Tetrazolium Red

别名: 2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride; 298-96-4; Red tetrazolium; Uroscreen; Vitastain; Urocheck; TRIPHENYLTETRAZOLIUM CHLORIDE; Tetrzolium chloride; TPTZ; TTC 红四唑;氯化三苯基四氮唑;2,3,5-三苯基-2H-四唑翁氯化物;2,3,5-三苯基氯化四唑;氯化-2,3,5-三苯基四氮唑;四氮唑红;2,3,5-三苯基氯化四氮唑;三苯基氯化四唑;2,3,5-三苯基-2H-四唑氯;红四氮唑;2,3,5-氯化三苯基四氮唑;2,3,5-三苯基-2H-氯化四氮唑;2,3,5-三苯基-2H-四唑盐酸盐;2.3.5-氯化三苯基四氮唑 TTC;TTC红四唑;红曲红;红四氮唑(RT);红四氮唑(TTC);红四氮唑,AR;氯代三苯基四氮唑;氯代三苯基四氮唑(TTC);氯化三苯基四氮唑(TTC);2.3.5-三苯基氯化四氮唑;氯化三苯基四氮唑TTC
目录号: V31022 纯度: ≥98%
四唑红(2,3,5-氯化三苯基四唑;TPTZ)用于观察脱氢酶的活性。
Tetrazolium Red CAS号: 298-96-4
产品类别: New2
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
四唑红(2,3,5-氯化三苯基四唑;TPTZ; TTC)用于观察脱氢酶的活性。当接触氢气时,它会变成无色到红色。
生物活性&实验参考方法
靶点
TTC is reduced by mitochondrial dehydrogenases (specifically in viable cells) to formazan, serving as a metabolic marker for cellular viability; no affinity constants reported.[1]
体外研究 (In Vitro)
TTC被线粒体脱氢酶(特别是在活细胞中)还原为甲氮,作为细胞活力的代谢标志物;没有报告亲和力常数。[1]
体内研究 (In Vivo)
成年CD1/Thy1-YFP小鼠缺氧缺血(HI)卒中模型中,体内 TTC 灌注染色(甘露醇开放BBB后)区分梗死区(白色)与存活组织(红色),与神经元标志物丢失(DARPP32、MAP2)及HSP70上调相关。

新生P10小鼠中,TTC染色定量LPS致敏的HI损伤,72小时LPS预处理后梗死面积增大3.2倍(26.8% vs. 对照组8.4%;p<0.05),与成年神经保护作用相反。[1]
脑中动脉闭塞(MCAO)卒中成年猕猴模型中,2% TTC 37°C浸染30分钟精确界定6小时缺血后梗死区(未染色),与SDH/CCO酶活性丧失呈100%空间相关性(组织化学证实)。

定量分析显示TTC染色(28.4±3.7%)与线粒体酶检测(27.1±3.5%)的梗死体积无显著差异,验证TTC在灵长类中作为早期(6小时)梗死检测工具的可靠性。[2]
动物实验
甘露醇预处理:在 TTC 灌注前 30 分钟腹腔注射 1.4 M 甘露醇(成人 0.1 ml/g;新生儿 0.125 ml/g),以破坏血脑屏障。

TTC 灌注:在阿维丁/异氟烷麻醉下,经心脏灌注 10 ml 2% TTC(溶于 PBS);灌注后 10 分钟取出脑组织进行固定或生化分析。

终止程序:由于 TTC 具有全身毒性,动物在灌注前需深度麻醉。脑组织切片(0.8 mm 厚)或用于蛋白质/RNA提取。[1]
中风模型:成年猕猴在氯胺酮麻醉下经眶入路行永久性大脑中动脉闭塞(MCAO)。

TTC染色:MCAO后6小时取出脑组织,冠状切片(2 mm 厚),浸入2% TTC PBS溶液(pH 7.4)中,于37℃避光染色30分钟。

分析:切片固定于4%福尔马林溶液中;梗死面积(未染色)通过数字化面积测量法进行定量;相邻切片进行SDH/CCO组织化学染色。[2]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
全身性 TTC(2% 溶液)经心内/动脉内注射可迅速致小鼠死亡,可能由于线粒体有氧氧化抑制所致;未报道 LD50。
高剂量甘露醇引起的渗透性血脑屏障破坏可能导致不可逆的血脑屏障损伤和不适,严重受损动物需调整剂量。[1]
参考文献

[1]. Mannitol-facilitated perfusion staining with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) for detection of experimental cerebral infarction and biochemical analysis. J Neurosci Methods. 2012 Jan 15;203(1):122-9.

[2]. Human umbilical mesenchymal stem cells promote recovery after ischemic stroke. Stroke. 2011 Jul;42(7):2045-53.

其他信息
2,3,5-三苯基四唑氯化物是一种有机氯化物,其抗衡离子为2,3,5-三苯基四唑。它可用作指示剂和染料。它含有2,3,5-三苯基四唑。
TTC(无色)在活细胞中被线粒体酶还原为红色甲臜,从而可用于检测梗死;其分子量小(334.8 g/mol),限制了其在不通过渗透作用打开血脑屏障的情况下穿透血脑屏障。
机制:作为线粒体呼吸链中的电子受体,被NADH依赖性脱氢酶还原为不溶性甲臜。
应用:对水肿/新生儿脑组织中脑梗死的定量分析至关重要;可与免疫组化 (IHC)、逆转录聚合酶链式反应 (RT-PCR)、免疫印迹和酶谱分析等方法兼容,用于缺血半暗带分析。[1]
TTC 还原需要完整的线粒体电子传递链 (ETC) 功能;其由白色变为红色的颜色变化可特异性地识别代谢活跃的组织。
机制:作为 NADH 依赖性脱氢酶(主要是复合物 II 中的琥珀酸脱氢酶 (SDH))的电子受体,在活细胞中形成不溶性红色甲臜。
应用:是临床前卒中模型中早期梗死检测(≥6 小时)的金标准;可与线粒体酶活性测定法兼容,用于验证。[2]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C19H15CLN4
分子量
334.8022
精确质量
334.098
元素分析
C, 68.16; H, 4.52; Cl, 10.59; N, 16.73
CAS号
298-96-4
相关CAS号
902-00-1 (Parent)
PubChem CID
9283
外观&性状
White to light yellow solid powder
沸点
>360
熔点
250 °C(lit.)
闪点
91.7ºC
蒸汽压
0.0615mmHg at 25°C
LogP
0.215
tPSA
34.59
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
3
可旋转键数目(RBC)
3
重原子数目
24
分子复杂度/Complexity
330
定义原子立体中心数目
0
SMILES
C1=CC=C(C=C1)C2=NN([N+](=N2)C3=CC=CC=C3)C4=CC=CC=C4.[Cl-]
InChi Key
PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M
InChi Code
InChI=1S/C19H15N4.ClH/c1-4-10-16(11-5-1)19-20-22(17-12-6-2-7-13-17)23(21-19)18-14-8-3-9-15-18;/h1-15H;1H/q+1;/p-1
化学名
2,3,5-triphenyltetrazol-2-ium;chloride
别名
2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride; 298-96-4; Red tetrazolium; Uroscreen; Vitastain; Urocheck; TRIPHENYLTETRAZOLIUM CHLORIDE; Tetrzolium chloride; TPTZ; TTC
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
H2O : ~50 mg/mL (~149.34 mM)
DMSO : ~16.67 mg/mL (~49.79 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (4.99 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 16.7 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;再向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (4.99 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 16.7mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20%SBE-β-CD生理盐水中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (4.99 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 16.7 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


配方 4 中的溶解度: 25 mg/mL (74.67 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.9869 mL 14.9343 mL 29.8686 mL
5 mM 0.5974 mL 2.9869 mL 5.9737 mL
10 mM 0.2987 mL 1.4934 mL 2.9869 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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