| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PTEN (IC50 = 35 nM)
PTEN (phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10). Inhibition constants (with OMFP as substrate): Kic = 27 ± 6 nM, Kiu = 45 ± 11 nM (noncompetitive inhibition). [1] With PIP3 as substrate: Kic = 17 ± 8 nM, Kiu = 74 ± 31 nM (n=2). [1] IC50 (with OMFP as substrate): 46 ± 10 nM. [1] Previously determined IC50 with PIP3 as substrate: 35 ± 2 nM. [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
由于 VO-OHpic 是一种空间位阻较大的化合物，含有两个 OHpic 基团和一个氧代配体，因此结合底物产生的空间位阻会影响抑制剂的后续结合。在低纳摩尔剂量下（IC50，46±10 nM），VO-OHpic 可显著降低 PTEN 活性，这与之前基于 PIP3 的检测结果（IC50，35±2 nM）一致。抑制常数 Kic 和 Kiu 分别为 27±6 nM 和 45±11 nM[1]。VO-OHpic 是一种很有前景的选择性和高效的 PTEN 抑制剂。VO-OHpic 是目前最有效的 PTEN 脂质磷酸酶活性抑制剂（IC50=35 nM）[2]。
VO-OHpic 能以可逆的方式有效抑制重组 PTEN。该抑制作用对人工底物OMFP和生理底物PIP3均为非竞争性抑制，表现为随着抑制剂浓度的增加，Km值增大，Vmax值减小。以OMFP为底物时，抑制常数Kic和Kiu分别为27 ± 6 nM和45 ± 11 nM；以PIP3为底物时，Kic和Kiu分别为17 ± 8 nM和74 ± 31 nM。VO-OHpic对PTEN的IC50值（以OMFP为底物）为46 ± 10 nM，与先前报道的以PIP3为底物时的IC50值35 ± 2 nM一致。VO-OHpic对PTEN具有较高的选择性，而对其他PTPs（仅在高微摩尔浓度下才被抑制）则不然。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在缺血前30分钟，通过腹腔注射VO-OHpic（10 μg/kg）抑制小鼠的PTEN表达，随后进行30分钟的缺血处理和120分钟的再灌注。实验结束时，使用氯化三苯基四氮唑（TTC）测定心肌梗死面积。与对照组相比，VO处理组小鼠的心肌梗死面积显著缩小（25±6% vs. 56±5%，n=7，P<0.01）。两组之间风险区域没有差异（46±3% vs. 57±3%，n=7，P>0.05）[3]。
在小鼠中，缺血前 30 分钟腹腔注射 VO-OHpic（10 μg/kg）可显著增加心肌中 Akt 的磷酸化（145 ± 10 AU vs. 对照组的 76 ± 8 AU，n=4，P<0.01）。 [3] VO-OHpic 治疗降低了缺血前的左心室收缩压（60 ± 3 vs. 70 ± 2 mmHg，n=7，P<0.01）、心率（349 ± 12 vs. 427 ± 27 次/分，n=7，P<0.01）和 +dp/dt_m（4061 ± 215 vs. 4818 ± 316 mmHg/s，n=7，P<0.05）。 [3] 缺血30分钟后，再灌注120分钟，VO-OHpic治疗组小鼠表现出更好的心脏功能恢复：再灌注结束时，左心室收缩压更高（65 ± 4 vs. 53 ± 4 mmHg，n=7，P<0.05），心率更高（476 ± 26 vs. 381 ± 19 次/分，n=7，P<0.05），+dp/dt_m更高（4432 ± 198 vs. 2765 ± 333 mmHg/s，n=7，P<0.01），-dp/dt_m更高（3699 ± 331 vs. 1921 ± 401 mmHg/s，n=7，P<0.01），左心室舒张末期压力也更高。与对照组相比，VO-OHpic 组的压力较低（-6 ± 2 mmHg vs. 2 ± 3 mmHg，n=7，P<0.05）。[3] VO-OHpic 显著降低了缺血再灌注后的心肌梗死面积（25 ± 6% vs. 56 ± 5% 危险面积，n=7，P<0.01），而两组之间的危险面积无显著差异（46 ± 3% vs. 57 ± 3%，n=7，P>0.05）。[3] |
| 酶活实验 |
以OMFP为底物的PTEN活性测定 将OMFP环己基铵盐溶解于DMSO中至20 mM，并用1% DMSO进一步稀释至所需浓度。测定在含有2 mM DTT的100 mM Tris缓冲液（pH 7.4）中于室温（20°C）下进行。通过将OMFP加入PTEN缓冲液混合物中启动反应。通过测量96孔微孔板中的荧光变化（激发波长485 nm，发射波长525 nm）来监测OMFP水解为OMF的过程。使用DMSO作为溶剂以配制20 mM的储备液；测定中最终溶剂浓度保持较低。对于高浓度OMFP（>1 mM），通过稀释来验证内滤效应，并在存在时进行校正。 [1]
以 PIP3 为底物的 PTEN 活性测定： 在含有 2 mM DTT 的 100 mM Tris (pH 7.4) 缓冲液中测定酶活性。将 PIP3（二氯钠盐）溶于蒸馏水中至 1 mM，然后用蒸馏水进一步稀释至所需浓度。测定在 30°C 下进行 20 分钟。反应通过加入 2.25 倍体积的显色剂（5 mM 孔雀石绿、17 mM 七钼酸铵、77 mM 柠檬酸铋、1.7 M HCl）终止。混合物显色 10 分钟，并在 650 nm 处读取吸光度。[1] 在 VO-OHpic 存在下测定 PTEN 活性： VO-OHpic 溶于 DMSO (100 μM) 中，然后用 1% DMSO 进一步稀释至所需浓度。在抑制研究中，PTEN 与 VO-OHpic 在室温下预孵育 10 分钟，然后加入底物以启动反应。使用 VO-OHpic 在测定缓冲液中测定背景吸光度（孔雀绿法）和荧光强度（OMFP 法），并在数据分析中进行校正。[1] VO-OHpic 抑制的可逆性 - 抑制剂稀释实验： 将 PTEN 与高浓度抑制剂 (300 nM) 预孵育，然后加入不含抑制剂的反应缓冲液进行稀释。测量剩余的 PTEN 对 OMFP 的活性，并与对照组进行比较。进行了四组实验：(1) 无抑制剂的 PTEN 活性；(2) 30 nM VO-OHpic 的 PTEN 活性；(3) 将 PTEN 与 300 nM VO-OHpic 预孵育，然后稀释 10 倍至 30 nM； (4) 将 PTEN 与 300 nM VO-OHpic 预孵育，然后用含有 300 nM VO-OHpic 的缓冲液稀释。稀释后活性恢复表明抑制作用是可逆的。[1] |
| 细胞实验 |
细胞培养：NIH 3T3 成纤维细胞、3T3-L1 成纤维细胞（或分化为脂肪细胞）和 UmUc-3 人膀胱癌细胞在添加 10% 新生牛血清的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基中，于 37°C、5% CO₂ 条件下培养。
蛋白质印迹：将静止细胞用低剂量胰岛素 (0.2 μg mL⁻¹) 预刺激 5 分钟，然后用指定浓度的 VO-OHpic 处理 15 分钟。作为对照，完全刺激使用 10 μg mL⁻¹ 胰岛素。细胞用 SDS 样品缓冲液裂解。蛋白质经 SDS-PAGE 电泳分离后，转移至 PVDF 膜上。用小鼠单克隆抗磷酸化Akt (Ser473) 或抗磷酸化Akt (Thr308) 抗体对膜进行探针检测，随后用HRP标记的抗小鼠抗体进行检测。剥离抗体后的膜用兔抗Akt抗体和HRP标记的抗兔抗体进行复染，作为上样对照。 Akt免疫荧光：将聚赖氨酸包被的盖玻片上的细胞饥饿过夜，预先用抑制剂孵育，并按指示进行刺激。用4%多聚甲醛(PFA)固定细胞，淬灭，用Triton X-100透化，并封闭。将细胞与荧光标记的抗磷酸化Akt (Ser473) 抗体孵育，洗涤，并用DAPI复染。将盖玻片装片后，在荧光显微镜下观察。 PtdIns(3,4,5)P3 和 PtdIns(3,4)P2 的检测：用重组 GST 标签的 Akt/PKB PH 结构域（氨基酸 5-108）探针固定细胞，并用 Alexa Fluor 标记的抗 GST 抗体进行检测。染色模式通过荧光显微镜观察。 FoxO3a 的免疫荧光：按指示处理细胞，固定、透化后，用一抗（抗 FoxO3a 抗体）和二抗（Cy5 标记）进行染色。细胞核用 DAPI 染色。 葡萄糖摄取实验：将分化的 L1 脂肪细胞接种于盖玻片上，并在无血清和无葡萄糖的培养基中培养 4 小时。细胞经VO-OHpic和胰岛素预孵育后，用荧光葡萄糖类似物（2-NBDG）处理10分钟。设置D-葡萄糖阴性对照。盖玻片经洗涤、DAPI复染后成像。 转染和荧光素酶活性检测：NIH 3T3细胞采用磷酸钙共沉淀法转染野生型或突变型bim启动子萤火虫荧光素酶报告质粒，并设置海肾荧光素酶转染对照。细胞用低剂量胰岛素（0.2 μg mL⁻¹）和100 nM VO-OHpic处理。处理后2小时和4小时，使用双荧光素酶报告基因检测系统测定启动子活性。[2] |
| 动物实验 |
本研究使用雄性C57BL6小鼠（2-3月龄，体重21-25 g）。VO-OHpic以10 μg/kg的剂量腹腔注射一次，于缺血前30分钟给药。对于体内缺血再灌注模型，小鼠用戊巴比妥钠（70 mg/kg，腹腔注射）麻醉。左冠状动脉闭塞30分钟，随后进行120分钟的再灌注。生理盐水作为对照。实验结束时，分离心脏用于测量梗死面积。[3]
为了测量左心室压力，将Mikro-tip导管插入麻醉小鼠的左心室。使用 Powerlab 数据采集系统和 Chart 5 软件记录左心室收缩压、舒张末期压、心率、左心室最大压力正向变化率 (+dp/dt_m) 和左心室最大压力负向变化率 (-dp/dt_m)。[3] 对于免疫印迹实验，将心脏组织在裂解缓冲液（20 mM Tris pH 7.5、150 mM NaCl、1 mM EDTA、1 mM EGTA、1 mM PMSF、1 mM Na3VO4、1% Triton X-100）中匀浆。使用针对 p-Akt (S-473) 和 Akt 的一抗检测蛋白质，随后使用辣根过氧化物酶标记的二抗和增强化学发光法。 [3] 心肌梗死面积的测量方法是将心脏切片置于1.5%氯化三苯基四氮唑（TTC）溶液中，于37℃孵育15分钟。梗死心肌（白色）、危险区域（红色）和非危险区域（蓝色）通过计算机图像分析法进行测量。梗死面积的计算公式为：（白色组织总重量）/（白色组织总重量+红色组织总重量）×100%。[3] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
由于在浓度达到或高于 100 μM 时观察到细胞毒性作用，因此无法测试浓度高于 PTP-1B IC50（微摩尔范围）的 VO-OHpic。VO-OHpic 被证实能加速成纤维细胞的伤口愈合，表明其有可能改变 PTEN 与细胞迁移和侵袭特性相关的功能，而这与其肿瘤抑制功能密切相关。[2]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
VO-OHpic（钒酰络合物，含两个3-羟基吡啶甲酸配体和一个氧配体）是一种空间位阻较大的分子。其非竞争性抑制模式使PTEN区别于其他蛋白酪氨酸磷酸酶（PTP），后者通常被钒络合物竞争性抑制。相似的Kic和Kiu值（分别为27 nM和45 nM）表明该抑制剂与游离酶和酶-底物复合物的结合亲和力相似。与通过钒酸盐递送发挥非选择性PTP抑制剂作用的简单钒盐（VOSO₄）不同，VO-OHpic本身就是活性化合物，这由其对PTEN的高选择性和不同的抑制模式所证实。VO-OHpic已被用于研究PTEN在PI3K依赖性信号通路和PTEN诱导的衰老中的作用。它具有作为工具化合物的潜力，可用于研究 PTEN 作为糖尿病、伤口愈合、哮喘、神经保护和某些癌症药物靶点的可能性。[1]
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| 分子式 |
2[C6H5NO3].HO2V.3[H2O]
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|---|---|
| 分子量 |
416.21168
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| 精确质量 |
414.011
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| 元素分析 |
C, 34.80; H, 3.65; N, 6.76; O, 42.49; V, 12.30
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| CAS号 |
476310-60-8
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| 相关CAS号 |
VO-OHPic;675848-25-6
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| PubChem CID |
66577002
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| 外观&性状 |
Light green to green solid powder
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| tPSA |
181
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| 氢键供体(HBD)数目 |
9
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| 氢键受体(HBA)数目 |
13
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| 可旋转键数目(RBC) |
0
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| 重原子数目 |
26
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| 分子复杂度/Complexity |
384
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C1=CC(=C(N=C1)C(=O)O)O.C1=CC(=C(N=C1)C(=O)O)O.[O-][V]=O
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| InChi Key |
HCJXRYXYWPOIGP-UHFFFAOYSA-K
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| InChi Code |
InChI=1S/2C6H5NO3.4H2O.O.V/c2*8-4-2-1-3-7-5(4)6(9)10;;;;;;/h2*1-3,8H,(H,9,10);4*1H2;;/q;;;;;;;+3/p-3
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| 化学名 |
Hydroxy(oxo)vanadium 3-hydroxypyridine-2-carboxylic acid complex trihydrate
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| 别名 |
VO OHpic; VO-OHpic; VOOHpic
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~72 mg/mL (~173.4 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.02 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.02 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: 2% DMSO+40% PEG 300+2% Tween 80+ddH2O: 14mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4026 mL | 12.0132 mL | 24.0263 mL | |
| 5 mM | 0.4805 mL | 2.4026 mL | 4.8053 mL | |
| 10 mM | 0.2403 mL | 1.2013 mL | 2.4026 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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BpV(pic) potassium hydrate
BpV(HOpic)
SF1670
银杏酸 C17-1
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