| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Aminopeptidase
Tosedostat (CHR-2797) is an aminopeptidase inhibitor. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
使用托塞多司他 (CHR-2797) 时，HL-60 细胞生长培养基含有更多斯钙素 2 (STC2) 蛋白。用 Tosedostat (60 nM) 治疗两小时后，SLC7A11 表达上升。 U-937 和 HuT 78 细胞系被托西司他治疗阻断，这也会导致 U-937 细胞而非 HuT 78 细胞表达更多的增量反应 (AADR) 基因 [1]。托塞司他（0.01 μM；24 小时的 IC50 分别为 10 nM 和 >10 μM）将未处理的对照细胞的平均 MCA 产量降低至 77.8%；同样，MCA 产量在 1 μM 时下降至 51.3%，在 5 μM 时下降至 51.3%，在 μM 时下降至 38.5%，在 10 μM 时下降至 35.3% [2]。
Tosedostat 在体外表现出抗骨髓瘤活性。与组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂CHR-3996联用时显示出高度协同作用。当两种药物同时加入骨髓瘤细胞系（H929和RPMI-8226）时，协同指数（CI）<0.7。若在CHR-3996处理前24小时加入tosedostat，协同效应更强（CI >0.4）。 单独使用tosedostat（1 µM）可激活H929细胞中的经典和非经典NFκB信号通路，表现为IκBα磷酸化增加、p65核转位以及p100蛋白水解切割为p52（随后发生核转位），处理时长为24小时。 用1 µM tosedostat处理H929细胞24小时后的基因表达谱分析显示，NFκB调节因子BIRC3/cIAP2的表达上调了349.17倍。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在怀孕的动物癌症模型中，托塞多司他 (CHR-2797) 具有活性，并且在两种模型中均表现出剂量反应关系；当治疗前肿瘤负荷最高时，托塞司他的效果不太明显[1]。
在携带H929骨髓瘤细胞的NOD/SCID IL2R gamma^null异种移植模型中，每天以75 mg/kg剂量腹腔注射给予tosedostat（从肿瘤接种后第4天开始），可部分抑制肿瘤生长。当与CHR-3996（每天口服30 mg/kg）联合给药时，肿瘤生长被完全阻断，证明了体内的协同作用。 |
| 酶活实验 |
体外酶测定[2]
LAP[2] LAP活性是通过测量三肽LGG的水解来测定的，LGG在β巯基乙醇存在下由衍生化试剂OPA检测。将酶重新悬浮在H2O中，然后在PD-10柱上将缓冲液交换为pH 8.0的50mM HEPES。通过BCA法测定蛋白质浓度，并将浓度调节至10µg/ml。将LGG在50mM HEPES中稀释至0.5mM。该测定在96孔测定板上进行。孔中含有稀释的抑制剂/载体（5µl）、10µg/ml LAP（5µl）和40µl 0.5mM LGG。样品分析一式三份。短暂摇动平板，在37℃下孵育90分钟。通过每孔加入200µl OPA/β-巯基乙醇终止反应。在Victor Wallac3平板读数器上读取平板：激发355nm，发射460nm，计算IC50值。 PuSA[2] 使用荧光底物Ala-AMC测定PuSA活性。培养箱中含有稀释的抑制剂/载体（20µl）、底物（125µM Ala-AMC，溶于0.125M TrisHCl缓冲液中，pH 7.5；40µl）和酶（40μl）。在37℃下孵育2小时后，通过加入100µl 3%（v/v）乙酸停止反应。使用SLT Fluostar荧光计测量荧光。 LTA4水解酶[2] 使用荧光底物Arg-AMC测定LTA4水解酶。培养箱中含有稀释的抑制剂/载体（10µl）、底物（285µM Arg-AMC，溶于PBS-0.01%（v/v）Brij-35中；70µl）和酶（20µl）。在37℃下孵育1小时后，通过加入100µl 3%（v/v）乙酸停止反应。使用SLT Fluostar荧光计测量荧光。 皮尔斯[2] 2根据制造商的说明，使用比色底物l-亮氨酸对硝基苯胺测定PILSAP活性。 使用荧光底物Ala-AMC测定氨基肽酶N。孵育包含稀释的抑制剂/载体（20µl）、底物（40µl；终浓度，60µM）和酶（40µ1，1:8000稀释），在37℃下孵育60分钟，然后加入100µl 3%（v/v）乙酸以停止反应。使用SLT Fluostar荧光计测量荧光。 氨基肽酶B[2] 使用荧光底物Arg-AMC测定氨基肽酶B。孵育包含稀释的抑制剂/载体（20µl）、底物（40µl；终浓度200µM）和酶（40µl），在37℃下孵育120分钟，然后加入100µl 3%（v/v）乙酸以停止反应。使用SLT Fluostar荧光计测量荧光。 MetAP-2[2] 使用Met-Ala-Ser作为底物测定MetAP-2，并在还原剂存在下通过OPA检测释放的Met，以产生荧光产物。培养液中含有底物Met-Ala-Ser-OH（1.67mM）在测定缓冲液（83mM磷酸钠缓冲液pH 7.2，83mM NaCl，0.266mM CoCl2；60µl）、稀释的抑制剂/载体（20µl）和酶（20µl）中。在加入150µl终止试剂（0.2mM OPA/0.2mMβ-巯基乙醇，溶于pH 9.5的50mM硼砂中）之前，将它们在37℃下孵育90分钟。使用SLT Fluostar荧光计测量荧光。 使用重组人源酶进行氨肽酶抑制实验，包括 LTA4 水解酶、MetAP-2、PuSA、氨肽酶 N、LAP 和氨肽酶 B。 化合物在酶存在下测试，IC₅₀ 值基于每实验至少六个浓度、两到三次独立重复得出。 CHR-79888 强效抑制 LTA4 水解酶、LAP 和 PuSA，而 PILSAP 和 MetAP-2 对其不敏感。 |
| 细胞实验 |
细胞增殖、存活和细胞周期测定[1]
根据制造商的说明，使用WST-1测定法测量增殖抑制。使用FACSCaliburTM上的AnnexinV:FITC凋亡检测试剂盒I通过流式细胞术测量细胞死亡。通过将细胞固定在70%乙醇的冰上，重新悬浮在PBS中，在37°C下用100μg/ml RNase处理30分钟，然后用50μg/ml碘化丙啶（PI）染色，并用流式细胞术进行分析，来测量细胞周期状态。 细胞周期分析[2] 基于Dolbeare等人（Proc Natl Acad Sci USA 1983；80:5573-77）的方法，使用双变量BrdUrd-PI染色FACS方案分析了CHR-2797或CHR-5346对U-937和HuT 78肿瘤细胞系的影响的细胞动力学研究。该方法还鉴定了亚G1凋亡DNA谱的存在。对于膜联蛋白分析，使用膜联蛋白V-FITC染色试剂盒-1检测外部磷脂酰丝氨酸的存在。使用488nm激发激光在FACS Canto上通过流式细胞术分析样品，FITC使用530nm/30nm带通滤光片，PI荧光发射使用670nmLP滤光片。 CHR-2797是一种新型金属酶抑制剂，在细胞内转化为药理学活性酸产物（CHR-79888）。CHR-79888是一种强效的细胞内氨基肽酶抑制剂，包括亮氨酸氨基肽酶。CHR-2797在体外和体内对一系列肿瘤细胞系具有抗增殖作用，并显示出对转化细胞的选择性。它的抗增殖作用至少比典型的氨基肽酶抑制剂bestatin强300倍。然而，抑制这些酶导致增殖变化的机制尚不清楚。基因表达微阵列用于分析用CHR-2797处理的人早幼粒细胞白血病细胞系HL-60中mRNA表达水平的变化。该分析表明，CHR-2797处理诱导了一种转录反应，表明氨基酸耗竭，即氨基酸剥夺反应，涉及氨基酸合成基因、转运蛋白和tRNA合成酶的上调。这些变化在对CHR-2797的抗增殖作用敏感的其他白血病细胞系中得到了证实。此外，CHR-2797治疗抑制了HL-60细胞中mTOR底物的磷酸化并减少了蛋白质合成，这两者都表明氨基酸耗竭。CHR-2797治疗导致细胞内小肽（氨基肽酶的底物）浓度增加。有人认为，氨基肽酶抑制剂，如CHR-2797和bestatin，通过阻断蛋白质循环来消耗敏感肿瘤细胞的氨基酸，从而产生抗增殖作用。CHR-2797是口服生物可利用的，目前正在进行治疗髓系白血病的II期临床研究。[2] 细胞增殖通过基于代谢活性的WST-1实验进行测量。细胞用不同浓度的药物处理48小时，按照制造商的说明书测量吸光度。 细胞死亡/凋亡通过流式细胞术使用膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶（PI）染色进行评估。对仅膜联蛋白V阳性（早期凋亡）或膜联蛋白V和PI均阳性（晚期凋亡）的细胞进行定量。 细胞周期分析通过将细胞固定在70%乙醇中，用RNase（100 µg/ml）在37°C处理30分钟，PI（50 µg/ml）染色，并通过流式细胞术分析DNA含量进行。 免疫印迹（Western blot）用于分析蛋白质表达和修饰。细胞裂解后，蛋白质通过SDS-PAGE分离，转移到PVDF膜上，并用特异性一抗（例如针对磷酸化IκBα、p65、p52、BIRC3的抗体）进行检测。 核提取物中的NFκB DNA结合活性使用商业化的TransAM™ NFκB试剂盒测量。将核提取物（每孔2 µg）与包被有NFκB共有序列寡核苷酸的板一起孵育，并使用特异性抗体检测结合的活性转录因子（p65或p52）。 |
| 动物实验 |
大鼠乳腺癌（HOSP.1P）模型：肺部定植[2]
雌性大鼠（CBH/cbi）随机分组（每组n=8-10），分别接受CHR2797（3、10或30mg/kg/天）或载体处理。在氟烷麻醉下，将HOSP.1P细胞（传代6/7代，30,000个细胞/0.4ml）静脉注射到所有大鼠体内。从肿瘤细胞接种后第2天开始，每天口服给药，直至第32天。末次给药后24小时，取出所有大鼠的肺脏。肿瘤切除并用Methacarn固定后，测定其数量、平均重量和总肿瘤负荷。[2] 大鼠软骨肉瘤（HSN LV10）模型：肝脏定植 [2] 将雄性（CBH/cbi）大鼠随机分组（每组n=9-10），分别接受CHR2797（10或100mg/kg/天）或载体处理。在氟烷麻醉下，通过肠系膜静脉将HSN LV10细胞（3000个肿瘤细胞溶于0.2ml；第17代，体外培养）注射到动物体内，方法是将一小段小肠外翻。肌肉组织用丝线缝合，皮肤用Michel夹缝合。动物从肿瘤细胞接种后第2天开始每日经口给药，直至第20天。末次给药后24小时，从所有给药组大鼠采集血液样本，用于测定药物和CHR-79888的浓度。解剖肝脏肿瘤，并从每只给药组大鼠中选取10个大小具有代表性的肿瘤（如有可能），称重后立即置于液氮中速冻，用于LC/MS分析（见图1D）。其余肿瘤用Methacarn固定，并测定其数量、平均重量和总肿瘤负荷，包括用于分析的肿瘤。 [2] 人源肿瘤异种移植模型：MDA-MB-435 乳腺癌 [2] 将 MDA-MB 435 细胞（10⁶ 个细胞/只）于第 0 天皮下接种至裸鼠（MF1 (nu/nu)；Harlan，英国比斯特）乳腺脂肪垫。待肿瘤生长至平均体积 350µl/只后，于第 23 天根据肿瘤体积和肿瘤生长速度将小鼠分为两组。从第 23 天至第 37 天，分别给予赋形剂或 CHR-2797（100 mg/kg/天，口服）。于第 28 天切除原发肿瘤，研究于第 61 天结束。研究结束时取出肺脏，并用 Bouin 氏液固定。在解剖显微镜下，使用游标卡尺测量所有肿瘤的直径。同时统计每只动物的肺部肿瘤数量，并评估肿瘤总负荷。 人源肿瘤异种移植模型：MDA-MB-468 乳腺癌 [2] 在第 0 天，将 MDA-MB-468 细胞（2×10⁶ 个细胞/只）皮下接种到裸鼠 (MF1 (nu/nu)) 的乳腺脂肪垫中。在第 22 天（补充图 S4，底部）或第 39 天（图 S4，顶部），根据肿瘤质量和肿瘤质量单位时间变化百分比的综合指标，将小鼠随机分组（每组 n ≥ 14）。从第 22-49 天或第 40-69 天，小鼠分别经腹腔注射或液体灌注给予 CHR-2797 (100 mg/kg) 或载体。每 3 或 4 天使用游标卡尺测量肿瘤体积。在第 50 天或第 70 天处死小鼠。 NOD/SCID IL2R将 2 × 10⁶ 个 H929 骨髓瘤细胞悬浮于 50 µL RPMI-1640 培养基和 50 µL Matrigel 基质胶中，皮下接种于 γ 基因敲除小鼠右侧腹部。接种 4 天后，将小鼠随机分为治疗组（每组 n=10）。每日腹腔注射 75 mg/kg 的 Tosedostat。同时，每日口服 30 mg/kg 的 HDAC 抑制剂 CHR-3996。治疗最多持续 28 天。每隔一天用游标卡尺测量肿瘤的尺寸（长度和宽度），并使用公式 (1/2) × 长度 × 宽度² 计算肿瘤体积。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
CHR-2797 具有口服生物利用度，并在细胞内水解为活性酸 CHR-79888。
在 U-937 细胞中，用 CHR-2797 孵育可导致 CHR-79888 随时间积累。 临床试验期间，人体血浆峰浓度与体外试验浓度相当。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
(2S)-2-[[(2R)-2-[(1S)-1-羟基-2-(羟基氨基)-2-氧代乙基]-4-甲基-1-氧代戊基]氨基]-2-苯乙酸环戊酯是一种仲羧酰胺、羟肟酸和羧酸酯。
托塞多司他已用于急性髓系白血病 (AML)、白血病、胰腺癌、多发性骨髓瘤等多种疾病的治疗和支持治疗研究。托塞多司他是一种M1家族氨肽酶抑制剂，特别是PuSA和LTA4水解酶的抑制剂。在多种癌症模型中，托塞多司他已显示出抗肿瘤活性，既可作为单一药物，也可与卡铂和紫杉醇等细胞毒性药物协同作用。该药物已进入血液系统恶性肿瘤患者的临床试验。 托西度他（Tosedostat）是一种专有的口服生物利用度高的M1家族氨肽酶抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。氨肽酶抑制剂CHR-2797在细胞内转化为一种膜渗透性差的活性代谢物（CHR-79888），该代谢物可抑制M1家族氨肽酶，特别是嘌呤霉素敏感性氨肽酶（PuSA）和白三烯A4（LTA4）水解酶；抑制肿瘤细胞中的这些氨肽酶可能导致氨基酸缺乏、细胞内游离氨基酸池减少导致蛋白质合成抑制、促凋亡蛋白Noxa水平升高以及细胞死亡。 Noxa 是促凋亡蛋白 Bcl-2（B 细胞 CLL/淋巴瘤 2）家族中仅含 BH3（Bcl-2 同源结构域 3）亚组的成员。 作用机制 托塞多司他是一种抗增殖剂，可在体外诱导白血病细胞系凋亡。其抗癌作用的机制尚不明确，尤其因为正常细胞对该药物的敏感性远低于转化细胞。它在体外表现出强效的抗增殖、促凋亡和抗血管生成作用，并且对转化细胞的选择性高于非转化细胞。它在体外抑制多种M1氨肽酶家族成员（例如嘌呤霉素敏感性氨肽酶 (PSA)、白三烯A4水解酶 (LTA4H)）。 药效学 托塞多司他具有多效性，可抑制多种源自不同肿瘤类型的人类肿瘤细胞系，无论是在体外还是体内。 托塞多司他是一种氨肽酶抑制剂，作用于蛋白酶体下游，催化蛋白酶体生成的肽分解为氨基酸。氨肽酶抑制剂会导致必需氨基酸缺乏，从而引发细胞氨基酸饥饿反应。 与蛋白酶体抑制剂不同，托塞度他不会导致错误折叠/聚集蛋白的毒性积累。 托塞度他与HDAC抑制剂CHR-3996联用可快速激活经典和非经典NFκB信号通路，随后上调NFκB负调控因子（特别是BIRC3/cIAP2，以及A20、CYLD和IκBα）。这会诱导一个负反馈回路，关闭细胞保护性NFκB反应，从而在体外和体内均产生协同作用，导致骨髓瘤细胞死亡。 本研究为氨肽酶抑制剂和HDAC抑制剂联合用于多发性骨髓瘤的临床治疗提供了理论依据。 |
| 分子式 |
C21H30N2O6
|
|---|---|
| 分子量 |
406.4727
|
| 精确质量 |
406.21
|
| 元素分析 |
C, 62.05; H, 7.44; N, 6.89; O, 23.62
|
| CAS号 |
238750-77-1
|
| PubChem CID |
15547703
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
|
| 折射率 |
1.566
|
| LogP |
2.23
|
| tPSA |
124.96
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
4
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
10
|
| 重原子数目 |
29
|
| 分子复杂度/Complexity |
555
|
| 定义原子立体中心数目 |
3
|
| SMILES |
O(C([C@]([H])(C1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H])N([H])C([C@@]([H])([C@@]([H])(C(N([H])O[H])=O)O[H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=O)=O)C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H]
|
| InChi Key |
FWFGIHPGRQZWIW-SQNIBIBYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C21H30N2O6/c1-13(2)12-16(18(24)20(26)23-28)19(25)22-17(14-8-4-3-5-9-14)21(27)29-15-10-6-7-11-15/h3-5,8-9,13,15-18,24,28H,6-7,10-12H2,1-2H3,(H,22,25)(H,23,26)/t16-,17+,18+/m1/s1
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| 化学名 |
(S)-cyclopentyl 2-((R)-2-((S)-1-hydroxy-2-(hydroxyamino)-2-oxoethyl)-4-methylpentanamido)-2-phenylacetate
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| 别名 |
CHR2797; CHR-2797; CHR 2797; KZK563J2UW; C21H30N2O6; Tosedostat (CHR2797); Tosedostat.
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~25 mg/mL (~61.51 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4602 mL | 12.3010 mL | 24.6021 mL | |
| 5 mM | 0.4920 mL | 2.4602 mL | 4.9204 mL | |
| 10 mM | 0.2460 mL | 1.2301 mL | 2.4602 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Cyanostatin B
ST-115
GSK235
Aminopeptidase I, Streptomyces griseus
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COA
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463611831
