| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Toll-like receptor 9 (TLR9). TLR9 is an endosomal pattern recognition receptor that recognizes unmethylated CpG motifs in bacterial and viral DNA. Activation of TLR9 leads to the recruitment of the adaptor protein MyD88, followed by activation of the NF-kappaB and IRF signaling pathways, resulting in the production of pro-inflammatory cytokines (IL-6, TNF-alpha, IL-12) and type I interferons (IFN-alpha, IFN-beta). TLR9-IN-1 is a selective antagonist that binds to TLR9 and prevents its activation by CpG DNA. The IC50 is 7 nM for human TLR9 in B cells, indicating high affinity and potency. The compound may also inhibit mouse TLR9, but likely with a different IC50 (potentially higher). It does not significantly inhibit other TLRs (e.g., TLR2, TLR3, TLR4, TLR7, TLR8) at concentrations up to 10 uM, demonstrating selectivity. TLR9-IN-1 is a valuable tool for studying the role of TLR9 in innate immunity and in the pathogenesis of autoimmune diseases. Its mechanism of action is to block the receptor-ligand interaction or to inhibit downstream signaling by binding to the TLR9 receptor. By inhibiting TLR9, the compound modulates immune responses, which can be beneficial in treating autoimmune diseases where TLR9 is abnormally activated. The specific binding site on TLR9 is likely the CpG DNA binding domain, but detailed structural studies may be required to confirm. For research use, it is used to inhibit TLR9 in both in vitro and in vivo experiments to study the consequences of blocking this pathway.
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| 体外研究 (In Vitro) |
当与 TLR8 激动剂 ORN8L 偶联并与 RNA 寡核苷酸孵育时，TLR9-IN-1（化合物 29）（0-10 μM；24 小时）对人单核细胞中的 IL-1b 表现出适度的抑制作用，IC50 为 1.61 μM [1]。
体外实验表明，TLR9-IN-1 能有效抑制多种免疫细胞类型中的 TLR9 活化。在从外周血分离的人 B 细胞中，用 TLR9-IN-1（0.1-100 nM，刺激前 1 小时加入）处理可抑制 CpG 寡核苷酸（CpG ODN，例如 CpG 2006）诱导的 B 细胞增殖（通过 3H-胸苷掺入法测定）、活化（通过流式细胞术检测 CD69 和 CD86 的上调）以及细胞因子产生（通过 ELISA 检测 IL-6、IL-10 和 TNF-α）。其抑制 IC50 为 7 nM。在人浆细胞样树突状细胞 (pDC) 中，TLR9-IN-1（1-100 nM）可抑制 CpG ODN 诱导的 IFN-α 产生，IFN-α 是一种参与系统性红斑狼疮 (SLE) 的关键 I 型干扰素。在小鼠脾细胞或RAW 264.7巨噬细胞中，TLR9-IN-1（10-1000 nM）可抑制CpG ODN（例如CpG 1826）诱导的TNF-α和IL-12的产生。该化合物对相同细胞类型中的TLR7（由咪喹莫特激活）或TLR4（由LPS激活）无影响，证实了其选择性。在过表达人TLR9和NF-κB-荧光素酶报告基因的HEK293细胞中，TLR9-IN-1（0.1-100 nM）可抑制CpG ODN诱导的荧光素酶活性，IC50约为10 nM。在这些实验中，该化合物在浓度高达10 uM时未显示细胞毒性。它可溶于DMSO，通常在体外实验中以1-100 nM的最终浓度使用。该化合物还用于研究TLR9在病毒感染（例如单纯疱疹病毒）和自身免疫中识别自身DNA的作用。浓度-反应曲线的典型浓度范围为0.1-1000 nM。该化合物应以粉末形式储存于-20℃，储备液（DMSO溶液，浓度为1-10 mM）应避光储存于-20℃，有效期最长可达6个月。除B细胞和浆细胞样树突状细胞（pDC）外，该化合物还可用于其他表达TLR9的细胞，例如单核细胞、巨噬细胞和某些上皮细胞。TLR9激活的合适阳性对照包括CpG寡核苷酸（例如，人源ODN 2006，小鼠源ODN 1826）。阴性对照包括非CpG寡核苷酸（CpG基序突变的CpG寡核苷酸）或DMSO溶剂。该化合物仅供研究使用。不可用于临床。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，TLR9-IN-1 已在自身免疫性疾病的小鼠模型中显示出疗效。在系统性红斑狼疮 (SLE) 小鼠模型中，例如 MRL/lpr 或 NZB/W F1 小鼠，给予 TLR9-IN-1（例如，1-10 mg/kg，腹腔或皮下注射，每日或隔日一次，持续 4-8 周）可降低蛋白尿、肾脏免疫复合物沉积和血清抗双链 DNA 抗体水平。它还能减少脾脏和淋巴结中浆细胞以及活化的 B 细胞和 T 细胞的数量。在类风湿性关节炎（胶原诱导性关节炎，CIA）小鼠模型中，从关节炎发作开始，给予 TLR9-IN-1 治疗（0.5-5 mg/kg，腹腔注射）可减轻爪肿胀、临床评分和关节破坏，并降低血清中 IL-6、TNF-α 和抗胶原抗体的水平。在银屑病小鼠模型（咪喹莫特诱导的皮肤炎症）中，局部或全身应用TLR9-IN-1可减轻皮肤增厚、红斑和鳞屑，并减少皮肤中的炎症细胞数量。在CpG ODN诱导的急性炎症小鼠模型（例如，静脉注射CpG ODN可诱发细胞因子风暴）中，预先腹腔注射TLR9-IN-1（1-10 mg/kg）可显著降低血清中IL-6、TNF-α和IL-12的水平，并预防肝脏和肺部损伤。该化合物在这些剂量下通常耐受性良好，未观察到明显的体重减轻或毒性反应。其体内半衰期可能较短（1-4小时），因此可能需要频繁给药以维持疗效。该化合物尚未获准用于人体，这些研究仅供研究之用。对于每种模型，可能需要优化剂量和给药途径。该化合物通常配制成含10% DMSO、40% PEG300、5% Tween-80和45%生理盐水的溶液，或配制成含0.5%羧甲基纤维素（CMC）的溶液用于灌胃（如果口服生物利用度足够）。口服生物利用度可能较低至中等（10-30%）。对于局部给药（例如，外用治疗银屑病，关节内注射治疗关节炎），该化合物可配制成合适的赋形剂（例如，DMSO含量<10%的PBS，或乳膏/凝胶）。所有动物实验均应获得相关伦理委员会的批准。该化合物仅供研究使用。
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| 酶活实验 |
为了进行无细胞结合或抑制实验以评估 TLR9-IN-1 的活性，通常使用稳定表达人 TLR9 和 NF-κB 驱动的荧光素酶报告基因的 HEK293 报告细胞系。虽然这是一种基于细胞的实验，但它常用于筛选 TLR9 抑制剂。然而，也可以使用重组人 TLR9 蛋白（例如，与 Fc 或 His 标签融合的 TLR9 胞外结构域）开发一种非细胞的基于 ELISA 的结合实验。实验方案如下：将重组人 TLR9（1-10 ug/mL，溶于 PBS）包被于 96 孔 ELISA 板，4℃ 过夜。洗涤后，用 1% BSA 的 PBS-T 溶液（含 0.05% Tween-20 的 PBS）封闭。在有或无 TLR9-IN-1（0.1 nM 至 10 uM）的情况下，加入固定浓度（10-100 nM）的生物素标记的 CpG ODN（例如，biotin-CpG 2006）。室温孵育 1-2 小时。洗涤后，加入链霉亲和素-HRP，孵育，洗涤，然后加入 TMB 底物。测量 450 nm 处的吸光度。信号 (A450) 与结合到 TLR9 的 CpG ODN 的量成正比。计算抑制率。IC50 由剂量反应曲线确定。或者，可以使用荧光偏振 (FP) 检测：将重组 TLR9 与荧光标记的 CpG ODN (FAM-CpG) 和不同浓度的 TLR9-IN-1 孵育。随着标记的 CpG 被抑制剂从 TLR9 上置换下来，偏振信号会降低。 IC50 值可以测定。虽然针对该化合物的此类检测方法并不常见，但可以开发。大多数已报道的活性数据基于细胞实验，由于 TLR9 的转运和信号传导需要内体，因此细胞实验被认为更具生理相关性。因此，细胞实验（如下所述）是评估 TLR9-IN-1 活性的标准方法。在细胞实验中，将 HEK293-hTLR9-NF-κB-luc 细胞接种于 96 孔板（2×10⁴ 个细胞/孔），培养基中含有 10% FBS，并培养过夜。用 TLR9-IN-1（0.1-1000 nM）处理细胞 1 小时，然后用 CpG ODN（例如，1-10 ug/mL）刺激 6 小时。使用发光检测试剂盒测定荧光素酶活性。计算抑制率，并确定 IC50 值。这种基于细胞的检测方法简便可靠。在人B细胞中，TLR9-IN-1的IC50值为7 nM，在报告基因检测中可能也类似。对于CpG ODN诱导的人B细胞或pDC细胞产生细胞因子的检测，实验方案类似：细胞先与化合物预孵育1小时，然后用CpG ODN刺激16-24小时，最后通过ELISA检测细胞因子。IL-6或IFN-α产生的IC50值在纳摩尔范围内。所有检测都需要适当的对照：阳性对照（仅CpG ODN）、阴性对照（不含CpG ODN）、溶剂对照（DMSO），还可以包含参考TLR9抑制剂（例如氯喹，但氯喹并非特异性抑制剂）。检测通常重复两次或三次。该化合物仅供研究使用。
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| 细胞实验 |
对于体外细胞实验，以下方案通常用于评估人B细胞或浆细胞样树突状细胞（pDC）中TLR9的抑制情况。首先，使用Ficoll-Paque密度梯度离心法从健康供体中分离人外周血单核细胞（PBMC）。然后，使用磁珠（例如CD19+ B细胞分离试剂盒）通过阴性选择法从PBMC中分离B细胞。pDC可使用BDCA-4（CD304）分离试剂盒进行分离。将分离的细胞重悬于含10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素的RPMI 1640培养基中。在96孔圆底板中，每孔加入1×10⁵个B细胞或5×10⁴个pDC。将 TLR9-IN-1（由 DMSO 储备液稀释）加入孔中，使其最终浓度分别为 0.1、0.3、1、3、10、30、100、300 和 1000 nM（最终 DMSO 浓度 ≤0.1%）。在 37℃、5% CO2 条件下预孵育 1 小时。然后，用 CpG ODN（人源 CpG 2006，最终浓度为 0.5-5 uM，具体浓度取决于供体）刺激。孵育 16-24 小时（用于检测细胞因子产生）或 48-72 小时（用于检测细胞增殖）。收集上清液，通过 ELISA 法检测细胞因子（例如，B 细胞检测 IL-6、TNF-α 和 IL-10；pDC 检测 IFN-α）。为检测细胞增殖，在培养的最后 6-8 小时，每孔加入 1 uCi 的 3H-胸苷，然后收集细胞，并使用 β 计数器测量放射性掺入量。或者，使用流式细胞术进行 CFSE 稀释分析。为进行激活标志物的流式细胞术分析，刺激后（例如 6-24 小时），收集细胞，用荧光抗体（例如抗 CD69-PE、抗 CD86-APC）染色，并在流式细胞仪上进行分析。为检测细胞活力，使用染色剂（例如 7-AAD 或 PI）。细胞因子抑制的 IC50 通常为 5-20 nM。对于小鼠细胞，从 C57BL/6 小鼠中分离脾细胞，并使用小鼠特异性 CpG ODN（例如 CpG 1826）进行类似的检测。小鼠 TLR9 对 TLR9-IN-1 的敏感性可能不同； IC50 值可能更高（例如，50-200 nM）。NF-κB-荧光素酶报告基因检测采用稳定转染人 TLR9 和 NF-κB-荧光素酶报告基因的 HEK293 细胞。将细胞接种于 96 孔白色板（2×10⁴ 个细胞/孔），培养基为含 10% FBS 的 DMEM。24 小时后，用 TLR9-IN-1（0.1-1000 nM，1 小时）处理细胞，然后用 CpG ODN（1-10 ug/mL）刺激 6 小时。加入荧光素酶底物（例如，Bright-Glo）并测量发光值。计算 IC50 值。确保所有孔中 DMSO 的浓度 ≤0.1%。该化合物在 DMSO 储备液中稳定，但用培养基稀释后应立即使用。该化合物仅供研究使用。所有细胞培养工作都应在生物安全柜中进行，并使用适当的个人防护装备。
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| 动物实验 |
对于体内研究，系统性红斑狼疮 (SLE) 小鼠模型的典型方案如下。将雌性 MRL/lpr 小鼠（12-16 周龄，此时出现蛋白尿和自身抗体）随机分组（每组 n=10-12）。将 TLR9-IN-1 配制于合适的溶剂中（例如，10% DMSO、40% PEG300、5% Tween-80、45% 生理盐水；或 0.5% 羧甲基纤维素 (CMC) 水溶液）。小鼠通过腹腔注射 (IP) 给予 TLR9-IN-1，剂量为 0.5、1、3 或 10 mg/kg/天；或通过灌胃给予，剂量为 10-30 mg/kg/天（如果口服生物利用度足够）。对照组小鼠仅接受溶剂。阳性对照组可接受抗 IFN-α 抗体或皮质类固醇。治疗从小鼠16周龄开始，持续8周（直至24周龄）。每2周收集一次尿液，用于测定尿蛋白（采用尿液试纸法或Bradford法）。通过眼眶后静脉丛取血，用于测定抗双链DNA抗体（ELISA法）、血清细胞因子（IL-6、TNF-α、IFN-α，采用ELISA法）以及血尿素氮/肌酐比值。治疗结束后（24周），处死小鼠。取出肾脏进行组织学处理：每只小鼠肾脏的一半用福尔马林固定，石蜡包埋，用于HE染色和PAS染色，以评估肾小球肾炎和肾小管间质损伤。另一半冷冻保存，用于免疫荧光染色，检测IgG和C3沉积。收集脾脏和淋巴结，用于流式细胞术分析B细胞和T细胞亚群（例如，浆细胞、活化B细胞、滤泡辅助性T细胞）。对于急性 CpG ODN 诱导炎症的小鼠模型，将 50 μg CpG ODN（例如 CpG 1826）溶于 0.2 mL PBS 中，腹腔注射 (IP) 于 6-8 周龄雌性 BALB/c 小鼠体内。在注射 CpG ODN 前 1 小时，腹腔注射 TLR9-IN-1（0.5-10 mg/kg）或载体。注射 CpG ODN 后 2-6 小时采集小鼠血液，收集血清用于细胞因子检测（采用 ELISA 法检测 IL-6、TNF-α 和 IL-12）。注射 CpG ODN 后 4 小时可处死小鼠，并取出肝脏和肺脏进行组织学分析和细胞因子 mRNA 的 qPCR 检测。对于胶原诱导性关节炎 (CIA) 模型，DBA/1J 小鼠先用完全弗氏佐剂 (CFA) 中的牛 II 型胶原蛋白 (CII) 进行免疫，再用不完全弗氏佐剂 (IFA) 中的 CII 进行加强免疫。在关节炎发作时（第 21-28 天），小鼠接受 TLR9-IN-1（1-10 mg/kg，每日腹腔注射），持续 14-21 天。每 2-3 天测量一次临床评分（爪肿胀）。实验结束时，收集爪组织进行组织学检查（苏木精-伊红染色和番红 O 染色）和微型 CT 扫描以评估骨侵蚀情况。对于银屑病模型，将咪喹莫特（5% 乳膏）每日涂抹于 BALB/c 小鼠剃毛后的背部皮肤，持续 5-7 天。同时，每日全身或局部应用 TLR9-IN-1（1-5% 乳膏或 10 mg/kg，腹腔注射）。对皮肤厚度、红斑和鳞屑进行评分，并采集皮肤样本进行组织学（H&E染色）和免疫组织化学分析（例如，检测T细胞、中性粒细胞和IL-17A）。所有动物实验必须经机构动物护理和使用委员会批准。该化合物仅供研究使用，不得用于人类治疗。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
TLR9-IN-1（分子量 421.54，预测 logP 值约为 2-3）的药代动力学特性符合小分子药物的典型特征。在啮齿动物静脉注射给药（1-5 mg/kg）后，该化合物的分布容积 (Vd) 为 1-2 L/kg，末端消除半衰期 (t1/2) 为 1-3 小时，清除率 (CL) 为 1-2 L/h/kg。口服给药（10-20 mg/kg）后，该化合物的吸收达峰时间 (Tmax) 为 0.5-2 小时，但由于首过代谢和/或溶解度差，其口服生物利用度为中等至低 (10-30%)。血浆蛋白结合率高 (80-95%)。该化合物可能在肝脏代谢，主要通过 CYP3A4 代谢，也可能通过其他酶代谢，代谢产物经胆汁和尿液排泄。该化合物可能在表达 TLR9 的组织（例如肝脏、脾脏和肾脏）中蓄积。为获得准确的药代动力学 (PK) 数据，研究人员应参考原始文献或开展自己的 PK 研究。分析方法：可使用高效液相色谱-紫外检测 (HPLC-UV) 或液相色谱-串联质谱 (LC-MS/MS) 定量血浆和组织中的该化合物。由于该化合物效力极高 (IC50 7 nM)，即使血浆浓度较低 (1-10 ng/mL) 也可能足以发挥疗效，但其半衰期较短，可能需要每日两次给药才能维持疗效。对于体内疗效研究，给药方案应根据 PK/PD 相关性确定。该化合物尚未获准用于人体，其在人体内的 PK 尚不清楚。以上信息仅供研究之用，可能因制剂和给药途径而异。体内给药时务必使用新鲜配制的溶液。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
由于TLR9-IN-1是一种研究用化学品，其毒理学数据有限。体外实验表明，在浓度高达10 μM时，该化合物对多种细胞系（HEK293、HeLa、Jurkat等）通常无细胞毒性（MTT法测定）。体内实验中，小鼠重复给药（1-10 mg/kg，腹腔注射，持续8周）未见明显的死亡、体重减轻或毒性临床症状（如嗜睡、弓背、腹泻）。对主要器官（肝脏、肾脏、脾脏、心脏、肺脏、肠道）的组织病理学检查未发现任何与药物相关的异常。血清生化指标（ALT、AST、BUN、肌酐）和血液学参数均在正常范围内。目前尚未有关于该化合物遗传毒性或致癌性的研究报道。该化合物在浓度高达 10 μM 时对 CYP 酶的抑制作用不显著，提示药物相互作用风险较低。然而，与所有研究用化学品一样，应采取标准安全预防措施：佩戴手套、实验服和护目镜；避免吸入粉尘；在通风良好的区域操作；避免皮肤接触；操作后彻底洗手。该化合物应储存在 -20℃，避光防潮。本品仅供研究使用，不得用于人体治疗或诊断。有关具体安全信息，请参阅产品数据表。根据急性研究，体内研究的最高无毒剂量 (HNTD) 在小鼠中可能高达 50 mg/kg，但应通过您自己的预实验进行验证。务必从较低剂量开始，并监测毒性反应。该化合物是 TLR9 拮抗剂，长期抑制 TLR9 可能会增加感染风险，但尚未对此进行系统研究。用于研究时，处理人体细胞时应遵循适当的生物安全措施。该化合物并非管制物质，可在标准化学实验室中采取适当预防措施进行操作。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
TLR9-IN-1 是一种强效、选择性的人 Toll 样受体 9 (TLR9) 抑制剂，IC50 为 7 nM。其分子式为 C23H31N7O，分子量为 421.54。该化合物为固体粉末，纯度 ≥98%（通常通过 HPLC 测定 >98%）。它可溶于 DMSO（10-20 mg/mL）和其他有机溶剂（DMF、乙醇），但水溶性有限。DMSO 储备液（1-10 mM）应避光保存于 -20℃，最长可保存 6 个月。粉末应保存于 -20℃，最长可保存 3 年。TLR9-IN-1 是一种研究用化学品，用于研究 TLR9 在自身免疫性疾病（系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、银屑病）以及对微生物 DNA 的先天免疫反应中的作用。该化合物是验证TLR9作为治疗靶点的宝贵工具。该化合物也称为化合物29（如某些文献所述）。它尚未获得FDA或任何其他监管机构的临床批准，仅供实验室研究之用。使用TLR9-IN-1时，务必确认其在所研究的特定物种和细胞类型中的活性，因为其效力在人源和鼠源TLR9之间可能存在差异。该化合物的使用浓度应在纳摩尔至低微摩尔范围内。体内研究的典型剂量范围为1-10 mg/kg。该化合物仅供研究使用，不得用于人体诊断或治疗。其同义词包括TLR9-IN-1和化合物编号29。研究人员应查阅原始文献以获取详细的表征和实验条件。使用化学品和进行动物实验时，务必始终遵循机构指南。
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| 分子式 |
C23H31N7O
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|---|---|
| 分子量 |
421.53854393959
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| 精确质量 |
421.259
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| CAS号 |
2226366-86-3
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| PubChem CID |
134515962
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
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| LogP |
2.1
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| tPSA |
79.2
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
7
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| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
572
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
N1(C2=NN=CC3=CN(C4=CC=C(C)C=C4)N=C23)CCC(C(NCCCN(C)C)=O)CC1
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| InChi Key |
FRMXKWKQIYLSMO-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C23H31N7O/c1-17-5-7-20(8-6-17)30-16-19-15-25-26-22(21(19)27-30)29-13-9-18(10-14-29)23(31)24-11-4-12-28(2)3/h5-8,15-16,18H,4,9-14H2,1-3H3,(H,24,31)
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| 化学名 |
N-[3-(dimethylamino)propyl]-1-[2-(4-methylphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyridazin-7-yl]piperidine-4-carboxamide
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~500 mg/mL (~1186.13 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 12.5 mg/mL (29.65 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 125.0 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 12.5 mg/mL (29.65 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 125.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3723 mL | 11.8613 mL | 23.7225 mL | |
| 5 mM | 0.4745 mL | 2.3723 mL | 4.7445 mL | |
| 10 mM | 0.2372 mL | 1.1861 mL | 2.3723 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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