小鼠。TSK1 小鼠的基因分型采用 PCR 方法，引物如下（正向引物 5′-GTTGGCAACTATACCTGCAT-3′，反向引物 5′-CCTTTCCTGGTAACATAGGA-3′）。对TSK1小鼠进行他米巴罗汀（Am80）治疗，从3周龄开始，至7周龄结束。\n

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\n\n他米巴罗汀（Am80）治疗[2]
\n将Am80与商业啮齿动物饲料混合制成饲料颗粒。根据Miwako和Shudo（2009）的方法，每天给小鼠服用约1 mg/kg的Am80。给药在皮下注射博来霉素（BLM）或磷酸盐缓冲液（PBS）前1周开始。\n\n牙周炎小鼠模型[3]
\n牙周感染采用牙龈卟啉单胞菌W83诱导，方法如前所述，并稍作修改。将牙龈卟啉单胞菌W83接种于添加了维生素K1（10 μg/mL）、血红素（0.25%）和无菌脱纤维绵羊血（5%）的脑心浸液（BHI）琼脂培养基上。将细菌置于厌氧培养箱中，在37℃、10% CO2、5% H2和85% N2的混合气体条件下培养7天。收集细菌，并在37℃下于完全BHI液体培养基中培养24小时，然后在对数生长期用于口腔感染实验。
\n感染实验中，小鼠每日自由摄取10 mL磺胺甲噁唑和甲氧苄啶的口服混悬液，以减少原有菌群并促进牙龈卟啉单胞菌W83的定植。抗生素治疗结束后4天，通过口服接种法建立牙周感染模型，接种物为10¹⁰ CFU的牙龈卟啉单胞菌（P. gingivalis），悬浮于100 μL 4%羧甲基纤维素（CMC）溶液中，持续7天。首次口服接种后4周处死小鼠。\n

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\n\n药物治疗[3]
\n他米巴罗汀（Am80）（2.5 mg/kg）悬浮于0.5%羧甲基纤维素溶液中。每日经食道灌胃给药，剂量为0.1 mL/10 g体重。Am80在诱导牙周炎前1小时给药，之后每日按方案给药，直至第28天。患有牙周疾病的对照组小鼠接受相同体积的0.5%羧甲基纤维素溶液。每只小鼠的体重每3天测量一次。\n\n

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\n\n球囊损伤模型[4]
\n雄性Sprague-Dawley大鼠腹腔注射氯胺酮（60 mg/kg体重）和赛拉嗪（5 mg/kg体重）进行麻醉。简而言之，在颈前部正中切口后，分离左侧颈动脉，并进行远端切口。清除血液后，将直径为0.13 mm的球囊导管轻轻推进左侧颈总动脉。用生理盐水充盈球囊以扩张颈总动脉，然后将其拉回至颈外动脉。拔出导管，结扎颈外动脉近端，移除动脉夹后恢复血流。所有操作均由同一位操作者完成。 他米巴罗汀 (Am80) 以 1 mg/kg 体重/天的剂量口服给药，从球囊损伤前 1 天开始，持续 14 天。损伤后第 14 天，在麻醉状态下通过放血处死大鼠，并收集颈动脉用于 qRT-PCR 或免疫组织化学分析。\n

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\n\n实验动物为雄性 SAMP8 和 SAMR1 小鼠（日本 SLC 公司，静冈县，日本），实验开始时年龄为 2-13 个月。动物饲养于 12:12 小时光暗循环（上午 9:00 开灯）下，环境温度为 23 ± 1 °C，并可自由摄取食物和水。将他米巴罗汀(Am80)与对照饲料(MF，360 kcal/100 g；Oriental Yeast，东京，日本)混合，配制成浓度为0.001% (w/w)的他米巴罗汀(Am80)饲料。对于体重40 g、日采食量4 g的小鼠，他米巴罗汀(Am80)的浓度相当于1 mg/kg/天。在进行放射迷宫测试前，每组小鼠分别饲喂含Am80饲料和对照饲料4周。Am80处理组未观察到明显的不良反应。[5]

蛋白质结合
超过 99%，主要与血清白蛋白结合。

[1]. Retinoic acid receptor alpha drives cell cycle progression and is associated with increased sensitivity to retinoids in T-cell lymphoma. Oncotarget. 2017 Apr 18;8(16):26245-26255.

[2]. Tamibarotene Ameliorates Bleomycin-Induced Dermal Fibrosis by Modulating Phenotypes of Fibroblasts, Endothelial Cells, and Immune Cells. J Invest Dermatol. 2016 Feb;136(2):387-98.

[3]. Tamibarotene modulates the local immune response in experimental periodontitis. Int Immunopharmacol. 2014 Dec;23(2):537-45.

[4]. Synthetic retinoid Am80 up-regulates apelin expression by promoting interaction of RARα with KLF5 and Sp1 in vascular smooth muscle cells. Biochem J. 2013 Nov 15;456(1):35-46.

[5]. The retinoic acid receptor agonist Am80 increases hippocampal ADAM10 in aged SAMP8 mice. Neuropharmacology. 2013 Sep;72:58-65.

他米巴罗汀是一种二羧酸单酰胺，由对苯二甲酸的一个羧基与5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氢萘-2-胺的氨基缩合而成。它是一种抗肿瘤药物和维甲酸受体α/β激动剂。它属于四氢萘类化合物，是一种类维生素A和二羧酸单酰胺。其功能与4-氨基甲酰苯甲酸和对苯二甲酸相关。
他米巴罗汀是一种用于治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）的新型合成类维生素A。他米巴罗汀目前已在日本获批用于治疗复发性急性早幼粒细胞白血病（APL），并正在美国进行临床试验。
他米巴罗汀是一种口服有效的合成维甲酸类药物，旨在克服全反式维甲酸（ATRA）耐药性，并具有潜在的抗肿瘤活性。作为一种特异性维甲酸受体（RAR）α/β激动剂，他米巴罗汀在体外诱导HL-60（人早幼粒细胞白血病）细胞系分化和凋亡的效力约为ATRA的十倍。由于其与细胞维甲酸结合蛋白（CRABP）的亲和力较低，与ATRA相比，他米巴罗汀可能具有更持久的血浆浓度。此外，该药物的毒性可能低于全反式维甲酸（ATRA），部分原因是其对真皮上皮细胞中主要的维甲酸受体——RAR-γ受体缺乏亲和力。

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药物适应症
已研究用于治疗白血病（未具体说明）。

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作用机制
他米巴罗汀是维甲酸受体α/β的特异性激动剂，可能与维甲酸X受体（RXR）结合。

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药效学
他米巴罗汀是一种新型合成维甲酸类药物，近期在日本获批用于治疗复发或难治性急性早幼粒细胞白血病（APL）。它是维甲酸受体α/β的特异性激动剂。与用于一线治疗急性早幼粒细胞白血病 (APL) 的天然类维生素A——全反式维甲酸 (ATRA) 相比，他米巴罗汀的化学性质更稳定，且作为早幼粒细胞白血病细胞分化诱导剂的效力是ATRA的数倍。与ATRA每日给药后血浆浓度显著下降不同，他米巴罗汀的血浆浓度能够维持稳定，这可能是由于其与细胞维甲酸结合蛋白的亲和力较低。此外，临床试验表明，他米巴罗汀的不良反应也比ATRA更轻。

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外周T细胞淋巴瘤 (PTCL) 是一种侵袭性非霍奇金淋巴瘤，接受标准治疗后预后通常较差。迄今为止，已知的候选治疗靶点寥寥无几。维甲酸受体α (RARA) 是一种转录因子，能够调节细胞对类维生素A的生长和分化反应。尽管维甲酸类药物已被用于治疗某些皮肤T细胞淋巴瘤（CTCL），但其作用机制以及RARA在CTCL和其他成熟T细胞淋巴瘤中的作用仍知之甚少。在发现一例携带RARAR394Q突变的外周T细胞淋巴瘤（PTCL）后，我们试图阐明RARA在T细胞淋巴瘤细胞中的作用。在RARA低表达细胞系中，过表达野生型RARA或RARAR394Q显著促进了细胞生长；而在RARA高表达细胞中，敲低RARA则诱导G1期阻滞并降低细胞周期蛋白依赖性激酶CDK2/4/6的表达。维甲酸类药物AM80（他米巴罗汀）和全反式维甲酸均能剂量依赖性地抑制细胞生长、诱导G1期阻滞并下调CDK2/4/6的表达。转录组数据显示，下调的基因富集于细胞周期和G1/S期转换相关基因。最后，RARA 过表达增强了对维甲酸类药物的化疗敏感性。总之，RARA 驱动 T 细胞淋巴瘤中细胞周期蛋白依赖性激酶的表达、G1/S 期转换和细胞生长。合成维甲酸类药物以剂量依赖的方式抑制这些功能，并且在 RARA 高表达的细胞中最为有效，这表明 RARA 可能代表某些 PTCL 的治疗靶点。[1]

C22H25NO3

351.44

351.183

C, 75.19; H, 7.17; N, 3.99; O, 13.66

94497-51-5

108143

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

449.6±45.0 °C at 760 mmHg

231-232ºC

225.7±28.7 °C

0.0±1.2 mmHg at 25°C

1.593

6.48

66.4

2

3

3

26

546

0

O=C(O)C1=CC=C(C(NC2=CC=C3C(C)(C)CCC(C)(C)C3=C2)=O)C=C1

MUTNCGKQJGXKEM-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C22H25NO3/c1-21(2)11-12-22(3,4)18-13-16(9-10-17(18)21)23-19(24)14-5-7-15(8-6-14)20(25)26/h5-10,13H,11-12H2,1-4H3,(H,23,24)(H,25,26)

4-[(5,5,8,8-tetramethyl-6,7-dihydronaphthalen-2-yl)carbamoyl]benzoic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。