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WST-8 sodium

别名: WST-8; WST 8; 270078-53-0; MFCD09264687; sodium 4-(3-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-2-(4-nitrophenyl)-2H-tetrazol-3-ium-5-yl)benzene-1,3-disulfonate; sodium;4-[2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)tetrazol-2-ium-5-yl]benzene-1,3-disulfonate; WST-8 Sodium; WST8. 水溶性四氮唑-8;2-(2-甲氧基-4-硝基苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四氮唑单钠盐; 水溶性四氮唑WST-8; (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐
目录号: V20976 纯度: = 99.9%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
WST-8 是一种新型、有效的水溶性四唑染料/盐，用于评估细胞代谢活性。
WST-8 sodium CAS号: 193149-74-5
产品类别: Fluorescent Dye
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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产品说明书
产品描述
WST-8 是一种新型、高效且水溶性的四唑染料/盐，用于评估细胞代谢活性。在中性 pH 值和中间电子受体存在下，它能提高基于 WST-8 的检测方法的灵敏度，优于传统的基于 MTS 的检测方法。
WST-8 钠（2-(3-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-2-(4-硝基苯基)-2H-四唑-3-鎓-5-基)-5-磺基苯磺酸钠）是一种水溶性四唑盐，用于评估细胞代谢活性。它是细胞增殖和细胞毒性检测中的细胞活力指标。WST-8 钠的分子量为 600.47，分子式为 C20H13N6NaO11S2。
生物活性&实验参考方法
靶点
water-soluble tetrazolium dye
WST-8 sodium does not have a specific biological target; it is a chemical reagent used as a colorimetric indicator of cell metabolic activity. In the presence of an electron mediator (such as 1-methoxy PMS or phenazine methosulfate), WST-8 is reduced by dehydrogenases in metabolically active cells to a water-soluble formazan dye. The amount of formazan produced is directly proportional to the number of living cells and is quantified by absorbance at 450-460 nm.
体外研究 (In Vitro)
在48小时和72小时进行乳液聚合，以评估G-CSF的疗效。将广泛使用的基于MTS的检测方法与使用浓度为7 × 10⁵ 个细胞/mL的NFS-60细胞和浓度为800 IU/mL的颗粒状G-CSF（24小时）的可溶性四唑染料WST-8生物测定法进行比较。此外，使用优化的基于WST-8的染料测定法评估了几种市售聚合物介导的G-CSF制剂的有效性。结果表明，在使用NFS-60细胞系评估聚合G-CSF的疗效时，基于WST-8的检测方法比传统的基于MTS的检测方法更稳定[1]。
WST-8钠并非用作治疗剂，而是用作细胞活力测定的研究试剂。它是一种四唑试剂，可作为NADH的显色指示剂。 WST-8钠用于细胞增殖实验，以测量细胞的代谢活性，该活性与细胞数量和活力相关。该化合物的活性特征在于其能被细胞脱氢酶还原为水溶性甲臜染料。
体内研究 (In Vivo)
WST-8钠不作为治疗药物使用，也不具有药理学意义上的体内活性。它是一种研究试剂，用于体外实验，以评估培养细胞的活力、增殖和细胞毒性。该化合物不用于动物药理学研究。
酶活实验
使用NFS-60细胞进行体外生物测定[1]
采用MTS法检测聚乙二醇化G-CSF效力的体外生物测定基于欧洲药典（European Pharmacopoeia Citation 6.3）中概述的方法。CCK-8测定按照试剂盒说明书进行。NFS-60细胞培养于含10%胎牛血清（FBS）和50 µg/ml庆大霉素的RPMI-1640培养基中。接种前，用RPMI-1640洗涤细胞三次，然后以1500 rpm离心7分钟进一步分离细胞。采用台盼蓝染色排除法计数细胞（Colotta等，Citation 1992；Strober，Citation 2001）。在RPMI-1640培养基中制备浓度范围为4 × 10⁵至12 × 10⁵个细胞/ml的NFS-60细胞，并向细胞中加入不同稀释度的聚乙二醇化G-CSF，以获得400至1200 IU/ml的最终浓度。将适量的细胞（7 × 10⁵个细胞/ml）以50 µl/孔的体积分装至96孔组织培养板中。向孔中加入适量的聚乙二醇化G-CSF（例如，根据欧洲药典建议的800 IU/ml）。每个细胞浓度和每种聚乙二醇化G-CSF稀释度或浓度均设置六个复孔。本研究还设置了六个阴性对照孔，孔中加入50 µl RPMI-1640培养基代替聚乙二醇化G-CSF。本研究使用内标，内标效价设定为100%。
将检测板置于37℃、5-7% CO₂培养箱中孵育24、48、72和96小时。在每个时间点，从培养箱中取出三块板，进行MTS和WST-8检测，以研究细胞增殖。向每个孔中加入水溶性四唑染料MTS/PMS（10 µl，5 mg/ml）或WST-8（10 µl，按试剂盒建议用量），并在37℃、5-7% CO₂培养箱中继续孵育4小时。使用微孔板读数仪（Molecular Devices，Silicon Valley，CA）分别在490 nm（MTS）和450 nm（WST-8）波长处读取吸光度（光密度）。同样，我们也使用相同的基于WST-8的检测方法测试了其他厂商生产的聚乙二醇化G-CSF制剂（Peg-Grafeel PGAS01512、Neulastim B1029B05、NeuPEG 5010043），以确定该检测方法的有效性以及其他市售聚乙二醇化G-CSF制剂的效力。
WST-8钠的非细胞检测方法是在无细胞体系中，利用化学还原剂（例如NADH）还原WST-8钠。将该化合物与不同浓度的NADH在电子传递介质存在下孵育，并在450-460 nm波长下通过分光光度法监测甲臜染料的生成。生成标准曲线以建立吸光度与NADH浓度的关系。该检测方法用于验证WST-8钠作为细胞活力检测试剂的性能。
细胞实验
聚乙二醇化粒细胞集落刺激因子（PEGylated G-CSF）浓度研究[1]
为了研究PEGylated G-CSF对NFS-60细胞的剂量-反应关系，将7 × 10⁵个细胞/ml用不同浓度的PEGylated G-CSF刺激48小时，随后采用MTS和WST-8法检测细胞增殖反应。用于刺激NFS-60细胞的PEGylated G-CSF浓度分别为500、600、700、800、900、1000、1100和1200 IU/ml。通过用刺激后细胞的OD值减去未刺激细胞的OD值，计算光密度变化（ΔOD）作为增殖反应的指标。在MTS检测中，PEG化G-CSF刺激NFS-60细胞后，在700–800 IU/ml浓度范围内观察到增殖反应呈剂量依赖性增强；而在WST-8检测中，该增强作用则出现在600–700 IU/ml的窄浓度范围内。[1]
细胞浓度研究[1]
为了优化PEG化G-CSF细胞生物测定中细胞浓度，将浓度范围为4 × 10⁵至12 × 10⁵个细胞/ml的NFS-60细胞接种于96孔细胞培养板中，随后用800 IU/ml的PEG化G-CSF刺激48小时。孵育结束后，采用MTS和WST-8检测方法检测细胞增殖反应。[1]
孵育时间研究[1]
为了测定评估NFS-60细胞增殖反应的最佳孵育时间，将7 × 10⁵个NFS-60细胞/ml用800 IU/ml聚乙二醇化粒细胞集落刺激因子（PEGylated G-CSF）刺激，并在不同时间间隔（24、48、72和96小时）通过MTS和WST-8法进行检测。
体外细胞实验采用WST-8钠法，将细胞培养于96孔板中，并在培养基中加入WST-8试剂。细胞孵育1-4小时后，代谢活跃的细胞会将WST-8还原为水溶性甲臜染料。使用酶标仪在450-460 nm波长处测量吸光度。生成的甲臜量与活细胞数量成正比。该检测方法可用于细胞增殖、细胞毒性和药物敏感性测试。
动物实验
WST-8钠是一种用于体外细胞实验的研究试剂，而非治疗或诊断试剂，因此不适用于体内动物实验。该化合物不用于动物药理学研究。其用途仅限于细胞培养和生化应用。
药代性质 (ADME/PK)
WST-8钠的分子量为600.47，分子式为C20H13N6NaO11S2。它是一种白色结晶性粉末，具有吸湿性（易吸收水分）。纯度通常大于95-99%。该化合物可溶于水，通常在室温下干燥处储存。在推荐的储存条件下，它性质稳定。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
WST-8钠在细胞活力检测所用浓度下通常被认为毒性较低。处理该化合物时应遵循标准实验室安全预防措施。它可能引起皮肤、眼睛和呼吸道刺激。应使用适当的个人防护装备。
参考文献

[1]. A sensitive WST-8-based bioassay for PEGylated granulocyte colony stimulating factor using the NFS-60 cell line. Pharm Biol. 2015 Jun;53(6):849-54.
其他信息
本研究发现，在定量分析聚乙二醇化G-CSF对NFS-60细胞增殖反应方面，基于WST-8的检测方法优于基于MTS的检测方法。此外，本研究还证明了基于WST-8的生物测定方法在其他具有人类和兽医应用价值的生物治疗蛋白中的潜在应用。[1]
背景：粒细胞集落刺激因子（G-CSF）常用于治疗化疗、放疗和器官移植引起的中性粒细胞减少症。体外实验证实，G-CSF与聚乙二醇（PEG）偶联可提高其疗效。目的：目前，推荐使用四唑染料和NFS-60细胞系进行体内生物测定来检测G-CSF，但药典中尚无针对聚乙二醇化G-CSF的此类专论。本研究评估了推荐用于检测粒细胞集落刺激因子 (G-CSF) 的检测方法对聚乙二醇化 G-CSF (PEGylated G-CSF) 的适用性。材料与方法：将常用的基于 MTS [3-(4,5-二甲基噻唑基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑] 的检测方法与使用水溶性四唑染料 WST-8 [2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺基苯基)-2H-四唑] 的生物测定方法进行了比较。在 24、48、72 和 72 小时分别检测浓度为 7 × 10⁵ 个细胞/mL 的 PEGylated G-CSF，以确定其效力。此外，还使用优化的基于 WST-8 染料的检测方法测试了各种市售聚乙二醇修饰的 G-CSF 制剂的效力。结果：结果表明，与传统的基于MTS的检测方法相比，基于WST-8的检测方法在使用NFS-60细胞系测定聚乙二醇化G-CSF的效力时具有更高的灵敏度。结论：我们的研究表明，基于WST-8的生物测定方法在其他具有人类和兽医应用价值的生物治疗蛋白中具有潜在的应用价值。[1]
WST-8钠（CAS 193149-74-5）是一种水溶性四唑盐，用于评估细胞增殖和细胞毒性试验中的细胞代谢活性。它被细胞脱氢酶还原为水溶性甲臜染料，其生成量与活细胞数量成正比。WST-8钠是一种广泛用于细胞活力检测的试剂，可从多家商业供应商处获得。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C20H13N6NAO11S2
分子量
600.4706
精确质量
599.9981
元素分析
C, 40.01; H, 2.18; N, 14.00; Na, 3.83; O, 29.31; S, 10.68
CAS号
193149-74-5
相关CAS号
193149-74-5 (sodium);755734-51-1 (free acid);
PubChem CID
9894947
外观&性状
White to yellow or light yellow crystalline powder
LogP
4.052
tPSA
266.62
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
13
可旋转键数目(RBC)
4
重原子数目
40
分子复杂度/Complexity
1080
定义原子立体中心数目
0
SMILES
S(C1C([H])=C(C([H])=C([H])C=1C1=NN(C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2[H])[N+](=O)[O-])[N+](C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2OC([H])([H])[H])[N+](=O)[O-])=N1)S(=O)(=O)[O-])(=O)(=O)[O-].[Na+]
InChi Key
YCAKCISJXLQUEQ-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C20H13N6O11S2.Na/c1-37-18-10-14(26(29)30)6-9-17(18)24-22-20(21-23(24)12-2-4-13(5-3-12)25(27)28)16-8-7-15(38(31,32)33)11-19(16)39(34,35)36/h2-11H,1H3/q-1+1
化学名
4-(3-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-2-(4-nitrophenyl)-2H-tetrazol-3-ium-5-yl)-3-sulfobenzenesulfonate, sodium salt
别名
WST-8; WST 8; 270078-53-0; MFCD09264687; sodium 4-(3-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-2-(4-nitrophenyl)-2H-tetrazol-3-ium-5-yl)benzene-1,3-disulfonate; sodium;4-[2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)tetrazol-2-ium-5-yl]benzene-1,3-disulfonate; WST-8 Sodium; WST8.
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
H2O : ~83.33 mg/mL (~138.77 mM)
DMSO : ~10 mg/mL (~16.65 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (1.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。
配方 2 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (1.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。
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配方 3 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (1.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

配方 4 中的溶解度: 100 mg/mL (166.54 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.6654 mL 8.3268 mL 16.6536 mL
5 mM 0.3331 mL 1.6654 mL 3.3307 mL
10 mM 0.1665 mL 0.8327 mL 1.6654 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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