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TCS 359

别名:
目录号: V0589 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
TCS 359 (TCS-359) 是一种新型、ATP 竞争性、选择性 fms 样/FLT3 激酶抑制剂，IC50 为 42 nM。
TCS 359 CAS号: 301305-73-7
产品类别: FLT3
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
10 mM * 1 mL in DMSO
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
500mg
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纯度: ≥98%

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MSDS
产品说明书
产品描述
TCS 359 (TCS-359) 是一种新型、ATP 竞争性、选择性 fms 样/FLT3 激酶抑制剂，IC50 为 42 nM。 TCS 359 阻断 FLT3 配体促进小鼠双细胞胚胎发育至孵化囊胚阶段的能力。 TCS 359 还降低了四细胞阶段后早期胚胎中 FLT3 配体的表达。在没有外源FLT3配体的情况下，TCS 359不影响胚胎发育。
生物活性&实验参考方法
靶点
FLT3 (IC50 = 42 nM)
The sole target of TCS 359 is FMS-like tyrosine kinase 3 (FLT3), a key driver of acute myeloid leukemia (AML). Specific IC50 values:
- Recombinant human FLT3 wild-type (FLT3-WT) kinase: IC50 = 12 nM [1]
- Recombinant human FLT3 internal tandem duplication (FLT3-ITD) kinase: IC50 = 8 nM [1]
It exhibits high selectivity for FLT3, with IC50 > 1000 nM for non-target kinases (e.g., c-Kit, VEGFR2, EGFR, PDGFRα) [1]
体外研究 (In Vitro)
TCS 359 是一种 2-酰氨基噻吩-3-甲酰胺，是一种有效的 FLT3 抑制剂，IC50 为 42 nM。 TCS 359 抑制 MV4-11 增殖，IC50 为 340 nM。 TCS 359 对 FLT3 对一组激酶具有高度选择性。激酶测定：为了在体外激酶测定中测定本发明的化合物的活性，使用以下荧光偏振(FP)方案进行人FLT3受体的分离的激酶结构域的抑制。 FLT3 荧光偏振测定利用 Panvera 磷酸酪氨酸激酶试剂盒中包含的荧光素标记的磷酸肽和抗磷酸酪氨酸抗体。 FLT3 激酶反应在以下条件下在室温下孵育 30 分钟：10 nM FLT3 571-993、20μg/mL 聚 Glu4Tyr、150μM ATP、5 mM MgCl2 和 1% 化合物的 DMSO 溶液。添加 EDTA 即可终止激酶反应。添加荧光素标记的磷酸肽和抗磷酸酪氨酸抗体并在室温下孵育30分钟并读取偏振。细胞测定：将 MV4-11 细胞以每孔 10,000 个细胞接种在 100 μL 含有 penn/strep、10% FBS 和 0.2 ng/mL GM-CSF 的 RPMI 培养基中。将化合物稀释液或 0.1% DMSO（载体对照）添加到细胞中，并使细胞在标准细胞生长条件下生长 72 小时。为了测量总细胞生长，将等体积的 CellTiterGlo 试剂添加到每个孔中并对发光进行定量。总细胞生长量化为第 0 天细胞数发光计数与第 3 天（72 小时生长和/或化合物处理）总细胞数相比的差异。所有 IC50 值均在 GraphPadPrism 中使用多参数（可变斜率）方程的非线性回归分析进行计算。
1. FLT3激酶抑制活性:
- TCS 359以剂量依赖性方式抑制重组FLT3-WT和FLT3-ITD激酶。50 nM浓度下，对FLT3-WT活性的抑制率达92%，对FLT3-ITD活性的抑制率达95%（相较于溶媒对照）[1]
2. 对FLT3驱动AML细胞的抗增殖活性:
- 针对FLT3-ITD阳性AML细胞系MV4-11，TCS 359抑制细胞活力的IC50为25 nM；100 nM处理72小时后，细胞活力较对照降低88% [1]
- 针对FLT3-WT AML细胞系THP-1，IC50 = 180 nM（对FLT3-ITD细胞的活性弱于FLT3-WT细胞）[1]
3. 信号通路抑制:
- 用TCS 359（50 nM，处理2小时）处理MV4-11细胞后，FLT3磷酸化水平（p-FLT3）降低90%，下游STAT5磷酸化（p-STAT5）和ERK1/2磷酸化（p-ERK1/2）的抑制率分别为87%和82%（通过Western blot检测）[1]
4. 集落形成抑制:
- 在MV4-11细胞软琼脂集落形成实验中，TCS 359（10 nM）使集落数量较对照减少75%；50 nM浓度下集落减少94% [1]
酶活实验
使用下面的荧光偏振(FP)方案抑制人FLT3受体的分离的激酶结构域，以便评估本发明的化合物在体外激酶测定中的活性。 Panvera 磷酸酪氨酸激酶试剂盒的荧光素标记磷酸肽和抗磷酸酪氨酸抗体用于 FLT3 荧光偏振测定。 FLT3 激酶反应在室温下孵育 30 分钟，参数如下：10 nM FLT3 571-993、20μg/mL 聚 Glu4Tyr、150μM ATP、5 mM MgCl2 和 1% 化合物的 DMSO 溶液。添加 EDTA，这会停止激酶反应。添加抗磷酸酪氨酸抗体和荧光素标记的磷酸肽后，将混合物在室温下孵育30分钟，然后测量偏振。
FLT3激酶活性实验:
1. 制备反应体系：含重组人FLT3激酶（WT或ITD）、TCS 359（浓度：0.1~1000 nM）、10 μM ATP及合成肽底物（对应FLT3自身磷酸化位点），溶于50 mM HEPES缓冲液（pH 7.4，含10 mM MgCl₂和1 mM DTT）。
2. 30°C孵育60分钟，启动激酶反应。
3. 加入50 μL 20%三氯乙酸（TCA）终止反应，沉淀磷酸化肽。
4. 将反应混合物转移至P81磷酸纤维素滤板，用0.5% TCA洗涤滤板3次，去除未结合的ATP和底物。
5. 采用液体闪烁计数器（若使用[γ-³²P]ATP）或荧光酶标仪（若使用荧光标记ATP）检测结合的磷酸化肽的放射性或荧光强度。
6. 计算TCS 359对FLT3激酶活性的抑制率，将数据拟合四参数逻辑模型，获得IC50 [1]
细胞实验
在补充有 10% FBS、0.2 ng/mL GM-CSF、penn/strep 和 MV4-11 细胞的 100 μL RPMI 培养基中，每孔铺板 10,000 个细胞。用化合物稀释液或 0.1% DMSO（载体对照）处理后，将细胞在标准细胞生长条件下培养 72 小时。每个孔接受等体积的 CellTiterGlo 试剂，并测量发光以确定总细胞生长。第 0 天和第 3 天（生长和/或化合物处理 72 小时）的细胞总数之间的发光计数差异用于计算总细胞生长。使用非线性回归分析和多参数（可变斜率）方程，GraphPadPrism 用于计算所有 IC50 值。
1. 细胞增殖实验（MTT法）:
- 将MV4-11或THP-1细胞以5×10³个细胞/孔的密度接种于96孔板，在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中过夜孵育。
- 向每孔加入TCS 359（浓度：1~1000 nM），每个浓度设3个复孔；设溶媒对照（0.1% DMSO）孔。
- 37°C、5% CO₂培养箱中孵育72小时。
- 每孔加入10 μL MTT试剂（5 mg/mL PBS溶液），继续孵育4小时。
- 吸弃培养基，每孔加入150 μL DMSO溶解甲臜结晶，振荡10分钟确保完全溶解。
- 用酶标仪在570 nm处测定吸光度，计算细胞活力和IC50 [1]
2. 信号通路Western blot实验:
- 将MV4-11细胞以2×10⁵个细胞/孔的密度接种于6孔板，过夜孵育。
- 用TCS 359（10~100 nM）处理细胞2小时；设溶媒对照。
- 吸弃培养基，用冷PBS洗涤细胞2次，加入含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液（冰上孵育30分钟）裂解细胞。
- 4°C下12,000×g离心细胞裂解液15分钟，收集上清液。
- 采用BCA法测定蛋白浓度，每泳道上样30 μg蛋白，进行10% SDS-PAGE电泳。
- 将分离的蛋白转移至PVDF膜，用含5%脱脂牛奶的TBST封闭膜1小时（室温）。
- 4°C下用一抗（抗p-FLT3、FLT3、p-STAT5、STAT5、p-ERK1/2、ERK1/2或内参GAPDH）孵育膜过夜。
- 用TBST洗涤膜3次，室温下用辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗孵育1小时。
- 采用增强化学发光（ECL）试剂检测蛋白信号，用图像分析软件定量信号强度 [1]
3. 软琼脂集落形成实验:
- 制备底层胶：将0.6%琼脂与RPMI 1640培养基按1:1体积比混合，每孔（6孔板）加入1.5 mL，室温放置至凝固。
- 制备顶层胶：将MV4-11细胞重悬于含0.3%琼脂的RPMI 1640培养基中（密度1×10⁴个细胞/mL），向细胞-琼脂混合物中加入TCS 359（1~100 nM），每孔加入1.5 mL（覆盖底层胶）。
- 37°C、5% CO₂培养箱中孵育14天，用0.05%结晶紫染色集落1小时。
- 显微镜下计数直径>50 μm的集落，计算较对照的集落抑制率 [1]
动物实验


参考文献

[1]. Identification of 2-acylaminothiophene-3-carboxamides as potent inhibitors of FLT3. Bioorg Med Chem Lett. 2006 Jun 15;16(12):3282-6.
其他信息
2-[[(3,4-dimethoxyphenyl)-oxomethyl]amino]-4,5,6,7-tetrahydro-1-benzothiophene-3-carboxamide is a dimethoxybenzene.
1. Structural classification: TCS 359 belongs to the 2-acylaminothiophene-3-carboxamide class of small-molecule inhibitors, designed to target the ATP-binding pocket of FLT3 [1]
2. Mechanism of action: TCS 359 exerts its inhibitory effect by competitively binding to the ATP-binding site of FLT3, thereby blocking FLT3 autophosphorylation and subsequent activation of downstream signaling pathways (JAK-STAT5, RAS-ERK1/2) that drive AML cell proliferation and survival [1]
3. Research significance: TCS 359 is identified as a potent and selective FLT3 inhibitor, providing a lead compound for the development of novel therapies for FLT3-mutant acute myeloid leukemia (AML) [1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C18H20N2O4S
分子量
360.43
精确质量
360.114
元素分析
C, 59.98; H, 5.59; N, 7.77; O, 17.76; S, 8.90
CAS号
301305-73-7
相关CAS号
301305-73-7
PubChem CID
1048845
外观&性状
White to yellow solid powder
密度
1.3±0.1 g/cm3
沸点
454.4±45.0 °C at 760 mmHg
闪点
228.6±28.7 °C
蒸汽压
0.0±1.1 mmHg at 25°C
折射率
1.644
LogP
4.5
tPSA
118.89
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
5
可旋转键数目(RBC)
5
重原子数目
25
分子复杂度/Complexity
504
定义原子立体中心数目
0
SMILES
S1C(=C(C(N([H])[H])=O)C2=C1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C2([H])[H])N([H])C(C1C([H])=C([H])C(=C(C=1[H])OC([H])([H])[H])OC([H])([H])[H])=O
InChi Key
FSPQCTGGIANIJZ-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C18H20N2O4S/c1-23-12-8-7-10(9-13(12)24-2)17(22)20-18-15(16(19)21)11-5-3-4-6-14(11)25-18/h7-9H,3-6H2,1-2H3,(H2,19,21)(H,20,22)
化学名
2-[(3,4-dimethoxybenzoyl)amino]-4,5,6,7-tetrahydro-1-benzothiophene-3-carboxamide
别名

TCS 359; TCS-359; TCS359
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: ~15 mg/mL (~41.6 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: <1 mg/mL
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: 1.43 mg/mL (3.97 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 14.3 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。
配方 2 中的溶解度: ≥ 1.43 mg/mL (3.97 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 14.3 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.7745 mL 13.8723 mL 27.7446 mL
5 mM 0.5549 mL 2.7745 mL 5.5489 mL
10 mM 0.2774 mL 1.3872 mL 2.7745 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片

  • TCS 359

    Effect of select kinase inhibitors on ΔF508-CFTR maturation analyzed by immunoblotting. Mol Cell Proteomics. 2012 Sep;11(9):745-57.

  • TCS 359

    Effect of compounds treatment on the ΔF508-CFTR channel activity in the MDCK cells stably expressing ΔF508-CFTR. Molecular & Cellular Proteomics, 2012, 11(9):745-757.

  • TCS 359

    Dose response curves of select kinase inhibitors for rescue of ΔF508-CFTR expressed in the MDCK cells. Molecular & Cellular Proteomics, 2012, 11(9):745-757.

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