Vadadustat (PG-1016548; AKB-6548)   中文名称: 伐度司他

HIF-PH/hypoxia-inducible factor prolyl hydroxylase
HIF prolyl hydroxylases (PHDs), specifically PHD2
Inhibition of PHDs leads to stabilization of HIF-1α under normoxic conditions.[4]

Vadadustat 可改善铁的动员并刺激人体自然产生促红细胞生成素。 Vadadustat 以剂量依赖性方式提高网织红细胞、血浆 EPO 和 Hb 水平，并且在健康志愿者和慢性肾病患者中具有良好的耐受性。 vadadustat诱导的血浆EPO水平增加遵循典型的昼夜模式，在后续剂量之前达到峰值，并且其大小与中等海拔时的生理增加相似。通过提高转铁蛋白水平和减少铁调素，vadadustat 可促进铁稳态。与传统 ESA 相比，每天一次口服 vadadustat 已进行滴定以提高 Hb 并将其维持在目标范围内，可能会带来许多好处 [1]。值得注意的是，Vadadustat 的半衰期约为 4.5 小时。患者的平均血红蛋白水平从基线时的 9.91 g/dL 升至第 29 天的 10.54 g/dL。铁蛋白水平从基线时的 334.1 ng/mL 升至第 29 天的 271.7 ng/mL [2]。

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使用40 μM Vadadustat预处理（6小时）可下调人骨髓间充质基质细胞（BM-MSCs）中免疫相关基因（IL24、IL1B、CXCL8、PDCD1LG1、PDCD1LG2、HIF1A、CCL2、IL6）的表达，并上调IL17RD、CCL28和LEP。
分泌组分析显示，用40 μM Vadadustat处理24小时后，IL6分泌降低51%，HGF降低47%，CCL7降低42%，CXCL8降低40%。
混合淋巴细胞反应（MLR）中，Vadadustat增强了MSCs对同种异体刺激的人外周血单个核细胞（PBMCs）增殖的抑制作用。
Transwell迁移实验表明，与对照MSCs分泌组相比，Vadadustat预处理的MSCs分泌组使单核细胞富集的PBMCs趋化性降低46%。[4]

目前用红细胞生成刺激剂治疗慢性肾病（CKD）贫血可导致血红蛋白振荡超过目标范围，循环促红细胞生成素水平升高。Vadadustat（AKB-6548）是一种新型的、可滴定的口服缺氧诱导因子脯氨酰羟化酶抑制剂，可诱导内源性促红细胞生成素合成并增强铁动员。在这项为期20周的双盲、随机、安慰剂对照的2b期研究中，我们评估了每天一次的vadadustat对3a至5期非透析依赖性CKD患者的疗效和安全性。主要终点是在治疗的最后2周内，达到或维持平均血红蛋白水平11.0 g/dl或更高，或血红蛋白平均增加1.2 g/dl或以上的患者百分比。值得注意的是，服用vadadustat的54.9%患者和服用安慰剂的10.3%患者达到了主要终点。与安慰剂组相比，服用vadadustat的患者网织红细胞和总铁结合能力显著增加，血清hepcidin和铁蛋白水平显著降低。两组的不良事件总发生率相当。在接受vadadustat和安慰剂治疗的患者中，严重不良事件的发生率分别为23.9%和15.3%。vadadustat手臂有3人死亡。因此，这项2b期研究表明，vadadustat以可预测和可控的方式提高和维持血红蛋白水平，同时增强非透析依赖性CKD患者的铁动员[1]。

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用vadadustat或赋形剂治疗患有和不患有CKD的野生型和ERFE敲除小鼠。在野生型和ERFE敲除CKD模型中，vadadustat同样有效，这可以从标准化血红蛋白浓度、十二指肠铁转运蛋白表达增加、血清hepcidin水平降低和组织铁浓度降低中得到证明。这与ERFE无关的铁动员增加是一致的。Vadadustat治疗还降低了血清尿素氮和肌酐浓度，并降低了肾纤维化标志物的表达。最后，vadadustat影响成纤维细胞生长因子23（FGF23）的分布：在非CKD小鼠中，vadadostat增加了血浆总FGF23，与完整的FGF23不成比例，这与缺氧诱导因子-1α和促红细胞生成素对FGF23产生和代谢的已知影响一致。然而，在患有CKD的小鼠中，vadadustat显著降低了FGF23的总量和完整性，这可能是由于肾功能丧失减少造成的。因此，在这种CKD模型中，vadadustat独立于ERFE改善贫血，改善肾脏参数，降低FGF23。vadadustat如何影响人类CKD进展值得未来研究。[3]

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在一项Ia期单剂量研究中，8名健康男性（6人接受Vadadustat，2人接受安慰剂）服用Vadadustat后，其内源性促红细胞生成素（EPO）水平的升高程度与预期的生理性昼夜变化相当。[2]
在一项IIa期开放标签剂量递增研究中，10名3-4期非透析依赖性（NDD）慢性肾病（CKD）患者每日一次接受Vadadustat治疗28天（起始剂量：3期400 mg，4期300 mg）。血红蛋白水平从基线的9.91 g/dL升至第29天的10.54 g/dL，血清铁蛋白水平从334.1 ng/mL降至271.7 ng/mL。[2]
在一项针对210名NDD-CKD患者的IIb期、多中心、双盲、随机、安慰剂对照研究中，与安慰剂组相比，Vadadustat治疗组有显著更高比例的患者达到成功的血红蛋白反应（≥11.0 g/dL 或较基线升高≥1.2 g/dL）（54.9% vs 10.3%, p<0.0001）。[2]
在一项涉及94名血液透析患者的研究中，患者从ESA转为Vadadustat治疗（每日一次300 mg、每日一次450 mg或每周三次450 mg），从基线到第16周，平均血红蛋白水平保持稳定（变化范围为-0.02至-0.04 g/dL）。[2]

抗体阵列蛋白组分析仪分析BM-MSCs细胞因子分泌[4]
使用Proteome Profiler Human XL细胞因子阵列检查了Vadadustat处理的BM-MSCs与对照细胞相比分泌活性的相对变化。基于Proteome Profiler膜的抗体阵列能够同时测量单个样本中102种人类细胞因子的相对水平。为了本试验的目的，来自6个供体的BM-MSC在6孔板上的标准生长培养基中生长，直到达到约80%的融合。在实验开始前24小时，所有细胞都用IFNγ（25ng/mL）预处理。第二天，洗涤细胞，用OptiMEM培养基代替培养基，不含酚红，FBS含量降至4%，并补充1.0%青霉素-链霉素，含/不含Vadadustat40μM。每个群体的细胞被处理三次。处理24小时后，将细胞上清液收集在Eppendorf管（1.5 mL）中，以4500 rpm离心5分钟，转移到新管中，混合并分成200µL等分试样，在-80°C下冷冻。在分析之前，将6名供体的细胞上清液在冰上解冻并合并。根据制造商的说明进行分析。使用ChemiDoc MP成像系统检测膜的化学发光，并使用Image Lab软件测量和定量每个点的积分光密度。

使用Vadadustat对人骨髓间充质干细胞进行预处理[4]
在本研究中，通过用选择性PHDs抑制剂Vadadustat（AKB-6548）培养细胞来实现“药理学”缺氧。根据初步数据（HIF-1α稳定性的蛋白质印迹分析和MTT试验），我们决定选择40μM的Vadadustat浓度进行进一步研究。根据制造商的说明，将Vadadustat溶解并储存在-80°C的DMSO中，作为5 mM储备溶液。值得注意的是，培养基中最终存在的DMSO不超过0.8%（v/v），这不会引起任何明显的细胞毒性作用（MTT分析如补充图S1所示）。对照组MSCs单独用相同剂量（0.8%v/v）的DMSO孵育。

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混合淋巴细胞反应（MLR）测定[4]
为了进行MLR测定，从6名健康献血者的血沉棕黄层中分离出人PBMC。该测定在三组独立的实验中分别对两名供体进行。使用6个经IFNγ（25 ng/mL）预处理的BM-MSCs群体的上清液，用/不用Vadadustat40μM处理24小时，以确定Vadadustat预处理对MSCs分泌组免疫调节活性的影响。在这项研究中，一半的分离的PBMC用γ射线灭活90分钟。接下来，在自体（AAir，BBir）和异体（ABir，BAir）刺激的组合中，将1×105个应答（活性）和辐照（刺激）PBMC接种到96孔板的孔中。细胞在补充了10%FBS和抗生素-抗真菌溶液（1%青霉素-链霉素；0.5%两性霉素B）的RPMI-1640中维持。MLR测定使用96孔板进行。在研究Vadadustat对自身和同种异体刺激的PBMCs的直接影响及其对MSCs和PBMCs之间相互作用的部分孔中，每天向实验孔中加入40μM Vadadusta作为储备溶液。每天用等体积的DMSO处理对照孔。在研究Vadadustat预处理对MSCs和PBMCs相互作用的间接影响的剩余孔中，在实验开始时加入一次RPMI-1640生长培养基和对照或Vadadusta预处理MSCs 24小时细胞培养上清液的1:1混合物。然后在37°C、5%CO2的加湿气氛中培养板5天。细胞培养5天后，在培养的最后18小时，用1μCi/孔的3H-胸苷（113 Ci/nmol，NEN）脉冲PBMC，然后用自动细胞采集器收获。使用闪烁计数器根据“每分钟校正计数”（CCPM）报告的放射性水平测量3H-胸苷掺入细胞的情况。所有治疗均进行三次。

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Transwell迁移分析[4]
使用Cultrex®的“96孔细胞迁移测定”试剂盒研究了40μMVadadustat预处理对BM-MSCs分泌组趋化特性的影响，该试剂盒利用了具有8μM孔径的聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）膜的Boyden室的简化设计。对于迁移试验，我们使用了悬浮在含有0.5%人血清的RPMI中的富含单核细胞的PBMCs（n=4），密度为4×106/mL。将来自每个供体的50μL细胞悬浮液施加到板的上腔（每个孔2×104个细胞），每个细胞两次。将每孔150µL的生长培养基（含0.5%人血清的RPMI）或来自7个MSCs群体培养物的新鲜解冻的混合上清液施加到板的底部腔室中。三种处理方法中的每一种：单独使用生长培养基、对照MSCs的上清液和用Vadadustat预处理的MSCs，均重复使用。然后在标准条件下（37°C，5%CO2）孵育板48小时。孵育后，小心抽吸上室，使用含有钙黄绿素乙酰甲酯（钙黄绿素AM）的细胞解离溶液分离迁移到板底部隔室的细胞。然后，将平板在37°C下孵育30分钟。在此期间，细胞内化钙黄绿素AM，然后细胞酯酶将其裂解为游离钙黄绿素。释放的钙黄绿素具有强烈的荧光，用于估计迁移细胞的数量。孵育后，将板拆开，并在Perkin-Elmer Victor X4板读取器 上以485nm激发和520nm发射对底室进行荧光读取。通过比较孔中MSCs培养上清液的荧光与孔中单独生长培养基的荧光来评估细胞迁移的程度，并表示为迁移细胞的比例。

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BM-MSCs的分离与培养： 从骨髓穿刺液中分离人BM-MSCs，使用低糖DMEM（含10% FBS和抗生素）培养。细胞在37°C、5% CO₂条件下生长，每两天更换培养基。使用第4–6代细胞进行实验。
Vadadustat预处理： BM-MSCs在常氧条件下用40 μM Vadadustat处理6小时（用于基因表达）或24小时（用于分泌组分析）。对照组细胞用等量DMSO（0.8% v/v）处理。
RNA提取与实时PCR： 提取总RNA，进行逆转录，使用SYBR Green进行实时PCR。基因表达以B2M为内参归一化。
分泌组分析： 使用Proteome Profiler Human XL Cytokine Array和Luminex多重免疫分析法分析IL6、CXCL8、IL4、IL10和HGF的分泌水平。
混合淋巴细胞反应（MLR）： 从血沉棕黄层分离PBMCs，经辐照灭活后与MSCs或其分泌组共培养。培养5天后，通过³H-胸腺嘧啶掺入法评估增殖情况。
Transwell迁移实验： 将单核细胞富集的PBMCs置于上室，MSCs分泌组置于下室。培养48小时后，使用calcein-AM荧光法评估细胞迁移。[4]

完整方法详见补充材料。将6周龄雄性EKO小鼠及其野生型同窝小鼠分别喂食含或不含0.2%腺嘌呤（可诱导慢性肾脏病）的饲料，持续8周。为评估vadadustat在慢性肾脏病模型中的治疗效果，在饲料喂养的最后3周，小鼠每日灌胃给予vadadustat溶液（剂量为75 mg/kg/d）或溶剂对照。小鼠在14周龄时处死。我们采集了全血、血清、血浆、肝脏、脾脏……[3]

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vadadustat 对 WT 和 EKO 小鼠（伴或不伴 CKD）红细胞生成参数的影响……[3]
为了评估 vadadustat 在有或无 ERFE 和 CKD 的情况下的疗效，我们评估了每日 vadadustat 治疗 3 周对 WT 和 EKO 小鼠（伴或不伴腺嘌呤饮食诱导的 CKD）的影响。在非 CKD 模型中，小鼠没有贫血，vadadustat 使 WT 组和 EKO 组的血红蛋白浓度较治疗前值均有相似的升高（补充图 S1）。在 CKD 模型中，正如预期的那样，WT 组和 EKO 组均出现了中度贫血……[3]

吸收、分布和排泄
单次和重复给药后，vadadustat 均能迅速吸收。vadadustat 的达峰时间 (Tmax) 为 2 至 3 小时。健康受试者重复服用 vadadustat 后未检测到明显的药物蓄积。与空腹状态相比，服用 450 mg vadadustat 片剂并同时进食标准高脂餐后，Cmax 和 AUC 分别降低了 27% 和 6%。Vadadustat 可空腹或与食物同服。vadadustat 的平均血药浓度/血浆浓度比值从 0.50 升至 0.55，表明 vadadustat 在红细胞中的滞留量极低。
健康受试者单次服用 650 mg 放射性标记的 vadadustat 后，85.9% 的剂量被回收，其中 58.9% 出现在尿液中，26.9% 出现在粪便中。少量未代谢的vadadustat经尿液和粪便排出（分别<1%和9%）。
慢性肾脏病患者vadadustat的表观分布容积为11.6 L。
健康受试者单次服用300 mg vadadustat后，表观总清除率范围为1.7 L/h至1.9 L/h。慢性肾脏病患者的vadadustat清除率为0.8 L/h。

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代谢/代谢物
Vadadustat主要通过UDP-葡萄糖醛酸转移酶（UGT）代谢，通过直接葡萄糖醛酸化形成O-葡萄糖醛酸苷结合物。vadadustat通过细胞色素P450（CYP）的代谢极少。瓦达司他的主要代谢产物是瓦达司他-O-葡糖醛酸苷，其血浆放射性AUC占总放射性的15%，并由多种UGT酶催化，包括UGT1A1、UGT1A7、UGT1A8和UGT1A9。瓦达司他酰基葡糖醛酸苷是次要代谢产物，占血浆总放射性的0.047%。瓦达司他的所有代谢产物均无活性。

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生物半衰期
在透析依赖性慢性肾脏病患者中，瓦达司他的半衰期为9.2小时。

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在一项针对健康男性的1a期单剂量研究中，瓦达司他的半衰期约为4.5小时。[2]

蛋白结合
在人血浆中，vadadustat 的蛋白结合率≥99.5%。

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在 Pergola 等人开展的 IIb 期研究中，Vadadustat 组最常见的药物相关不良事件是腹泻 (4.3%) 和恶心 (4.3%)。与安慰剂组相比，Vadadustat 组高血压的发生率更高，但所有报告高血压的患者均有既往高血压病史。未观察到对血胆固醇水平的影响。[2]
在一项纳入 94 名血液透析患者的试验中，共报告了 78 例 (83.0%) 不良事件和 13 例 (13.8%) 严重不良事件，均与药物无关。[2]

[1]. Vadadustat, a novel oral HIF stabilizer, provides effective anemia treatment in nondialysis-dependent chronic kidney disease. Kidney Int. 2016 Nov;90(5):1115-1122.

[2]. Hypoxia-Inducible Factor Prolyl Hydroxylase Inhibitors: A Potential New Treatment for Anemia in Patients With CKD. Am J Kidney Dis. 2017 Feb 24. pii: S0272-6386(17)30110-5.

[3]. Amelioration of chronic kidney disease-associated anemia by vadadustat in mice is not dependent on erythroferrone. Kidney Int. 2021 Jul;100(1):79-89.

[4]. Vadadustat, a HIF Prolyl Hydroxylase Inhibitor, Improves Immunomodulatory Properties of Human Mesenchymal Stromal Cells. Cells. 2020 Nov 1;9(11):2396..

晚期肾病最常见的症状之一是贫血，其主要原因是肾脏无法对贫血状况做出反应，无法相应地增加促红细胞生成素（EPO）的产生。传统上，治疗慢性肾脏病（CKD）相关贫血的方法是使用外源性促红细胞生成剂（ESA），例如达贝泊汀α，以对抗内源性EPO产生的减少。虽然ESA有效，但过度使用与心血管并发症、CKD进展和总体死亡率增加有关。对于CKD相关贫血患者，一种相对较新的替代治疗方案是使用低氧诱导因子脯氨酰羟化酶（HIF-PH）小分子抑制剂。这些药物抑制脯氨酰羟化酶结构域的氧传感器，模拟低氧环境并激活低氧诱导因子。这些转录因子发挥着多种作用，包括刺激红细胞生成。Vadadustat 是一种口服的 HIF-PH 抑制剂，其安全性和有效性不劣于达贝泊汀α，可用于治疗接受透析的慢性肾脏病 (CKD) 患者的贫血。该药最初在日本获批，并于 2023 年 4 月获得欧洲药品管理局 (EMA) 批准，用于治疗接受长期维持性透析的 CKD 成人患者的症状性贫血。Vadadustat 目前正在等待美国食品药品监督管理局 (FDA) 的审批。Vadadustat 未达到预设的非透析依赖性 CKD 患者心血管安全性非劣效性标准。Vadadustat 是一种口服生物利用度高的缺氧诱导因子脯氨酰羟化酶 (HIF-PHI) 抑制剂，具有潜在的抗贫血和抗炎活性。服用后，vadadustat 可与 HIF-PH 结合并抑制其活性。HIF-PH 是一种在正常氧条件下负责降解 HIF 家族转录因子的酶。这可防止 HIF 分解并促进 HIF 活性。HIF 活性增强可导致内源性促红细胞生成素生成增加，从而增强红细胞生成。此外，它还能降低肽类激素铁调素的表达，提高铁的利用率，并提升血红蛋白 (Hb) 水平。HIF 可调节基因表达以响应低氧水平，其中包括红细胞生成和铁代谢所需的基因。此外，HIF 1-α (HIF1A) 可能通过 HIF 依赖性地调控肺泡上皮细胞的葡萄糖代谢，在急性肺损伤 (ALI) 期间减轻炎症。

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药物适应症
Vadadustat 适用于治疗接受长期维持性透析的成人慢性肾脏病 (CKD) 相关症状性贫血。
Vafseo 适用于治疗接受长期维持性透析的成人慢性肾脏病 (CKD) 相关症状性贫血。
治疗慢性疾病引起的贫血

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作用机制
缺氧诱导因子 (HIF) 是负责细胞在缺氧条件下存活的转录因子。它们调节多种过程，包括血管生成、细胞生长和分化、各种代谢过程以及红细胞生成。在常氧条件下，HIF 通过脯氨酰羟化酶双加氧酶的羟基化作用降解。Vadadustat 是一种 HIF-脯氨酰羟化酶 (HIF-PHI) 抑制剂，可在非缺氧条件下促进 HIF 活性升高。Vadadustat 诱导的 HIF 水平升高可刺激内源性促红细胞生成素的产生，增加铁动员，从而促进血红蛋白水平逐渐升高并纠正铁代谢。对于慢性肾脏病贫血患者（其正常红细胞生成功能障碍），这可纠正贫血。

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药效学
本研究比较了 vadadustat 与达贝泊汀α治疗透析依赖性慢性肾脏病成人患者贫血的疗效。Vadadustat 的疗效不劣于达贝泊汀α，并达到了主要血红蛋白水平终点。在健康受试者中，服用 600 mg 至 1200 mg 的 vadadustat 后，该药物的使用与具有临床意义的 QTc 间期延长无关。与达贝泊汀α相比，接受 vadadustat 治疗的透析依赖性慢性肾脏病患者的死亡、心肌梗死和卒中风险相似。使用 vadadustat 也可能导致血栓栓塞事件、肝功能损害、肝毒性、惊厥以及血压升高。

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Vadadustat 是一种选择性 HIF 脯氨酰羟化酶抑制剂，可在常氧条件下模拟缺氧。
目前，它正处于治疗慢性肾脏病继发性贫血的 III 期临床试验阶段。
用 Vadadustat 预处理 MSCs 可能增强其免疫调节特性，从而潜在地提高其在自身免疫性疾病中的治疗效果。[4]

C14H11CLN2O4

306.7011

306.041

C, 54.83; H, 3.62; Cl, 11.56; N, 9.13; O, 20.87

1000025-07-9

23634441

White to off-white solid powder

2.312

99.52

3

5

4

21

393

0

C1=CC(=CC(=C1)Cl)C2=CC(=C(N=C2)C(=O)NCC(=O)O)O

JGRXMPYUTJLTKT-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C14H11ClN2O4/c15-10-3-1-2-8(4-10)9-5-11(18)13(16-6-9)14(21)17-7-12(19)20/h1-6,18H,7H2,(H,17,21)(H,19,20)

(5-(3-chlorophenyl)-3-hydroxypicolinoyl)glycine

AKB-6548; PG1016548; B-506; AKB 6548; AKB-6548; Vafseo; PG-1016548; Vadadustat [USAN]; B506; PG1016548; PG 1016548; B506; AKB6548; PG-1016548;Vadadustat

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~326.05 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。