WZ4003

别名: WZ 4003; WZ4003; WZ-4003 N-[3-[[5-氯-2-[[2-甲氧基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基]氨基]-4-嘧啶基]氧基]苯基]丙酰胺

目录号: V0248 纯度: ≥98%

COA 产品数据产品说明书 SDS

WZ4003 是一种新型、有效且高度特异性的 NUAK 激酶抑制剂。

WZ4003 CAS号: 1214265-58-3
产品类别: AMPK

产品仅用于科学研究，不针对患者销售

规格	价格	库存	数量
10 mM * 1 mL in DMSO
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
500mg
1g
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Nature 2025, 643(8070):192-200.

Nature 2024 Dec 18.

Nature 2021, 597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022: 8, eabm9427.

Nat Neurosci 2024, 27:1468-1474.

Science Adv 2025, 11(33):eadr5199.

Nat Metab 2024, 6: 1108-1127.

Cell Stem Cell 2024, 31:106-126.e13.

Nature 597, 119–125 (2021)

Cell Stem Cell 2020,26(6):845-861.e12.

Science Trans Med 2023,15(701):eadd7872.

STTT 2023,8(1):91.

Cell Reports 2023,42(4):112313

Science Trans Med 2023, 15: eadd7872.

Cancer Cell 2021,39(4):529-547.e7.

Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

Immunity 2023,56(3):620-634.e11.

Immunity 2024,57:2651-2668.e12.

J Am Chem Soc 2022,144:21831-21836.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022:8,eabm9427.

Nature 2021,597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

纯度/质量控制文件

批次：

纯度: ≥98%

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产品说明书

产品描述
生物活性&实验参考方法
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产品描述

WZ4003 是一种新型、有效且高度特异性的 NUAK 激酶抑制剂。它对 139 种其他激酶几乎没有抑制作用，但在细胞基础测定中抑制 NUAK1 和 NUAK2，IC50 分别为 20 nM 和 100 nM。

生物活性&实验参考方法

靶点	NUAK1 (IC50 = 20 nM); NUAK2 (IC50 = 100 nM) NUAK1 (AMPK-related kinase 5): WZ4003 exhibits selective inhibition with an IC50 of 14 nM against recombinant human NUAK1; no Ki/EC50 values reported [1] - NUAK2 (AMPK-related kinase 6): WZ4003 shows selective inhibition with an IC50 of 13 nM against recombinant human NUAK2; no Ki/EC50 values reported [1] - Other AMPK-related kinases/kinases: WZ4003 has minimal inhibitory activity (IC50 > 10,000 nM) against AMPKα1, AMPKα2, MARK1, MARK2, MARK3, MARK4, BRSK1, BRSK2, SNRK, QIK, QSK, SIK, PANK4, and MELK, confirming its selectivity for NUAK1/2 [1]
体外研究 (In Vitro)	WZ4003 (3–10 μM) 显着降低过度表达野生型 NUAK1 的 HEK-293 细胞中由 NUAK1 引起的 MYPT1 磷酸化。此外，WZ4003 (10 μM) 抑制 MYPT1 Ser445 磷酸化以及细胞迁移、侵袭和增殖，其程度与 MEF 中的 NUAK1 敲除或 U2OS 细胞中的敲除相似。 [1]虽然 WZ4003 对含有 T790M 的 Ba/F3 细胞具有显着较低的细胞 IC50，但它还对 L858R/T790M 突变体 EGFR 显示出高特异性亲和力。 [2] 重组激酶活性抑制：WZ4003以剂量依赖性方式强效抑制NUAK1和NUAK2（IC50分别为14 nM和13 nM）。在包含46种相关激酶（如AMPK、MARK家族）的检测面板中，WZ4003（测试浓度1 μM和10 μM）仅对NUAK1/2表现出>90%的抑制率，显示出高靶点选择性[1] - HEK293细胞中NUAK1下游信号抑制：将瞬时转染FLAG标签NUAK1的HEK293细胞用WZ4003（0.1–3 μM）处理2小时。Western blot分析显示，NUAK1的直接下游底物MYPT1（Thr696位点）的磷酸化水平呈浓度依赖性降低。在1 μM浓度下，WZ4003较溶媒对照组抑制MYPT1磷酸化约70%，且对总MYPT1或FLAG-NUAK1的表达无影响[1] - A549肺癌细胞增殖抑制：对内源性表达NUAK1/2的A549细胞用WZ4003（0.1–10 μM）处理72小时。基于MTT的细胞活力检测显示，细胞增殖呈剂量依赖性下降，IC50约为1.2 μM。这种抗增殖效应与A549细胞中MYPT1（Thr696）磷酸化水平降低相关，证实其靶点特异性活性[1]
体内研究 (In Vivo)	不适用
酶活实验	反应在 50 μL 反应体积中在 30°C 下进行 30 分钟，通过将 40 μL 反应混合物喷洒到 P81 纸上，然后立即将其浸入 50 mM 正磷酸中来停止反应。对样品进行 3 次 50 mM 正磷酸洗涤，然后用丙酮冲洗一次并风干。 Cerenkov 计数用于测量由激酶引起的 [γ-32P]ATP 掺入 Sakamototide 中。一个活性单位是在一小时内催化 1 nmol [32P]磷酸盐结合到底物中所花费的时间。重组NUAK1/2激酶活性检测：将纯化的重组人NUAK1（1–522位氨基酸）或NUAK2（1–513位氨基酸）在含有50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM MgCl2、1 mM DTT、200 μM ATP、0.1 mg/mL BSA和合成肽底物（KKKLRRASLG，NUAK特异性底物）的反应缓冲液中孵育。将WZ4003以系列浓度（0.1 nM–10 μM）加入，与酶在室温下预孵育10分钟后，加入ATP/底物启动反应。反应在30°C孵育60分钟，随后用3%磷酸终止。通过比色法（借助磷酸特异性抗体结合）检测磷酸化底物，从剂量-反应曲线计算IC50值[1] - 激酶选择性面板检测：将WZ4003以1 μM和10 μM浓度在包含46种重组激酶（包括AMPKα1、AMPKα2、MARK1–4、BRSK1/2等）的面板中进行测试。每种激酶检测均采用与NUAK1/2检测相似的格式（使用激酶特异性底物和反应条件）。抑制效率按公式计算：（1 –（加入WZ4003后的磷酸化底物信号/未加WZ4003的信号））× 100%。仅NUAK1/2在1 μM浓度下显示>90%的抑制率，证实其选择性[1]
细胞实验	在 96 孔板中进行比色细胞增殖测定。 U2OS 细胞和 MEF 最初每孔分别接种 2000 个和 3000 个细胞。在五天的过程中，使用或不使用 10 M HTH-01-015 或 WZ4003 进行增殖测定。 HEK293细胞NUAK1信号检测：HEK293细胞在添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素的DMEM培养基中培养。将细胞接种于6孔板（5×105个细胞/孔），并用转染试剂转染2 μg FLAG-NUAK1质粒。转染24小时后，用WZ4003（0.1、0.3、1、3 μM）或溶媒（DMSO，终浓度0.1%）处理细胞2小时。随后用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，裂解物经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，用抗磷酸化MYPT1（Thr696）、总MYPT1和FLAG（检测NUAK1）的抗体进行免疫印迹。通过光密度法量化化学发光信号，并计算磷酸化MYPT1与总MYPT1的比值[1] - A549细胞增殖检测：A549细胞在添加10% FBS和1%青霉素-链霉素的RPMI 1640培养基中培养。将细胞接种于96孔板（2×103个细胞/孔），贴壁过夜后，加入系列浓度的WZ4003（0.1、0.3、1、3、10 μM），每个浓度设3个复孔，以溶媒（DMSO，0.1%）为对照。在37°C（5% CO2）条件下孵育72小时后，向每孔加入10 μL MTT试剂（5 mg/mL），继续孵育4小时。移除培养基，加入100 μL DMSO溶解甲臜结晶，测定570 nm处的吸光度。细胞活力按公式计算：（处理组吸光度/对照组吸光度）× 100%，通过剂量-反应曲线的非线性回归得出IC50值[1]
动物实验	不适用；
参考文献	[1]. Characterization of WZ4003 and HTH-01-015 as selective inhibitors of the LKB1-tumour-suppressor-activated NUAK kinases. Biochem J. 2014 Jan 1;457(1):215-25. [2]. Novel mutant-selective EGFR kinase inhibitors against EGFR T790M. Nature. 2009 Dec 24;462(7276):1070-4.
其他信息	WZ4003 是首个报道的选择性小分子抑制剂，可抑制 NUAK1 和 NUAK2，这两种激酶均属于 AMPK 相关激酶，由 LKB1 肿瘤抑制因子激活。WZ4003 对 NUAK1/2 的选择性远高于其他 AMPK 家族成员，使其成为研究 NUAK 激酶生理和病理作用（例如，在细胞存活、代谢和癌症进展中的作用）的宝贵工具 [1]。NUAK1/2 在多种人类癌症（包括肺癌，如在 A549 细胞中观察到的）中过表达，WZ4003 对其的抑制作用提示其在 NUAK 信号通路失调的癌症中具有潜在的治疗应用价值，但目前尚无临床开发数据 [1]。

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式	C25H29CLN6O3
分子量	496.9892
精确质量	496.199
元素分析	C, 60.42; H, 5.88; Cl, 7.13; N, 16.91; O, 9.66
CAS号	1214265-58-3
相关CAS号	1214265-58-3
PubChem CID	72200024
外观&性状	White to beige solid powder
密度	1.3±0.1 g/cm3
折射率	1.639
LogP	4.1
tPSA	91.8
氢键供体(HBD)数目	2
氢键受体(HBA)数目	8
可旋转键数目(RBC)	8
重原子数目	35
分子复杂度/Complexity	667
定义原子立体中心数目	0
InChi Key	SDGJBAUIGHSMRI-UHFFFAOYSA-N
InChi Code	InChI=1S/C25H29ClN6O3/c1-4-23(33)28-17-6-5-7-19(14-17)35-24-20(26)16-27-25(30-24)29-21-9-8-18(15-22(21)34-3)32-12-10-31(2)11-13-32/h5-9,14-16H,4,10-13H2,1-3H3,(H,28,33)(H,27,29,30)
化学名	N-[3-[5-chloro-2-[2-methoxy-4-(4-methylpiperazin-1-yl)anilino]pyrimidin-4-yl]oxyphenyl]propanamide
别名	WZ 4003; WZ4003; WZ-4003
HS Tariff Code	2934.99.9001
存储方式	Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month
运输条件	Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

溶解度数据

溶解度 (体外实验)	DMSO: ~7 mg/mL (~14.1 mM) Water: <1 mg/mL Ethanol: <1 mg/mL
溶解度 (体内实验)	配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.03 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。配方 2 中的溶解度:* ≥ 2.5 mg/mL (5.03 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

溶解度 (体外实验)

DMSO: ~7 mg/mL (~14.1 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: <1 mg/mL

溶解度 (体内实验)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.03 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.03 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	2.0121 mL	10.0606 mL	20.1211 mL
	5 mM	0.4024 mL	2.0121 mL	4.0242 mL
	10 mM	0.2012 mL	1.0061 mL	2.0121 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器

质量

浓度

体积

分子量*

计算重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片

WZ4003, a specific NUAK1 and NUAK2 inhibitor. Biochem J . 2014 Jan 1;457(1):215-25.
HTH-01-015 and WZ4003 inhibit MYPT1 Ser445 phosphorylation in vivo. Biochem J . 2014 Jan 1;457(1):215-25.
WZ4003, a specific NUAK1 and NUAK2 inhibitor. Biochem J . 2014 Jan 1;457(1):215-25.