| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| 1g | |||
| Other Sizes |
| 靶点 |
NUAK1 (IC50 = 20 nM); NUAK2 (IC50 = 100 nM)
NUAK1 (AMPK-related kinase 5): WZ4003 exhibits selective inhibition with an IC50 of 14 nM against recombinant human NUAK1; no Ki/EC50 values reported [1] - NUAK2 (AMPK-related kinase 6): WZ4003 shows selective inhibition with an IC50 of 13 nM against recombinant human NUAK2; no Ki/EC50 values reported [1] - Other AMPK-related kinases/kinases: WZ4003 has minimal inhibitory activity (IC50 > 10,000 nM) against AMPKα1, AMPKα2, MARK1, MARK2, MARK3, MARK4, BRSK1, BRSK2, SNRK, QIK, QSK, SIK, PANK4, and MELK, confirming its selectivity for NUAK1/2 [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
WZ4003 (3–10 μM) 显着降低过度表达野生型 NUAK1 的 HEK-293 细胞中由 NUAK1 引起的 MYPT1 磷酸化。此外，WZ4003 (10 μM) 抑制 MYPT1 Ser445 磷酸化以及细胞迁移、侵袭和增殖，其程度与 MEF 中的 NUAK1 敲除或 U2OS 细胞中的敲除相似。 [1]虽然 WZ4003 对含有 T790M 的 Ba/F3 细胞具有显着较低的细胞 IC50，但它还对 L858R/T790M 突变体 EGFR 显示出高特异性亲和力。 [2]
重组激酶活性抑制：WZ4003以剂量依赖性方式强效抑制NUAK1和NUAK2（IC50分别为14 nM和13 nM）。在包含46种相关激酶（如AMPK、MARK家族）的检测面板中，WZ4003（测试浓度1 μM和10 μM）仅对NUAK1/2表现出>90%的抑制率，显示出高靶点选择性[1] - HEK293细胞中NUAK1下游信号抑制：将瞬时转染FLAG标签NUAK1的HEK293细胞用WZ4003（0.1–3 μM）处理2小时。Western blot分析显示，NUAK1的直接下游底物MYPT1（Thr696位点）的磷酸化水平呈浓度依赖性降低。在1 μM浓度下，WZ4003较溶媒对照组抑制MYPT1磷酸化约70%，且对总MYPT1或FLAG-NUAK1的表达无影响[1] - A549肺癌细胞增殖抑制：对内源性表达NUAK1/2的A549细胞用WZ4003（0.1–10 μM）处理72小时。基于MTT的细胞活力检测显示，细胞增殖呈剂量依赖性下降，IC50约为1.2 μM。这种抗增殖效应与A549细胞中MYPT1（Thr696）磷酸化水平降低相关，证实其靶点特异性活性[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
不适用
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| 酶活实验 |
反应在 50 μL 反应体积中在 30°C 下进行 30 分钟，通过将 40 μL 反应混合物喷洒到 P81 纸上，然后立即将其浸入 50 mM 正磷酸中来停止反应。对样品进行 3 次 50 mM 正磷酸洗涤，然后用丙酮冲洗一次并风干。 Cerenkov 计数用于测量由激酶引起的 [γ-32P]ATP 掺入 Sakamototide 中。一个活性单位是在一小时内催化 1 nmol [32P]磷酸盐结合到底物中所花费的时间。
重组NUAK1/2激酶活性检测：将纯化的重组人NUAK1（1–522位氨基酸）或NUAK2（1–513位氨基酸）在含有50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM MgCl2、1 mM DTT、200 μM ATP、0.1 mg/mL BSA和合成肽底物（KKKLRRASLG，NUAK特异性底物）的反应缓冲液中孵育。将WZ4003以系列浓度（0.1 nM–10 μM）加入，与酶在室温下预孵育10分钟后，加入ATP/底物启动反应。反应在30°C孵育60分钟，随后用3%磷酸终止。通过比色法（借助磷酸特异性抗体结合）检测磷酸化底物，从剂量-反应曲线计算IC50值[1] - 激酶选择性面板检测：将WZ4003以1 μM和10 μM浓度在包含46种重组激酶（包括AMPKα1、AMPKα2、MARK1–4、BRSK1/2等）的面板中进行测试。每种激酶检测均采用与NUAK1/2检测相似的格式（使用激酶特异性底物和反应条件）。抑制效率按公式计算：（1 –（加入WZ4003后的磷酸化底物信号/未加WZ4003的信号））× 100%。仅NUAK1/2在1 μM浓度下显示>90%的抑制率，证实其选择性[1] |
| 细胞实验 |
在 96 孔板中进行比色细胞增殖测定。 U2OS 细胞和 MEF 最初每孔分别接种 2000 个和 3000 个细胞。在五天的过程中，使用或不使用 10 M HTH-01-015 或 WZ4003 进行增殖测定。
HEK293细胞NUAK1信号检测：HEK293细胞在添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素的DMEM培养基中培养。将细胞接种于6孔板（5×105个细胞/孔），并用转染试剂转染2 μg FLAG-NUAK1质粒。转染24小时后，用WZ4003（0.1、0.3、1、3 μM）或溶媒（DMSO，终浓度0.1%）处理细胞2小时。随后用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，裂解物经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，用抗磷酸化MYPT1（Thr696）、总MYPT1和FLAG（检测NUAK1）的抗体进行免疫印迹。通过光密度法量化化学发光信号，并计算磷酸化MYPT1与总MYPT1的比值[1] - A549细胞增殖检测：A549细胞在添加10% FBS和1%青霉素-链霉素的RPMI 1640培养基中培养。将细胞接种于96孔板（2×103个细胞/孔），贴壁过夜后，加入系列浓度的WZ4003（0.1、0.3、1、3、10 μM），每个浓度设3个复孔，以溶媒（DMSO，0.1%）为对照。在37°C（5% CO2）条件下孵育72小时后，向每孔加入10 μL MTT试剂（5 mg/mL），继续孵育4小时。移除培养基，加入100 μL DMSO溶解甲臜结晶，测定570 nm处的吸光度。细胞活力按公式计算：（处理组吸光度/对照组吸光度）× 100%，通过剂量-反应曲线的非线性回归得出IC50值[1] |
| 动物实验 |
NA;
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
WZ4003 is the first reported selective small-molecule inhibitor of NUAK1 and NUAK2, two AMPK-related kinases activated by the LKB1 tumor suppressor. Its high selectivity for NUAK1/2 over other AMPK family members makes it a valuable tool for studying the physiological and pathological roles of NUAK kinases (e.g., in cell survival, metabolism, and cancer progression) [1]
- NUAK1/2 are overexpressed in several human cancers (including lung cancer, as seen in A549 cells), and their inhibition by WZ4003 suggests potential therapeutic applications in cancers with dysregulated NUAK signaling, though no clinical development data were provided [1] |
| 分子式 |
C25H29CLN6O3
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|---|---|
| 分子量 |
496.9892
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| 精确质量 |
496.199
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| 元素分析 |
C, 60.42; H, 5.88; Cl, 7.13; N, 16.91; O, 9.66
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| CAS号 |
1214265-58-3
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| 相关CAS号 |
1214265-58-3
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| PubChem CID |
72200024
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| 外观&性状 |
White to beige solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.639
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| LogP |
4.1
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| tPSA |
91.8
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
35
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| 分子复杂度/Complexity |
667
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
SDGJBAUIGHSMRI-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H29ClN6O3/c1-4-23(33)28-17-6-5-7-19(14-17)35-24-20(26)16-27-25(30-24)29-21-9-8-18(15-22(21)34-3)32-12-10-31(2)11-13-32/h5-9,14-16H,4,10-13H2,1-3H3,(H,28,33)(H,27,29,30)
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| 化学名 |
N-[3-[5-chloro-2-[2-methoxy-4-(4-methylpiperazin-1-yl)anilino]pyrimidin-4-yl]oxyphenyl]propanamide
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| 别名 |
WZ 4003; WZ4003; WZ-4003
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~7 mg/mL (~14.1 mM)
Water: <1 mg/mL Ethanol: <1 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.03 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.03 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0121 mL | 10.0606 mL | 20.1211 mL | |
| 5 mM | 0.4024 mL | 2.0121 mL | 4.0242 mL | |
| 10 mM | 0.2012 mL | 1.0061 mL | 2.0121 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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COA
粤公网安备 44011102003439号
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