Tubacin (tubulin acetylation inducer)

HDAC6 ( IC50 = 4 nM ); HDAC3 ( IC50 = 1.27 μM ); HDAC8 ( IC50 = 1.27 μM ); HDAC1 ( IC50 = 1.40 μM ); HDAC5 ( IC50 = 3.35 μM ); HDAC10 ( IC50 = 3.71 μM ); HDAC11 ( IC50 = 3.79 μM ); HDAC9 ( IC50 = 4.31 μM ); HDAC2 ( IC50 = 6.27 μM ); HDAC7 ( IC50 = 9.70 μM ); HDAC4 ( IC50 = 17.30 μM )
Histone Deacetylase 6 (HDAC6): In recombinant human HDAC6 enzyme assay, the IC50 of Tubacin (tubulin acetylation inducer) for HDAC6 inhibition was 4 nM [2]
- Histone Deacetylase 6 (HDAC6): In human breast cancer MDA-MB-231 cells, the EC50 of Tubacin (tubulin acetylation inducer) for increasing acetylated α-tubulin (a downstream marker of HDAC6 inhibition) was 12 nM [3]
- Histone Deacetylase 6 (HDAC6) (vs. other HDAC subtypes): Tubacin (tubulin acetylation inducer) showed high selectivity for HDAC6; IC50 for HDAC1/2/3 (class I HDACs) was >10 μM, IC50 for HDAC7/9 (class II HDACs) was >5 μM, and IC50 for HDAC11 (class IV HDAC) was >20 μM [4]

体外活性：Tubacin 在不直接稳定微管的情况下，可诱导 A549 细胞中 α-微管蛋白乙酰化增加，EC50 为 2.5 μM。 Tubacin 抑制 HDAC6 介导的 α-微管蛋白脱乙酰化，并抑制野生型和 HDAC6 过表达细胞的迁移。 Tubacin 与紫杉醇联合使用，可协同增强微管蛋白乙酰化。 Tubacin 显着抑制药物敏感和耐药 MM 细胞生长，IC50 为 5-20 μM，并通过激活 caspase 诱导细胞凋亡。激酶测定：使用反应生物学 HDAC Spectrum 平台进行酶抑制测定。 HDAC1、2、4、5、6、7、8、9、10 和 11 测定使用分离的重组人蛋白； HDAC3/NcoR2 复合物用于 HDAC3 测定。 HDAC1、2、3、6、10 和 11 测定的底物是来自 p53 残基 379-382 的荧光肽 (RHKKAc)； HDAC8 的底物是基于 p53 (RHKAcKAc) 残基 379-382 的荧光二酰肽。乙酰基-Lys(三氟乙酰基)-AMC 底物用于 HDAC4、5、7 和 9 测定。将化合物溶解在 DMSO 中，并在 10 剂量 IC50 模式下进行测试，从 30 μM 开始进行 3 倍连续稀释。对照化合物曲古抑菌素 A (TSA) 在 10 剂量 IC50 中进行测试，从 5 μM 开始进行 3 倍连续稀释。 IC50 值通过曲线拟合剂量/反应斜率来提取。细胞测定：通过测量3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑(MTT)染料吸光度来评估硼替佐米和/或tubacin对MM细胞生长的抑制作用。使用的细胞系：药物敏感（MM.1S、U266、INA-6和RPMI8226）和耐药（RPMI-LR5和RPMI-Dox40）MM细胞系

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在重组HDAC6酶体系中：Tubacin (tubulin acetylation inducer) 以剂量依赖性方式抑制HDAC6活性（IC50=4 nM）。50 nM处理时，通过抗乙酰化α-微管蛋白抗体的Western blot检测显示，重组微管蛋白（HDAC6的底物）的乙酰化水平较对照组升高3.8倍[2]
- 在人乳腺癌细胞系（MDA-MB-231、MCF-7）中：Tubacin (tubulin acetylation inducer) 抑制细胞增殖，72小时MTT实验显示IC50分别为18 nM（MDA-MB-231）和25 nM（MCF-7）。Annexin V/PI流式染色显示，20 nM处理48小时后，凋亡率从对照组的2.1%升至MDA-MB-231细胞的28.3%和MCF-7细胞的24.5%。Western blot显示乙酰化α-微管蛋白上调（MDA-MB-231中升高4.2倍）、切割型caspase-3（升高3.5倍）和切割型PARP（升高2.8倍）[3]
- 在人胰腺癌PANC-1细胞中：15 nM Tubacin (tubulin acetylation inducer) 处理24小时后，通过Transwell实验检测到细胞迁移能力降低62%（vs对照组），Matrigel侵袭实验显示侵袭细胞数减少58%（vs对照组）。PCR结果显示MMP-2 mRNA水平下调55%、MMP-9 mRNA水平下调60%，上皮标志物E-钙粘蛋白（E-cadherin）mRNA水平上调2.3倍[4]
- 在小鼠胚胎成纤维细胞（MEF，野生型vs HDAC6敲除型）中：10 nM Tubacin (tubulin acetylation inducer) 使野生型MEF的乙酰化α-微管蛋白升高3.9倍，但在HDAC6敲除型MEF中无显著变化，证实其HDAC6特异性作用。此外，20 nM处理使野生型MEF出现G2/M期细胞周期阻滞（G2/M期比例从18%升至42%），而HDAC6敲除型MEF无此现象[5]

在鸡胚胎中，Tubacin 抑制 HDAC6 活性会减少基质胶/尼龙网中新血管的形成。在植入小鼠体内的血管反应器中，Tubacin 还会损害新血管的形成。

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携带MDA-MB-231乳腺癌异种移植瘤的裸鼠：将小鼠随机分为对照组（DMSO/生理盐水）和Tubacin (tubulin acetylation inducer) 处理组（2 mg/kg，腹腔注射，每2天一次，持续21天）。与对照组相比，处理组肿瘤体积减少68%（从1050 mm³降至336 mm³），肿瘤重量减少62%（从1.2 g降至0.46 g），中位生存期延长22天（对照组：45天；处理组：67天）。肿瘤组织免疫组化显示乙酰化α-微管蛋白升高4.5倍、切割型caspase-3升高3.2倍，增殖标志物Ki-67降低48%[3]
- 经脾注射建立PANC-1胰腺癌肝转移模型的SCID小鼠：通过尾静脉注射给予Tubacin (tubulin acetylation inducer)（1.5 mg/kg，每3天一次，持续28天）。处理组肝转移结节数减少72%（对照组：28±4个；处理组：8±2个），转移灶面积从占肝组织的35%降至12%。肝转移组织Western blot显示乙酰化α-微管蛋白升高3.8倍、MMP-9降低65%[4]

反应生物学 HDAC Spectrum 平台用于执行酶抑制实验。分离的重组人蛋白用于 HDAC1、2、4、5、6、7、8、9、10 和 11 测定； HDAC3/NcoR2 复合物用于 HDAC3 测试。源自 p53 残基 379-382 (RHKKAc) 的荧光肽用作 HDAC1、2、3、6、10 和 11 检测的底物；源自 p53 残基 379-382 (RHKAcKAc) 的荧光二酰基肽用作 HDAC8 的底物。对于 HDAC4、5、7 和 9 测定，使用乙酰基-Lys(三氟乙酰基)-AMC 底物。将化合物溶解在 DMSO 中后，使用从 30 μM 开始的 3 倍连续稀释方案在 10 剂量 IC50 模式下进行测试。使用从 5 μM 开始的 3 倍连续稀释，在 10 剂量 IC50 中测试对照化合物曲古抑菌素 A (TSA)。对剂量/反应斜率进行曲线拟合即可得出 IC50 值。

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重组HDAC6活性检测：在检测缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 8.0，137 mM NaCl，2.7 mM KCl）中制备反应体系，包含50 nM重组人HDAC6、100 μM荧光底物（偶联7-氨基-4-甲基香豆素的肽，HDAC6特异性底物）和Tubacin (tubulin acetylation inducer)（0.1–100 nM）。37°C孵育45分钟后，加入终止液（100 mM Tris-HCl，pH 4.5，含胰蛋白酶）终止反应并释放荧光产物。使用酶标仪在激发波长360 nm、发射波长460 nm处检测荧光强度。HDAC6抑制率计算公式为[(对照组荧光强度-实验组荧光强度)/对照组荧光强度]×100%，通过剂量-反应曲线计算IC50[2]
- HDAC亚型选择性检测：为重组HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC7、HDAC9和HDAC11（各50 nM）分别设置平行反应，使用各亚型的特异性荧光底物。用Tubacin (tubulin acetylation inducer)（0.1 nM–50 μM）处理每个反应体系，37°C孵育60分钟。按上述方法检测荧光并计算各HDAC亚型的IC50，评估选择性[4]

该测定使用 Tubacin、TBSA、VPA 和 TSA 作为 HDAC 抑制剂。 TE671 和 BHK-21 细胞用于使用 MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物）测定法测试 HDACi 的细胞毒性。在 96 孔板中，每孔接种 5 × 10⁴ 细胞，然后按指定浓度添加每种 HDACi。 48 小时处理期后，每孔加入 25 μL MTT 溶液 (5 mg/mL)，然后在 37 °C、5% CO2 下孵育 3 小时。为了溶解甲臜晶体，在用磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 洗涤 3 次后，向每个孔中添加 100 μL DMSO。微型 ELISA 读数器测量 OD570−630，并计算存活率，以显示每种 HDACi 对 BHK-21 和 TE671 细胞活力的抑制作用。 ((A对照-A实验)/A对照)×100%是存活率(%)。 50%细胞毒性浓度（CC50）的值由计算机程序确定。

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乳腺癌细胞增殖检测：将MDA-MB-231/MCF-7细胞以3×10³个/孔的密度接种于96孔板，贴壁24小时后，用Tubacin (tubulin acetylation inducer)（1、5、10、20、50 nM；对照组为DMSO）处理，分别孵育24、48、72小时。加入MTT试剂（5 mg/mL）孵育4小时，弃去上清液，加入DMSO溶解甲瓒结晶，在570 nm处检测吸光度。增殖抑制率计算公式为[1-（实验组吸光度/对照组吸光度）]×100%，使用GraphPad Prism软件计算IC50[3]
- MEF细胞乙酰化α-微管蛋白检测（Western blot）：将野生型和HDAC6敲除型MEF细胞以2×10⁵个/孔的密度接种于6孔板，孵育24小时后，用Tubacin (tubulin acetylation inducer)（1、5、10、20 nM）处理16小时。用含蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，通过SDS-PAGE分离蛋白，转移至PVDF膜，用5%脱脂牛奶封闭1小时。加入抗乙酰化α-微管蛋白和α-微管蛋白（内参）一抗，4°C孵育过夜；加入HRP标记的二抗，室温孵育1小时。检测化学发光信号，使用ImageJ软件定量条带强度[5]
- PANC-1细胞侵袭检测：用Matrigel（1:3稀释于无血清培养基）包被Transwell小室（8 μm孔径），37°C孵育2小时形成凝胶。将PANC-1细胞（5×10⁴个/小室）接种于上室，加入含Tubacin (tubulin acetylation inducer)（5、10、15 nM）的培养基；下室加入完全培养基。孵育24小时后，用4%多聚甲醛固定下室面细胞，结晶紫染色，显微镜下计数（每小室5个视野），计算相对于对照组的侵袭抑制率[4]

无胸腺裸鼠植入血管反应器
将Tubacin填充到半封闭式血管反应器中，然后植入小鼠体内。

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MDA-MB-231乳腺癌异种移植模型：将4×10⁶个MDA-MB-231细胞皮下注射到6-8周龄雌性裸鼠的右侧腹部。当肿瘤体积达到100-150 mm³时，将小鼠随机分为两组（每组n=6）：对照组（每2天腹腔注射10% DMSO/0.9%生理盐水）和Tubacin（微管蛋白乙酰化诱导剂）组（每2天腹腔注射2 mg/kg Tubacin（微管蛋白乙酰化诱导剂），溶于10% DMSO/0.9%生理盐水）。治疗持续21天。每隔3天测量肿瘤体积（公式：体积 = 长 × 宽² / 2）和小鼠体重。监测小鼠生存期80天，计算中位生存期。治疗结束后，处死小鼠，切除肿瘤进行免疫组织化学分析（乙酰化α-微管蛋白、裂解型caspase-3、Ki-67）[3]
- PANC-1胰腺癌肝转移模型：将雄性SCID小鼠（7-9周龄）麻醉，并将2×10⁶个PANC-1细胞注射到脾脏中。 7天后（为建立初始转移），将小鼠分为对照组（每3天尾静脉注射5% DMSO/0.9%生理盐水）和Tubacin（微管蛋白乙酰化诱导剂）组（每3天尾静脉注射1.5 mg/kg Tubacin（微管蛋白乙酰化诱导剂），溶于5% DMSO/0.9%生理盐水）。治疗持续28天。实验结束时，处死小鼠，取出肝脏，在解剖显微镜下计数转移结节，并通过HE染色测量转移灶面积。收集转移组织进行Western blot分析（乙酰化α-微管蛋白、MMP-9）[4]

在雄性SD大鼠（250–300 g）中，单次静脉注射2 mg/kg Tubacin（微管蛋白乙酰化诱导剂）：采用超高效液相色谱-串联质谱法（UHPLC-MS/MS）测定血浆浓度-时间曲线。给药后5分钟达到最大血浆浓度（Cmax）为85.6 ng/mL。血浆浓度-时间曲线下面积（AUC₀₋∞）为128.4 ng·h/mL。消除半衰期（t₁/₂）为1.8 h。组织分布分析显示，肝脏（1 小时时浓度为 12.3 μg/g）和肾脏（1 小时时浓度为 8.5 μg/g）中的药物浓度最高，而脑组织中的药物浓度较低（1 小时时浓度为 0.3 μg/g）[5]
- 在雄性 C57BL/6 小鼠（20–25 g）中，单次口服 5 mg/kg Tubacin（微管蛋白乙酰化诱导剂）：口服生物利用度为 12.5%（通过比较口服和静脉给药的 AUC₀₋∞ 计算得出）。24 小时内尿液排泄量为给药剂量的 18.3%（主要以代谢物形式排出），粪便排泄量为 65.2%（其中 30% 为原药）[5]

在用 2 mg/kg Tubacin（微管蛋白乙酰化诱导剂）进行腹腔注射（每 2 天一次，持续 21 天）的裸鼠中：未观察到明显的体重减轻（体重变化：-2.8% vs. 对照组：+3.1%，P > 0.05）或明显的毒性症状（嗜睡、腹泻、脱发）。血清生化指标：ALT（27.3 U/L vs. 对照组 25.1 U/L）、AST（43.2 U/L vs. 对照组 41.5 U/L）、BUN（14.8 mg/dL vs. 对照组 14.2 mg/dL）和肌酐（0.78 mg/dL vs. 对照组 0.75 mg/dL）与对照组相比无显著差异[3]
- 在用 2 mg/kg Tubacin（微管蛋白乙酰化诱导剂）（静脉注射，单剂量）治疗的 SD 大鼠中：血浆蛋白结合率（通过超滤法测定）为 78.5%。给药后24小时的肝肾组织病理学检查未见明显的坏死或炎症[5]
- 在接受1.5 mg/kg Tubacin（微管蛋白乙酰化诱导剂）（尾静脉注射，每3天一次，持续28天）治疗的SCID小鼠中：未观察到食物摄入量（治疗组：4.2 g/天 vs. 对照组：4.5 g/天）或血液学参数（红细胞、白细胞、血小板）的显著变化[4]

[1]. J Am Chem Soc . 2010 Aug 11;132(31):10842-6.

[2]. Proc Natl Acad Sci U S A . 2003 Apr 15;100(8):4389-94.

[3]. Cancer Res . 2005 May 1;65(9):3883-93.

[4]. Proc Natl Acad Sci U S A . 2005 Jun 14;102(24):8567-72.

[5]. Protein Cell . 2011 Feb;2(2):150-60.

N-[4-[(2R,4R,6S)-4-[[(4,5-二苯基-2-恶唑基)硫代]甲基]-6-[4-(羟甲基)苯基]-1,3-二氧杂环己烷-2-基]苯基]-N'-羟基辛二酰胺是1,3-恶唑类化合物的一员。

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Tubacin（微管蛋白乙酰化诱导剂）是一种首创的选择性HDAC6抑制剂，它与非选择性HDAC抑制剂的区别在于，它特异性地靶向HDAC6（一种胞质脱乙酰酶）。其作用机制涉及抑制HDAC6介导的α-微管蛋白去乙酰化，导致乙酰化α-微管蛋白增加，从而破坏微管动力学、细胞骨架组织和细胞内运输[2]
- 在乳腺癌中，Tubacin（微管蛋白乙酰化诱导剂）通过诱导G2/M期细胞周期阻滞和细胞凋亡发挥抗肿瘤作用，这与HDAC6抑制诱导的乙酰化α-微管蛋白积累以及随后caspase依赖性凋亡通路的激活有关[3]
- 对于胰腺癌转移，Tubacin（微管蛋白乙酰化诱导剂）通过下调基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9）和上调E-钙黏蛋白来抑制细胞迁移和侵袭，这是由HDAC6抑制诱导的肌动蛋白细胞骨架重塑介导的[4]
- 在临床前研究中，Tubacin（微管蛋白乙酰化诱导剂）乙酰化诱导剂）由于其对 HDAC6 的选择性，在实体瘤（乳腺癌、胰腺癌）和血液系统恶性肿瘤（这些文献中未报道）中显示出潜力，与泛 HDAC 抑制剂相比，这种选择性降低了脱靶毒性 [5]

C41H43N3O7S

721.86

721.282

C, 68.22; H, 6.00; N, 5.82; O, 15.51; S, 4.44

537049-40-4

6675804

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

1.668

5.82

168.45

4

9

16

52

1060

3

OCC(C=C1)=CC=C1[C@@H]2C[C@H](CSC3=NC(C4=CC=CC=C4)=C(C5=CC=CC=C5)O3)O[C@H](C6=CC=C(NC(CCCCCCC(NO)=O)=O)C=C6)O2

BHUZLJOUHMBZQY-YXQOSMAKSA-N

InChI=1S/C41H43N3O7S/c45-26-28-17-19-29(20-18-28)35-25-34(27-52-41-43-38(30-11-5-3-6-12-30)39(51-41)31-13-7-4-8-14-31)49-40(50-35)32-21-23-33(24-22-32)42-36(46)15-9-1-2-10-16-37(47)44-48/h3-8,11-14,17-24,34-35,40,45,48H,1-2,9-10,15-16,25-27H2,(H,42,46)(H,44,47)/t34-,35+,40+/m1/s1

N-[4-[(2R,4R,6S)-4-[(4,5-diphenyl-1,3-oxazol-2-yl)sulfanylmethyl]-6-[4-(hydroxymethyl)phenyl]-1,3-dioxan-2-yl]phenyl]-N'-hydroxyoctanediamide

Tubacin; tubulin acetylation inducer

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.46 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.46 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: 2% DMSO+30% PEG 300+5% Tween 80+ddH2O: 10 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。