VU0357017 HCI

M1 mAChR ( IC50 = 477 nM ); M1 mAChR ( Ki = 9.91 μM )
Muscarinic acetylcholine receptor M1 (M₁ mAChR): EC₅₀ = 198 ± 13.2 nM (calcium mobilization assay in CHO cells expressing rat M₁), AChₘₐₓ = 80.52% ± 7.67% max[2]
- Muscarinic acetylcholine receptor M1 (M₁ mAChR): EC₅₀ = 379 ± 912 nM (calcium mobilization assay in rM₁ Y381A cells with orthosteric mutation)[2]
- Muscarinic acetylcholine receptor M1 (M₁ mAChR): No agonism at M₂-M₅ mAChR subtypes up to 30 μM[2]
- Muscarinic acetylcholine receptor M1 (M₁ mAChR): IC₅₀ > 30 μM for antagonism of ACh-induced responses at M₂-M₅ mAChR subtypes[2]
- Muscarinic acetylcholine receptor M1 (M₁ mAChR): Does not compete with [³H]-NMS for binding to M₁-M₅ mAChRs (IC₅₀ > 30 μM)[2]
- Muscarinic acetylcholine receptor M1 (M₁ mAChR): Shows agonist activity in calcium release assay (EC₅₀ not specified in this context) and ERK phosphorylation assay, but no effect on β-arrestin recruitment in hM₁ CHO cells[3]
- Muscarinic acetylcholine receptor M1 (M₁ mAChR): At high concentrations, completely displaces [³H]-NMS binding to the orthosteric site of M₁-M₅ receptors (no specific IC₅₀ value provided)[1]

体外活性：VU0357017 是一种 M1 选择性激动剂，似乎通过变构位点的作用激活 M1。来自竞争结合实验的 VU0357017 的 Ki 值分别为 9.91(rM1)、21.4 (rM2)、55.3 (rM3)、35 (rM4) 和 50 (rM5)。 VU0357017 是一种高度选择性的 M1 激动剂，表明这些化合物是不太可能在 M1 上高度保守的正构位点发挥作用，而更有可能充当变构激动剂。激酶测定：VU0357017 是一种 M1 选择性激动剂，似乎通过变构位点的作用激活 M1。来自竞争结合实验的VU0357017的Ki值分别为9.91(rM1)、21.4(rM2)、55.3(rM3)、35(rM4)和50(rM5)。细胞测定：

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1. 在表达大鼠M₁ mAChR的CHO细胞钙动员实验中，VU0357017 HCI 表现出强效且高效的激动活性，EC₅₀为198 ± 13.2 nM，AChₘₐₓ为80.52% ± 7.67% max；在30 μM浓度下，对M₂-M₅ mAChR亚型无激动活性[2]
2. 在携带正构位点突变（Y381A，该突变可消除正构激动剂结合）的rM₁细胞中，VU0357017 HCI 仍能诱导功能性反应，EC₅₀为379 ± 912 nM，证实其变构激动剂作用机制[2]
3. 在评估对M₂-M₅亚型ACh诱导的EC₈₀反应拮抗作用的实验中，VU0357017 HCI 对所有M₂-M₅亚型的IC₅₀均>30 μM，显示出对M₁的高选择性[2]
4. 在M₁-M₅亚型的[³H]-NMS竞争结合实验中，VU0357017 HCI 的IC₅₀>30 μM，不与正构配体[³H]-NMS竞争结合，进一步支持其变构结合模式[2]
5. 在瞬时转染M₁受体突变体（E401H单点突变）的CHO-K1细胞中，VU0357017 HCI 效力显著下降（无具体EC₅₀值）；而K392D、E397V或E397D突变对其效力影响较小，提示第三胞外环的E401是其结合的关键位点[2]
6. 在表达M₁-M₅受体的CHO细胞膜制备物中，高浓度VU0357017 HCI 可完全置换正构位点的[³H]-NMS结合；利用可诱导表达M₁的细胞系进行Furchgott分析显示，其为M₁的弱正构部分激动剂，且能减慢[³H]-NMS从CHO-rM₁细胞膜的解离速率，提示双位点（正构+变构）结合模式[1]
7. 在稳定表达人M₁ mAChR的CHO-K1细胞中，VU0357017 HCI 可诱导钙释放（以卡巴胆碱最大反应为基准归一化）和ERK1/2磷酸化（以基础ERK水平为基准的倍数变化），但在采用PathHunter检测试剂盒的β-arrestin募集实验中无活性（以% CCh max归一化）[3]
8. 在经不同浓度四环素处理（调控M₁受体密度）的hM₁ TREx CHO细胞中，VU0357017 HCI 以浓度依赖方式诱导钙释放（以% ionomycin归一化）；50 ng/ml或1 μg/ml四环素诱导M₁表达后，对其在ERK磷酸化实验中的最大反应影响较小[3]
9. 在表达β-arrestin2-YFP的hM₁ TREx CHO细胞中，100 μM VU0357017 HCI 处理（无论细胞是否经50 ng/ml或1 μg/ml四环素预处理）均未诱导β-arrestin2募集[3]
10. 在大鼠海马脑片中，500 nM VU0357017 HCI 浴槽给药10分钟后进行阈下θ-爆发刺激（TBS），可显著增强Schaffer侧支-CA1突触的场兴奋性突触后电位（fEPSP）斜率，提升阈下θ-爆发长时程增强（LTP）；30 μM VU0357017 HCI 浴槽给药10分钟对该突触的长时程抑制（LTD）无影响[3]
11. 在大鼠纹状体中型多棘神经元（MSNs）中，VU0357017 HCI 可诱导诱发动作电位发放频率小幅但显著升高（p ≤ 0.001），但作用弱于10 μM卡巴胆碱（CCh）[3]
12. 在小鼠内侧前额叶皮质（mPFC）锥体细胞中，VU0357017 HCI 无可检测的激动活性，也不影响自发性兴奋性突触后电流（sEPSCs）[3]

VU0357017 在改善大鼠海马依赖性学习方面具有强大的功效。 VU0357017 增强大鼠在莫里斯水迷宫和情境恐惧调节中的表现。

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1. 在啮齿类情境恐惧条件反射模型中，VU0357017 HCI（10 mg/kg，腹腔注射）可显著逆转东莨菪碱（0.2 mg/kg，皮下注射）诱导的情境恐惧条件反射获得障碍，表现为模型动物在训练环境中的僵住时间占比增加（与溶媒/东莨菪碱组相比p < 0.05）[2]
2. 在大鼠莫里斯水迷宫（MWM）实验中，VU0357017 HCI 处理可改善空间记忆表现（5天测试的游泳距离合并至每日四次试验分析）；但在第4、5天的空间记忆测试（p > 0.445）、第4天第4次试验与第5天第1次试验间的记忆保持（p > 0.755）、以及探针试验前30秒的平台穿越次数（p > 0.981）中无显著效应[3]
3. 在大鼠情境恐惧条件反射（CFC）实验中，VU0357017 HCI 处理可增强情境恐惧的获得（与溶媒组相比p < 0.05）[3]
4. 在大鼠安非他命诱导的多动模型中，VU0357017 HCI（安非他命4 mg/kg皮下注射前30分钟腹腔给药）无法逆转安非他命诱导的多动行为，提示其无抗精神病样作用[3]

1. M₁-M₅ mAChR的[³H]-NMS竞争结合实验：制备表达大鼠M₁-M₅ mAChR的CHO细胞膜，将其与[³H]-NMS（终浓度0.3 nM，溶于含100 mM NaCl和20 mM HEPES的缓冲液，pH=7.4）及不同浓度的VU0357017 HCI 或阿托品（阳性对照）在室温下孵育3小时。通过快速过滤终止平衡结合反应，以特异性[³H]-NMS结合率的百分比绘制数据曲线。实验证实VU0357017 HCI 不与[³H]-NMS竞争结合M₁-M₅ mAChR（IC₅₀>30 μM）[2]
2. M₁ mAChR的[³H]-NMS解离实验：制备稳定表达大鼠M₁受体的CHO细胞膜，与[³H]-NMS孵育至平衡结合后，加入阿托品诱导[³H]-NMS解离，检测10 μM或1 mM VU0357017 HCI 对解离速率（k_off）的影响。结果显示VU0357017 HCI 可减慢[³H]-NMS解离速率（10 μM时k_off=0.030 ± 0.006/min；1 mM时k_off=0.025 ± 0.006/min），而阿托品单独处理组k_off=0.041 ± 0.001/min，提示其通过变构位点与正构配体产生负协同作用[1]

1. M₁ mAChR激动活性的钙动员实验：将表达大鼠M₁-M₅ mAChR的CHO细胞接种至合适孔板，负载钙敏感荧光染料，孵育后加入不同浓度的VU0357017 HCI，利用荧光酶标仪检测细胞内钙浓度变化，绘制浓度-反应曲线并计算EC₅₀和最大效应（AChₘₐₓ）。实验证实VU0357017 HCI 是强效M₁激动剂，在30 μM浓度下对M₂-M₅无活性[2]
2. M₁受体突变体细胞的钙动员实验：将瞬时转染M₁受体突变体（E401H、K392D、E397V等）的CHO-K1细胞按上述钙动员实验流程处理，加入不同浓度的VU0357017 HCI 并测定EC₅₀，分析突变位点对其效力的影响[2]
3. ERK1/2磷酸化实验：将hM₁ CHO细胞或经不同浓度四环素处理（调控M₁表达）的hM₁ TREx CHO细胞用不同浓度VU0357017 HCI 处理，裂解细胞后采用SureFire ERK磷酸化试剂盒检测ERK1/2磷酸化水平，数据以基础ERK水平的倍数变化表示，并以卡巴胆碱最大反应为基准归一化[3]
4. β-arrestin募集实验：采用PathHunter检测试剂盒，在hM₁ CHO细胞中加入不同浓度VU0357017 HCI，检测β-arrestin募集并以% CCh max归一化；同时，在表达β-arrestin2-YFP的hM₁ TREx CHO细胞中加入100 μM VU0357017 HCI，通过共聚焦显微镜观察并计数斑点数量以量化β-arrestin2募集[3]
5. 可诱导M₁细胞系的Furchgott分析：将hM₁ TREx CHO细胞用1 μg/mL或25 ng/mL四环素处理24小时以调控M₁受体密度，在钙释放实验中绘制VU0357017 HCI 的浓度-反应曲线，通过等效应浓度的双倒数图计算平衡解离常数（pK_d和K_d），证实其为M₁的弱正构部分激动剂[1]

雄性Sprague-Dawley大鼠（380-420 g）预先接受东莨菪碱处理
1、3、10 mg/kg
单次腹腔注射

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1. 啮齿动物情境恐惧条件反射实验：啮齿动物预先接受东莨菪碱（0.2 mg/kg，皮下注射）处理以诱导认知功能障碍。将VU0357017 HCI溶解于适当的溶剂（未具体说明）中，并以10 mg/kg的剂量腹腔注射给药。然后对动物进行情境恐惧条件反射训练（暴露于特定情境并伴有轻微足底电击）。经过一段保持期后，测量动物在同一情境中僵住不动的时间百分比，以评估其认知功能； VU0357017 HCI 逆转了东莨菪碱诱导的缺陷（每组治疗组 n = 3-4 只大鼠）[2]
2. 大鼠莫里斯水迷宫 (MWM) 实验：将 VU0357017 HCI 溶解于合适的溶剂（未指定）中，并通过未指定的途径（频率未指定）给予大鼠（每组 n = 8 只）。大鼠在 MWM 中训练 5 天（每天 4 次试验），以找到隐藏的平台；每日记录游泳距离。在第 5 天进行探针试验（移除平台），并计数前 30 秒内的平台穿越次数，以评估空间记忆保持情况[3]
3. 大鼠情境恐惧条件反射 (CFC) 实验：将 VU0357017 HCI 溶解于合适的溶剂（未指定）中，并通过未指定的途径给予大鼠（每组 n = 4-6 只）。大鼠接受条件性恐惧训练（暴露于特定环境并接受足底电击），训练后测量其僵直行为的百分比，以评估其对环境恐惧的习得情况[3]
4. 大鼠安非他明诱导的运动过度试验：将VU0357017 HCI溶解于溶剂（未具体说明）中，并在皮下注射安非他明（4 mg/kg）前30分钟腹腔注射。将大鼠置于开放式场地中，并在特定时间内测量其运动活性（运动距离），以评估VU0357017 HCI逆转安非他明诱导的运动过度的能力[3]
5. 大鼠海马切片的电生理研究：制备大鼠海马切片，并将其保存在32°C的人工脑脊液（ACSF）中。将VU0357017 HCl溶解于人工脑脊液（ACSF）中，并在刺激施加前10分钟以500 nM（用于长时程增强（LTP）研究）或30 μM（用于长时程抑制（LTD）研究）的浓度进行灌流。在Schaffer侧支-CA1突触处记录场兴奋性突触后电位（fEPSP）以评估LTP和LTD[3]
6. 大鼠纹状体中型棘状神经元（MSN）的电生理记录：制备大鼠纹状体切片，并对MSN进行全细胞膜片钳记录。 VU0357017 HCI 通过灌流方式施加，并测量电流阶跃刺激下的动作电位发放频率，以评估其对神经元兴奋性的影响[3]
7. 小鼠内侧前额叶皮层 (mPFC) 锥体细胞的电生理记录：制备小鼠 mPFC 切片，并对锥体细胞进行全细胞膜片钳记录。VU0357017 HCI 通过灌流方式施加，并记录自发性兴奋性突触后电流 (sEPSC)，以评估其激动剂活性[3]

VU0357017 HCI 在全身给药后可提供良好的脑暴露量（未提供具体的药代动力学参数，例如半衰期、口服生物利用度或清除率）[2]

[1]. Chemical modification of the M(1) agonist VU0364572 reveals molecular switches in pharmacology and a bitopic binding mode. ACS Chem Neurosci. 2012 Dec 19;3(12):1025-36.

[2]. Discovery and characterization of novel subtype-selective allosteric agonists for the investigation of M(1) receptor function in the central nervous system. ACS Chem Neurosci. 2010;1(2):104-121.

[3]. Novel allosteric agonists of M1 muscarinic acetylcholine receptors induce brain region-specific responses that correspond with behavioral effects in animal models. J Neurosci. 2012 Jun 20;32(25):8532-44.

1. VU0357017 HCI 是一种高选择性的 M₁ 毒蕈碱乙酰胆碱受体变构激动剂，是通过功能性高通量筛选 (HTS) 和多样性导向合成方法发现的；它具有前所未有的纯净辅助药理学特性，在 10 μM 浓度下对大量靶点均无明显活性[2]
2. 靶向诱变研究表明，M₁ 受体的第三个胞外环（尤其是 E401）和跨膜区第七个螺旋圈对于 VU0357017 HCI 的结合至关重要；柔性配体对接实验表明，VU0357017 HCI 可与 M₁ 受体的 E401、E397、Y381 和 Q181 形成多达四个氢键[2]
3. VU0357017 HCI 作为 M₁ mAChR 的双位点配体，具有弱的正构部分激动剂活性和变构相互作用（减缓 [³H]-NMS 的解离），这使其区别于纯变构激动剂[1]
4. VU0357017 HCI 差异性地激活 M₁ 与不同信号通路的偶联（诱导钙释放和 ERK 磷酸化，但不募集 β-arrestin），从而对大脑回路产生选择性作用：在海马体中具有显著作用（增强 LTP 和认知功能），在纹状体中作用较弱，而在内侧前额叶皮层中无作用[3]
5. VU0357017 HCI是研究M₁介导的中枢神经系统（CNS）效应的宝贵研究工具，也是阿尔茨海默病和精神分裂症新疗法的潜在先导化合物[2]

C18H28CLN3O3

369.89

369.182

C, 58.45; H, 7.63; Cl, 9.58; N, 11.36; O, 12.98

1135242-13-5

25010775

White to off-white solid powder

3.64

74.16

3

4

7

25

408

0

Cl[H].O(C([H])([H])C([H])([H])[H])C(N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])C1([H])[H])N([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])C(C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])=O)=O

XKJQVUIXSBOCPP-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C18H27N3O3.ClH/c1-3-24-18(23)21-12-8-15(9-13-21)19-10-11-20-17(22)16-7-5-4-6-14(16)2;/h4-7,15,19H,3,8-13H2,1-2H3,(H,20,22);1H

ethyl 4-[2-[(2-methylbenzoyl)amino]ethylamino]piperidine-1-carboxylate;hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 25~38 mg/mL (67.6~102.7 mM)
Water: ~10 mg/mL
Ethanol: ~2 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 33.33 mg/mL (90.11 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。