TRi-1

In FaDu cells, TRi-1 (0.679 and 6.79 μM; 6 hours) potently stimulates JNK and p38 phosphorylation while having no effect on cellular glutathione (GSH) contents [1]. TRi-1 (2 μM) H2O2 is added to grown FaDu cells in a concentration- and time-dependent manner to create TRi-1 (0.1-10 μM; 0-10 h) [1]. TRi-1 at 10 nM.

在 FaDu 细胞中，TRi-1（0.679 和 6.79 μM；6 小时）有效刺激 JNK 和 p38 磷酸化，同时对细胞谷胱甘肽 (GSH) 含量没有影响 [1]。将 TRi-1 (2 μM) H2O2 以浓度和时间依赖性方式添加到生长的 FaDu 细胞中，以产生 TRi-1 (0.1-10 μM；0-10 h) [1]。 TRi-1，10 nM。

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TRi-1 以不可逆且 NADPH 依赖的方式抑制重组 TXNRD1 酶活性。[1]
用 TRi-1 处理可在癌细胞系（如 FaDu）中抑制细胞 TXNRD 活性，其效力与金诺芬相当或更强。[1]
TRi-1 处理不影响细胞谷胱甘肽 (GSH) 浓度，而金诺芬和 TRi-2 在高剂量下会降低 GSH。[1]
TRi-1 能有效激活 FaDu 细胞中 JNK 和 p38 的磷酸化，这是与硫氧还蛋白系统抑制一致的下游效应。[1]
TRi-1 将被抑制的 TXNRD1 转化为促氧化剂 SecTRAPs（硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生凋亡蛋白），后者能维持 NADPH 依赖的氧化还原循环（例如与胡桃醌），并导致细胞 H2O2 产生增加。[1]
TRi-1 对 HCT116 细胞的线粒体基础呼吸和最大呼吸容量影响极小，这与严重损害线粒体功能的金诺芬不同。[1]
TRi-1 对 NCI-60 面板中的所有细胞系均表现出细胞毒性活性，其平均生长抑制 50% (GI50) 的浓度为 6.31 µM。它在整个面板中的细胞毒性谱与金诺芬的相似度最低。[1]
TRi-1 对癌细胞（如 A549 肺腺癌细胞）的细胞毒性优于对非癌细胞（如小鼠胚胎成纤维细胞 (MEFs)、原代人成纤维细胞、原代角质形成细胞、CCD841 结肠上皮细胞）。基因敲除 Txnrd1 的 MEFs 对 TRi-1 表现出额外的抗性。[1]
TRi-1 的细胞毒性与谷胱甘肽合成抑制剂丁硫氨酸-亚砜亚胺 (BSO) 联用时会增强，这支持了其作用机制涉及对氧化应激增敏的观点。[1]
TRi-1 在一组人类癌细胞系（包括 p53 改变或 BCL-2 过表达的 HCT116 亚克隆）中的细胞毒性效力受癌细胞基因型的影响较小。[1]

TRi-1（10 mg/kg；静脉注射；每天两次，持续 4 天；或 5 mg/kg；腹腔注射；每周两次，持续 3 周）会损害人类肿瘤异种移植物和同基因小鼠肿瘤

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在携带已建立的人 FaDu 细胞异种移植瘤的 SCID 小鼠中，静脉注射 (i.v.) TRi-1（10 mg/kg，每日两次，持续 4 天）可在四天内显著抑制肿瘤生长，与溶剂对照组相比。[1]
在同一 FaDu 异种移植瘤模型中，用 TRi-1 治疗（5 mg/kg，腹腔注射 (i.p.)，每日一次）导致四天后存活肿瘤区域的 [18F]-FDG 摄取（通过 PET 测量）显著降低，而溶剂治疗的肿瘤则显示摄取增加。TRi-1 治疗组中的一些肿瘤出现了低摄取核心区。[1]
对用 TRi-1 治疗的小鼠的 FaDu 异种移植瘤进行切除和分析，显示在治疗第三天到第四天期间，活化的 caspase-3 染色增加。[1]
在自发形成恶性乳腺癌的 PyMT-MMTV 转基因小鼠中，用 TRi-1 治疗（5 mg/kg，i.p.，每周两次，持续三周）能显著抑制肿瘤生长，与溶剂对照组相比。TRi-1 组的所有小鼠在观察期内均存活。[1]
在携带原位 MDA-MB-231 人乳腺癌异种移植瘤的无胸腺小鼠中，用 TRi-1 治疗（10 mg/kg，通过 i.v. 或 i.p. 给药，方案为前 5 天每日一次，然后停药 2 天，随后每周三次，持续两周）能显著抑制肿瘤生长，与溶剂对照组相比，i.p. 组中有一个肿瘤完全消退。[1]

TXNRD1 和 GSR 抑制的重组酶实验在含有 50 mM Tris pH 7.5、2 mM EDTA 和 0.1 mg/mL 牛血清白蛋白的反应缓冲液中进行。实验在 96 孔板中一式三份进行，通过吸光度变化监测活性。化合物溶解于 DMSO。初始筛选使用重组大鼠 TXNRD1，而同工酶特异性比较则使用人重组 TXNRD1 和 TXNRD2。TXNRD1 测定法改编自使用 DTNB 作为底物或 TXN1 偶联胰岛素还原测定的标准比色皿方案。活性相对于 DMSO 和无酶对照进行归一化。[1]
为了评估不可逆抑制，将 TXNRD1 与化合物在存在或不存在 NADPH 的情况下孵育。然后对酶进行脱盐以去除未结合的化合物和辅助因子，并测量剩余活性。[1]
通过将 NADPH 还原的 TXNRD1 与完全抑制其天然活性的浓度的抑制剂预孵育来测量 SecTRAP 活性。脱盐后，测量残留的 NADPH 依赖性胡桃醌还原，作为促氧化功能获得指标。[1]
通过将 GPX1 酶与化合物在不含 GSH 的情况下预孵育，然后测量残留活性来测试对谷胱甘肽过氧化物酶 1 (GPX1) 的抑制。[1]
通过在将化合物添加到 TXNRD1 反应混合物之前将其与 GSH 预孵育，或者通过在加入胰岛素启动酶反应之前，将化合物与 TXNRD1、NADPH 和不同浓度的 GSH（有时包括 TXN1）共孵育，来测试化合物在细胞亲核物质环境中的抑制特异性。[1]

蛋白质印迹分析 [1]
细胞类型： FaDu 细胞
测试浓度： 0.679 和 6.79 μM
孵育时间： 6 小时
实验结果：有效激活 JNK 和 p38 磷酸化。 -100μM； 48 h) 显示对癌细胞的细胞毒性 [1]。

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细胞毒性测定[1]
细胞类型：白血病、非小细胞肺癌、中枢神经系统癌、结肠癌、黑色素瘤、卵巢癌、肾癌、前列腺癌和乳腺癌细胞
测试浓度： 10 nM-100 μM
孵育时间： 48 小时
实验结果：<显示了针对每种测试细胞系的效力，平均生长抑制率为 50% (GI50) 为 6.31 μM。

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细胞在 37°C、5% CO2 条件下，于含有青霉素/链霉素、L-谷氨酰胺、10% 胎牛血清和 25 nM 亚硒酸钠的培养基中培养。所有实验均一式三份进行。化合物用 DMSO 稀释至终浓度为 0.01%。[1]
对于细胞毒性实验（细胞活力），将细胞与化合物孵育 72 小时，然后测定活力。IC50/GI50 值根据剂量反应曲线计算。[1]
细胞 TXNRD 活性通过处理细胞（如 FaDu）3 小时后进行测量。裂解细胞，并使用胰岛素终点法测定酶活性。[1]
细胞谷胱甘肽 (GSH) 浓度通过将细胞暴露于浓度为各自细胞系 IC50 值 10 倍的化合物中 6 小时后进行测量。[1]
为了分析信号通路，用化合物处理细胞 6 小时，然后裂解并进行 Western blot 分析，以检测 JNK 和 p38 的磷酸化和总水平。[1]
使用 Amplex red 测定法测量细胞 H2O2 产生。用化合物处理细胞，并以浓度和时间依赖的方式荧光监测释放到培养基中的 H2O2。[1]
使用 Seahorse 分析仪评估线粒体呼吸功能。接种细胞并用化合物处理 30 分钟或 5 小时。测量耗氧率 (OCR) 以确定参数，如 ATP 耦合的基础呼吸和最大呼吸容量。[1]
通过用化合物处理细胞，让其在一段时间内形成克隆，然后固定、染色并计数克隆，以评估长期的克隆形成存活能力。[1]

Animal/Disease Models: PyMT-MMTV mice that spontaneously develop malignant breast cancer tumors [1]
Doses: 5 mg/kg
Route of Administration: intraperitoneal (ip) injection, twice a week for 3 weeks
Experimental Results: Impaired tumor growth, significant tumor volume Zoom out.

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A dose escalation toxicity study was performed in Fox Chase SCID mice. Mice were treated once with TRi-1 (0.7–10 mg/kg) via intravenous (i.v.) injection, and health status was observed for up to 72 hours. [1]
For repeated dose toxicity and efficacy studies in tumor-bearing mice, SCID mice were inoculated subcutaneously with FaDu cells. After tumors were established (13 days), mice were treated i.v. twice daily for four days (total of nine injections over five days) with TRi-1 (10 mg/kg), TRi-2 (15 mg/kg), auranofin (10 mg/kg), or vehicle. Mouse health, weight, and tumor volume (by caliper) were monitored daily. [1]
For PET imaging studies, SCID mice bearing FaDu xenografts underwent baseline [18F]-FDG PET imaging after 11 days of tumor growth. Subsequently, mice were treated once daily i.p. with TRi-1 (5 mg/kg) or vehicle. A follow-up PET scan was performed on day three of treatment. Mice were euthanized on day three or four for tumor excision and analysis (e.g., caspase-3 staining). [1]
In the PyMT-MMTV spontaneous breast cancer model, transgenic mice were treated twice a week via i.p. injection with TRi-1 (5 mg/kg), auranofin (10 mg/kg), or vehicle for three weeks. Tumor volume in mammary glands was measured regularly by caliper. [1]
In the MDA-MB-231 orthotopic xenograft model, athymic nude mice were inoculated with cells into the mammary fat pad. When tumors reached a specified volume, mice were randomized and treated with TRi-1 (10 mg/kg) via either i.v. or i.p. injection, or vehicle i.v., on a schedule of once daily for the first five days, then two days off, followed by three times per week for two weeks. Mouse health, weight, and tumor volume were monitored. [1]
The compound TRi-1 was dissolved in DMSO and then formulated in a solution of 10% Cremophor EL, 10% ethanol, and 80% PBS for in vivo administration. [1]

TRi-1 was well tolerated in mice up to the highest administrable dose of 10 mg/kg i.v., with no overt signs of toxicity observed over a 72-hour period in a dose escalation study. [1]
In repeated dose studies with tumor-bearing mice, administration of TRi-1 (10 mg/kg, i.v., twice daily for 4 days) did not cause overt toxicity or significant changes in mouse body weight compared to vehicle controls. [1]
TRi-1 showed minimal effects on mitochondrial respiration in cell culture, unlike auranofin which caused severe impairment, suggesting a potentially better safety profile regarding mitochondrial toxicity. [1]
TRi-1 exhibited reduced cytotoxicity towards various types of non-cancerous primary cells (fibroblasts, keratinocytes, colon epithelial cells) compared to its effects on cancer cell lines. [1]

[1]. Irreversible inhibition of cytosolic thioredoxin reductase 1 as a mechanistic basis for anticancer therapy. Sci Transl Med. 2018 Feb 14;10(428). pii: eaaf7444.

TRi-1 is a selective, irreversible inhibitor of the cytosolic selenoenzyme thioredoxin reductase 1 (TXNRD1). [1]
Its proposed mechanism of anticancer action involves two potential components: irreversible inhibition of the antioxidant activity of TXNRD1, and conversion of the inhibited enzyme into pro-oxidant SecTRAPs that generate H2O2, thereby exacerbating oxidative stress in cancer cells. [1]
The study proposes that selective inhibition of cytosolic TXNRD1, without targeting the mitochondrial isoform TXNRD2, can yield anticancer efficacy with minimal systemic toxicity, as normal adult tissues may better tolerate loss of TXNRD1 function compared to cancer cells which are addicted to this pathway. [1]
TRi-1 was identified through a high-throughput screen of 392,548 compounds. [1]

C12H9CLN2O5S

328.728260755539

327

C, 47.64; H, 3.08; Cl, 10.82; N, 4.27; O, 24.41; S, 9.78

246020-68-8

2801235

Light yellow to yellow solid powder

2.7

111

0

6

3

21

467

0

PRKWNRUVAZZHPH-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C12H9ClN2O5S/c1-20-11-7-6-10(15(16)17)12(14-11)21(18,19)9-4-2-8(13)3-5-9/h2-7H,1H3

2-(4-chlorophenyl)sulfonyl-6-methoxy-3-nitropyridine

TRi-1 (TXNRD1 inhibitor 1); TRi 1 (TXNRD1 inhibitor-1); TRi1 (TXNRD 1 inhibitor 1)

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~62.5 mg/mL (~190.13 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。