XMU-MP-1

Mammalian STE20-like protein kinase/MST1 (IC50 = 71.1 nM); MST2 (IC50 = 38.1 nM)

在 0.1 至 10 μM 的浓度范围内，XMU-MP-1 以剂量依赖性方式磷酸化 HepG2 细胞中内源性较低的 MOB1、LATS1/2 和 YAP。在小鼠巨噬细胞样细胞、人骨肉瘤和人结直肠腺癌细胞等多种细胞系中，XMU-MP-1 疗法可抑制过氧化氢刺激的 MOB1 磷酸化和 MST1/2 自磷酸化。通过抑制 MST1/2 激酶活性，XMU-MP-1 刺激下游效应器 Yes 相关蛋白并促进细胞分裂。在细胞中，XMU-MP-1 可以更有效、可逆地抑制激酶 MST1/2 的活性，并改善其随后的 YAP 激活 [1]。

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用XMU-MP-1治疗可下调MST1的表达水平，部分逆转MST1对增殖、迁移和凋亡相关蛋白的抑制作用，并抑制Hippo信号通路[3]。 为了确定Hippo信号通路是否介导了MST1在BCa中的生物学功能，使用Hippo信息通路抑制剂XMU-MP-1（MST1/2的抑制剂）抑制过表达MST1的BCa细胞中Hippo的信号通路功能。RT-qPCR分析表明，用抑制剂处理MST1过表达细胞会下调MST1的表达水平（图5A）。CCK-8和EdU掺入试验的结果显示，LV-MST1+XMU-MP-1组中LV-MST1组的抑制增殖能力部分恢复（图5B和C）。使用伤口愈合试验分析BCa细胞迁移；结果显示，与LV-MST1组相比，MST1+XMU-MP-1细胞组的细胞迁移也显著增加（图5D）。最后，进行蛋白质印迹分析，分析Hippo信号通路中关键蛋白的表达水平。与LV-MST1组相比，LV-MST1+XMU-MP-1组中LATS1和Bax的表达水平显著下调，而YAP、Bcl-2和Ki-67的表达水平在两种细胞系中显著上调（图6A和B）。

对于腹腔给药，XMU-MP-1在1 mg/kg至3 mg/kg的剂量范围内，在急性和慢性肝损伤小鼠中表现出出色的体内药代动力学。在 Fah 缺陷小鼠模型中，XMUMP-1 治疗表现出比媒介物治疗的对照组显着更高的人肝细胞再生率，表明 XMU-MP-1 治疗可能促进人肝再生 [1]。

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通过免疫组织化学和蛋白质印迹分析评估AngII输注的升主动脉和腹主动脉中的MST、p-MST、p-YAP、p-MOB和TAZ蛋白。为了研究MST1/2抑制对AA的影响，用输注AngII的西方饮食喂养的低密度脂蛋白（LDL）受体-/-小鼠服用赋形剂或XMU-MP-15周。在输注AngII的升主动脉和腹主动脉中，Hippo YAP信号蛋白显著升高XMU-MP-1给药导致AngII诱导的上升AA减弱，而不影响腹部AA和主动脉粥样硬化。抑制Hippo-YAP信号传导也导致AngII诱导的基质金属蛋白酶2（MMP2）活性、巨噬细胞积聚、主动脉内侧肥大和升主动脉弹性蛋白断裂的抑制[2]。

体外和体内激酶抑制试验[1]
对于体内抑制试验，用0.5μg空质粒或pCMV质粒转染人胚胎肾（HEK）293T细胞，每个质粒在12孔板中表达各种形式的Flag标记的全长MST1或MST2激酶。转染后24小时，用指定剂量的XMU-MP-1处理细胞3小时。用指定的抗体通过免疫印迹分析细胞裂解物。对于体外激酶抑制试验，从大肠杆菌中表达并纯化了重组GST标记的MOB1a和各种形式的重组His标记的全长MST1或MST2激酶。酶、ATP和GST-MOB1的消耗量与之前优化的条件保持一致。在30°C下，在激酶测定缓冲液中用指定剂量的XMU-MP-1进行30分钟的测定，然后进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹分析。

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XMU-MP-1的KINOMEscan分析[1]
XMU-MP-1使用KINOMEscan技术对468种激酶进行了分析，这是一种1μM的活性位点依赖性竞争结合分析。KINOMEscan选择性得分是化合物选择性的定量度量。它是通过将与化合物结合的激酶数量除以所测试的激酶总数来计算的。结果被报告为“对照%”（ctrl%），其中较低的数字表示较高的亲和力结合；ctrl%=（试验化合物信号-阳性对照信号）/（阴性对照信号-阳性控制信号）×100，其中阴性对照=DMSO（ctrl%=100%），阳性对照=对照化合物（ctrl%=0%）；S（10）=（ctrl%≤10%的激酶数量）/（测试的激酶的数量）。ctrl%<10%表示非常强的抑制作用，ctrl%>70%表示非常弱的抑制作用。当前研究中的激酶组或单个激酶名称包括TK（酪氨酸激酶）、TKL（TK样）、STE（酵母Sterile 7、Sterile 11和Sterile 20激酶的同源物）、AGC[蛋白激酶A、G和C家族]、CAMK（钙/钙调素依赖性蛋白激酶）、CK1（酪蛋白激酶1）和CMGC[细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、糖原合酶激酶3（GSK3）和CDC2样激酶（CLK）家族]。

人BCa细胞系MCF-7、MDA-MB-231和SKBR3以及正常乳腺上皮细胞系MCF-10A购自美国典型培养物保藏中心。所有细胞系均在添加了10%FBS的DMEM中培养，并在37°C、5%CO2的加湿培养箱中保持。 将MST1抑制剂XMU-MP-1溶解在DMSO中，并以0.1%的终浓度加入培养基中。细胞系在37°C的培养基中培养1小时[3]。

本研究使用了LDL受体敲除小鼠（LDL receptor −/−）和C57BL/6J小鼠。LDL受体敲除小鼠已回交10代至C57BL/6背景。本研究使用了年龄匹配的同窝雄性小鼠（8-10周龄）。小鼠饲养于屏障设施中，并喂以常规小鼠实验室饲料。为诱导高胆固醇血症，小鼠饲喂添加饱和脂肪（21% w/w 乳脂和 0.15% 胆固醇）的饲料，持续 5 周。将 XMU-MP-1 溶解于二甲基亚砜中，浓度为 30 mg/mL，每日灌胃给药，剂量为 3 mg/kg/天，给药时间间隔为 7 至 35 天。[2]

1 mg/kg; ip

FRG小鼠

首先在Sprague-Dawley大鼠中评估了XMU-MP-1的药代动力学特性，分别采用单次静脉注射或口服给药。XMU-MP-1表现出良好的药代动力学特征，半衰期为1.2小时，曲线下面积为1035 (h·ng)/ml，生物利用度为39.5%（表S3）。在药效学实验中，腹腔注射XMU-MP-1（1 mg/kg）后1.5至6小时之间，MOB1和YAP的磷酸化抑制达到最大值（图4A）。XMU-MP-1的剂量递增研究表明，在最小剂量（1 mg/kg，腹腔注射）下即可阻断肝组织中MOB1的磷酸化（图4B）。[1]

[1]. Pharmacological targeting of kinases MST1 and MST2 augments tissue repair and regeneration. Sci Transl Med. 2016 Aug 17;8(352):352ra108.

[2]. Mst1/2 Kinases Inhibitor, XMU-MP-1, Attenuates Angiotensin II-Induced Ascending Aortic Expansion in Hypercholesterolemic Mice. Circ Rep. 2021 Apr 20;3(5):259–266.

[3]. MST1 inhibits the progression of breast cancer by regulating the Hippo signaling pathway and may serve as a prognostic biomarker. Mol Med Rep. 2021 Mar 18;23(5):383.

组织修复和再生医学旨在满足用功能性组织替代受损组织的重要医疗需求。大多数再生医学策略侧重于生物材料和细胞的递送，然而，药物诱导再生具有良好的特异性和安全性，其潜力尚未得到充分开发。Hippo信号通路通过抑制细胞增殖和促进细胞凋亡，在器官大小和再生中发挥着关键的调控作用。MST1和MST2（MST1/2）是哺乳动物Hippo信号通路的同源蛋白，也是该通路的核心组成部分，因此是药物诱导组织再生的理想靶点。我们利用基于酶联免疫吸附试验（ELISA）的高通量生化方法，发现了一种可逆且选择性的MST1/2抑制剂——4-((5,10-二甲基-6-氧代-6,10-二氢-5H-嘧啶并[5,4-b]噻吩并[3,2-e][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基)苯磺酰胺（XMU-MP-1）。共晶结构和构效关系研究证实XMU-MP-1靶向MST1/2。XMU-MP-1可阻断MST1/2激酶活性，从而激活下游效应分子Yes相关蛋白，促进细胞生长。XMU-MP-1具有优异的体内药代动力学性质，腹腔注射1～3 mg/kg剂量可增强小鼠急性及慢性肝损伤模型的肠道修复以及肝脏修复和再生。在Fah缺陷小鼠模型中，XMU-MP-1治疗组的人类肝细胞再生率显著高于载体对照组，表明XMU-MP-1治疗可能促进人类肝脏再生。因此，MST1/2激酶活性的药理学调控为增强组织修复和再生提供了一种新方法，而XMU-MP-1是开发靶向再生疗法的首个先导化合物。[1]

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乳腺癌（BCa）是全球女性最常见的恶性肿瘤，其发病率在过去10年中显著增加。哺乳动物STE20样蛋白激酶1（MST1）参与多种恶性肿瘤的发生发展。本研究旨在探讨MST1在乳腺癌中的作用及其与乳腺癌患者预后不良的潜在关联。本研究采用逆转录定量PCR和免疫组织化学方法分析了MST1在膀胱癌（BCa）中的表达水平，并进一步通过统计分析探讨了MST1与BCa患者的临床病理特征及预后的关系。结果显示，MST1在BCa细胞系（MCF-7、MDA-MB-231和SKBR3）中高表达。采用CCK-8、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷（EDU）和流式细胞术分别检测了细胞增殖和凋亡，并采用划痕实验检测了细胞迁移能力。结果表明，MST1在BCa中的表达下调与患者预后不良密切相关，MST1可能是BCa的独立危险因素。MST1的过表达显著抑制了BCa细胞的增殖和迁移，并促进了其凋亡。此外，MST1的过表达显著激活了Hippo信号通路。 XMU-MP-1 处理可下调 MST1 的表达水平，并部分逆转 MST1 对增殖、迁移和凋亡相关蛋白的抑制作用，同时抑制 Hippo 信号通路。总之，本研究结果表明，MST1 的表达水平在膀胱癌 (BCa) 中可能下调，且与肿瘤大小、临床分期以及患者预后不良密切相关。此外，MST1 可能通过靶向 Hippo 信号通路抑制膀胱癌的进展。[3]

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背景：升主动脉瘤和腹主动脉瘤 (AA) 是主动脉的无症状永久性扩张，目前唯一的治疗方法是手术治疗。Hippo-Yap 信号通路在干细胞自我更新、组织再生和器官大小控制中起着关键作用。本研究使用XMU-MP-1（一种Hippo-Yap信号通路关键组分MST1/2的药理学抑制剂），探讨了Hippo-Yap在血管紧张素II（AngII）灌注的高胆固醇血症小鼠腹主动脉瘤（AAs）发生发展中的功能作用。方法与结果：采用免疫组织化学和蛋白质印迹法检测AngII灌注小鼠升主动脉和腹主动脉中MST、p-MST、p-YAP、p-MOB和TAZ蛋白的表达。为研究MST1/2抑制对AAs的影响，将喂食高脂饮食的低密度脂蛋白（LDL）受体敲除（LDL-R^-/-）小鼠灌注AngII后，分别给予载体或XMU-MP-1，持续5周。结果显示，AngII灌注小鼠升主动脉和腹主动脉中Hippo-Yap信号通路蛋白的表达显著升高。 XMU-MP-1 给药可减轻 AngII 诱导的升主动脉瘤，而不影响腹主动脉瘤和主动脉粥样硬化。抑制 Hippo-YAP 信号通路还可抑制 AngII 诱导的基质金属蛋白酶 2 (MMP2) 活性、巨噬细胞聚集、主动脉中层肥厚和升主动脉弹性蛋白断裂。结论：本研究表明 Hippo-YAP 信号通路在 AngII 诱导的升主动脉瘤发展中起着关键作用。[3]

C17H16N6O3S2

416.4773

416.072

C, 49.03; H, 3.87; N, 20.18; O, 11.52; S, 15.40

2061980-01-4

121499143

Light yellow to yellow solid powder

1.8

158

2

9

3

28

694

0

S1C([H])=C([H])C2=C1C(N(C([H])([H])[H])C1=C([H])N=C(N([H])C3C([H])=C([H])C(=C([H])C=3[H])S(N([H])[H])(=O)=O)N=C1N2C([H])([H])[H])=O

YRDHKIFCGOZTGD-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C17H16N6O3S2/c1-22-12-7-8-27-14(12)16(24)23(2)13-9-19-17(21-15(13)22)20-10-3-5-11(6-4-10)28(18,25)26/h3-9H,1-2H3,(H2,18,25,26)(H,19,20,21)

4-[(2,9-dimethyl-8-oxo-6-thia-2,9,12,14-tetrazatricyclo[8.4.0.03,7]tetradeca-1(14),3(7),4,10,12-pentaen-13-yl)amino]benzenesulfonamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 0.83 mg/mL (1.99 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 8.3 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 0.83 mg/mL (1.99 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 8.3 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 0.83 mg/mL (1.99 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 8.3 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 0.4 mg/mL (0.96 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。