| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| 500mg |
|
||
| 1g |
|
||
| Other Sizes |
|
描述：Tretazicar (CB-1954; CB1954) 是一种二硝基苯甲酰胺类似物和前药，是一种强效且高选择性的 DNA 烷基化剂，可在 DNA 中产生具有高度细胞毒性的链间交联。在辅底物卡里考酰胺 (EP-0152R) (EP) 和酶 NQO2 的存在下，它可转化为一种强效的细胞毒性双功能 DNA 烷基化剂。CB1954 已被推荐用于大肠杆菌酶硝基还原酶 (Ntr) 的酶-前药基因治疗系统中。CB1954 经 Ntr 转化为 2- 和 4-羟基氨基类似物后，4-羟基氨基类似物可与细胞硫酯发生非酶促反应，生成一种强效的细胞毒性双功能烷基化剂，该烷基化剂可交联 DNA。
CB1954是一种抗肿瘤前药，已与大肠杆菌硝基还原酶 (NTR) 联合用于潜在的基因导向酶前药疗法 (GDEPT) 的临床试验。大肠杆菌 NTR 对 CB1954 进行硝基还原，生成细胞毒性 4-羟胺，并将 2-硝基还原为 2-羟胺或 2-胺，这两种物质均为强效细胞毒性物质。体外实验表明，人肝脏能够对 CB1954 进行需氧还原生物活化，生成细胞毒性代谢物，该过程可能涉及多种酶，包括硝酸还原酶和 NTR。人 NOR1 基因（氧化硝基结构域蛋白 1）是第一个从人体组织克隆的硝基还原酶家族成员，其功能与 NTR 类似，能够还原 NTR 的硝基。
| 靶点 |
E. coli nitroreductase (NTR); human NOR1 (oxidored-nitro domain containing protein 1). [1]
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
单功能烷化剂CB1954可通过过表达硝基还原酶氧化硝基结构域蛋白1 (NOR1)转化为毒性形式，NOR1可还原强效细胞毒素CB1954的4个硝基。当用于鼻咽癌细胞系CNE1时，毒性CB1954可增加细胞死亡。在HepG2细胞系中，NOR1基因上调Grb2表达并激活MAPK信号转导，从而增强CB1954介导的细胞毒性[1]。在过表达NOR1的HepG2细胞中，CB1954以浓度依赖的方式诱导细胞死亡。使用台盼蓝染色排除法测定细胞活力，结果显示，与对照组相比，NOR1过表达显著增强了CB1954诱导的细胞死亡（P<0.05）。酪氨酸激酶抑制剂染料木素（5 μmol/l）将 CB1954 诱导的 pcDNA3.1(+)-NOR1-HepG2 细胞死亡降低至未处理对照组的水平。稳定转染 Grb2 shRNA（pU6+27-shGrb2）使 Grb2 蛋白表达降低 4 倍，CB1954 介导的 MAPK 激活降低约 3 倍，并将 CB1954 诱导的细胞死亡抑制至未处理对照组的水平。MEK 抑制剂 PD98059（1 μM）抑制了 CB1954 诱导的 pcDNA3.1(+)-NOR1-HepG2 细胞死亡。CB1954 增加了 pcDNA3.1(+)-NOR1-HepG2 细胞中磷酸化 MAPK 的水平。 Western blot分析表明，Grb2下调降低了CB1954刺激细胞中的MAPK活性。[1]
|
| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，NTR/CB1954系统用于特异性消融细胞。这种诱导型消融系统具有剂量依赖性效应[3]。细胞增殖并非CB1954介导的NTR介导的细胞死亡所必需。活化的CB1954引起的DNA交联可能启动细胞凋亡级联反应并迅速杀死细胞。功能性p53并非NTR-CB1954靶向高效杀伤细胞所必需[2]。在乳腺腔上皮细胞中表达NTR的转基因小鼠中，给予CB1954可导致细胞快速消融。单次注射前药后7小时即可观察到细胞死亡。注射后24小时，效应已相当显著。与需要数天或数周才能起效的基于HSV1tk的系统相比，这种快速反应具有优势。 [2] 在p53缺陷小鼠（p53−/−，NTR+）中，CB1954诱导的乳腺细胞死亡在形态学上与p53野生型小鼠无明显差异，表明功能性p53并非CB1954-NTR介导的细胞死亡所必需。然而，p53敲除小鼠的细胞消融程度通常低于p53野生型同窝小鼠。在p53野生型小鼠中，6只中有5只表现出广泛的细胞消融（>80%），而在p53敲除小鼠中，5只中有4只在72小时后仅表现出中等程度（<40%）或有限的（<10%）细胞死亡。这种差异归因于转基因的嵌合表达，而非p53依赖性。 [2]
- 在哺乳期转基因小鼠中，以50 mg/kg体重单次或三次给予CB1954，与给予10 mg/kg体重的小鼠相比，乳腺中观察到明显的细胞死亡。在2 mg/kg剂量下，几乎没有观察到任何影响。[2] |
| 细胞实验 |
人肝癌细胞HepG2在37℃、5% CO₂和95%空气的加湿培养箱中培养，并添加10%胎牛血清（FCS）。细胞毒性试验按照既往指南进行。HepG2细胞汇合度达到约80%后，用PBS缓冲液冲洗，然后用CB1954或信号转导抑制剂处理。每次实验均从10至12个不同的显微镜视野进行测量，并汇总3至5次实验的数据。
人肝癌细胞HepG2（NOR1稳定转染、空载体转染或野生型）在含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中，于37℃、5% CO₂条件下培养。在细胞毒性试验中，将生长至约 80% 汇合度的细胞用 PBS 洗涤，并用不同浓度的 CB1954（4-10 μmol/l）和/或信号转导抑制剂（染料木素，5 μmol/l；PD98059，1 μM）或 shRNA 构建体处理。2 天后，使用台盼蓝染色排除法测定细胞活力。每个实验采集 10-12 个独立显微镜视野的数据，并汇总 3-5 个实验的数据。为了进行稳定转染，将HepG2细胞以1×10⁵个细胞/孔的密度接种于6孔板中，待细胞汇合度达到约75%后，使用Lipofectamine 2000将3 μg线性化的pU6+27-shGrb2或pU6+27-shControl质粒转染至细胞中。两天后，用新霉素（0.5-1 mg/ml）处理细胞。分离新霉素抗性克隆，进行培养，并通过Western blot分析筛选出内源性Grb2表达量最低的克隆（HepG2-shGrb2）。用于蛋白质印迹分析的细胞在冰冷的裂解缓冲液（150 mM NaCl、20 mM Tris pH 7.5、1 mM MgCl₂、1 mM PMSF、1% Triton X-100、0.5% 脱氧胆酸钠、2 mM 原钒酸钠、25 mM 氟化钠、1% 抑蛋白酶、10 μg/ml 亮抑蛋白酶）中裂解。测定蛋白质浓度。取等量总蛋白（5-10 μg）在 10% 聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳分离，然后转移至硝酸纤维素膜上。将膜在含5%脱脂奶粉的TBST缓冲液中封闭，然后与一抗（抗Grb2 1:5000；抗磷酸化MAPK 1:5000；抗MAPK 1:1000；抗β-肌动蛋白 1:7500）孵育，随后与HRP标记的二抗孵育。采用增强化学发光法检测蛋白条带，并使用密度计进行扫描。[1] |
| 动物实验 |
在泌乳第6天，对乳腺中高表达BLG-NTR转基因的RED40雌性小鼠和非转基因对照小鼠进行
50 mg/kg ip 时间进程研究中，在泌乳第6天，对表达NTR的成年RED40转基因雌性小鼠进行腹腔注射（ip），单次注射剂量为50 mg/kg体重的CB1954，或进行假注射。分别在注射后7、17和24小时处死小鼠，并收集乳腺组织。非转基因对照雌性小鼠以相同方式接受CB1954处理。 [2] - 在p53研究中，将10-12周龄、不同基因型的雌性小鼠进行交配，并在哺乳期第4-6天腹腔注射CB1954，剂量为30 mg/kg体重，共注射三次。相同基因型的小鼠作为对照，注射假药物。末次注射后24小时处死小鼠，并收集乳腺和肝脏组织进行分析。在某些情况下，雌性小鼠在仅注射两次CB1954后未能哺乳，表明早期泌乳失败；立即收集组织以防止乳腺退化。[2] - 将CB1954悬浮于含有10%丙酮的花生油中，浓度分别为3 mg/ml或5 mg/ml。注射前将悬浮液加热至37°C。[2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
所有注射了CB1954的小鼠，无论基因型如何，均出现暂时性体重下降。在较高剂量40 mg/kg体重（三次注射）下，转基因小鼠出现急性病症，包括弓背、体温过低（体温降至32°C ± 0.5）以及部分小鼠死亡。在较低剂量20 mg/kg体重下，未观察到体温过低反应或病症。体重下降部分归因于CB1954对肠道中表达NTR的细菌的影响。未观察到直接毒性作用（坏死）。[3]
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
特瑞他卡（Tretazicar）正在临床试验NCT00746590（Prolarix™在肝细胞癌中的抗肿瘤活性和安全性研究）中进行研究。特瑞他卡是一种具有抗肿瘤活性的双功能烷基化二硝基苯甲酰胺衍生物的前药。在辅底物卡利可特明（一种天然辅底物二氢烟酰胺核苷（NRH）的类似物，NRH作为电子供体）存在的情况下，特瑞他卡可被人醌氧化还原酶2（NQO2）激活。由此产生的活性但半衰期短的代谢物二硝基苯甲酰胺可抑制DNA复制并诱导表达NQO2的癌细胞凋亡。由于缺乏天然辅底物NRH，NQO2的表达通常处于潜伏状态，但在某些类型的肿瘤细胞中会上调。
CB1954是一种单功能烷基化剂。 NOR1（氧化硝基结构域蛋白1）通过上调Grb2表达和激活HepG2细胞中的MAPK信号转导，增强CB1954诱导的细胞毒性。CB1954诱导的细胞死亡依赖于酪氨酸激酶活性、Grb2和MEK/MAPK通路。人肝脏能够在体外对CB1954进行有氧还原生物活化，生成细胞毒性代谢物。CB1954已与大肠杆菌NTR联合用于基因导向酶前药疗法（GDEPT）的临床试验。[1] |
| 分子式 |
C9H8N4O5
|
|---|---|
| 分子量 |
252.1836
|
| 精确质量 |
252.049
|
| 元素分析 |
C, 42.86; H, 3.20; N, 22.22; O, 31.72
|
| CAS号 |
21919-05-1
|
| PubChem CID |
89105
|
| 外观&性状 |
White solid powder
|
| 密度 |
1.7±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
427.2±45.0 °C at 760 mmHg
|
| 熔点 |
173 °C
|
| 闪点 |
212.2±28.7 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.0 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.715
|
| LogP |
1.28
|
| tPSA |
137.74
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
2
|
| 重原子数目 |
18
|
| 分子复杂度/Complexity |
385
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
[O-][N+](C1C([H])=C(C(C(N([H])[H])=O)=C([H])C=1N1C([H])([H])C1([H])[H])[N+](=O)[O-])=O
|
| InChi Key |
WOCXQMCIOTUMJV-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C9H8N4O5/c10-9(14)5-3-7(11-1-2-11)8(13(17)18)4-6(5)12(15)16/h3-4H,1-2H2,(H2,10,14)
|
| 化学名 |
5-(aziridin-1-yl)-2,4-dinitrobenzamide
|
| 别名 |
CB-1954; CB1954; CB 1954
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 50~125 mg/mL (198.3~495.7 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.9654 mL | 19.8271 mL | 39.6542 mL | |
| 5 mM | 0.7931 mL | 3.9654 mL | 7.9308 mL | |
| 10 mM | 0.3965 mL | 1.9827 mL | 3.9654 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT00746590 | Terminated | Drug: Prolarix (tretazicar co-administered with caricotamide) |
Hepatocellular Carcinoma | BTG International Inc. | September 2008 | Phase 2 |
| NCT04374240 | Completed | Genetic: AdNRGM | Prostate Cancer | University of Birmingham | March 19, 2013 | Phase 1 |
|
|
|
N-Acetoxy-IQ
Cystemustine
Nitro-Naphthalimide-C2-acylamide
PRKGGRRRRAWGRRRRRRRRRRRRRRAPRKRLTLA
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
