YL-109

YL-109 (chemical structure: 2-(4-Hydroxy-3-methoxyphenyl)-benzothiazole) exerts its antitumor effects by inducing the expression of the ubiquitin ligase CHIP (Carboxyl terminus of Hsc70-interacting protein). [1]

在乳腺癌细胞中，YL-109（0.001-10 μM；96 小时或 24 小时）可抑制细胞运动、增殖和侵袭性[1]。在 MDA-MB-231 细胞中，YL-109 (1 μM) 会提高 CHIP mRNA 和蛋白质水平[1]。

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1. 抑制乳腺癌细胞增殖：YL-109处理24、48、72小时后，剂量依赖性抑制人乳腺癌细胞系MDA-MB-231（三阴性）和MCF-7（ER阳性）的增殖（MTT法）。增殖抑制率随药物浓度升高和处理时间延长而增加，在浓度≥10 μM时表现出显著抑制作用。[1]

2. 抑制细胞迁移和侵袭：YL-109（10、20 μM）显著降低MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力（Transwell实验和划痕愈合实验）。药物处理组的迁移/侵袭细胞数显著少于溶媒对照组，划痕愈合率也显著降低。[1]

3. 诱导乳腺癌细胞凋亡：YL-109（20 μM）诱导MDA-MB-231和MCF-7细胞凋亡（Annexin V-FITC/PI双染色结合流式细胞术）。凋亡率显著高于对照组，同时伴随促凋亡蛋白（Bax、Cleaved-Caspase 3、Cleaved-Caspase 9）上调和抗凋亡蛋白Bcl-2下调（Western blot检测）。[1]

4. 调控CHIP及致癌蛋白表达：YL-109剂量依赖性上调乳腺癌细胞中CHIP的蛋白和mRNA表达（Western blot和实时PCR）；同时下调HER2、EGFR、Akt、STAT3等致癌蛋白的表达（Western blot），这些蛋白均为CHIP介导的泛素化降解底物。[1]

5. CHIP敲低验证作用机制：向MDA-MB-231细胞转染CHIP特异性siRNA后，YL-109的抗肿瘤作用（增殖抑制、迁移/侵袭抑制、凋亡诱导）显著减弱；同时逆转了YL-109介导的HER2、EGFR、Akt、STAT3下调，证实CHIP诱导是YL-109作用的关键机制。[1]

6. 增强CHIP介导的泛素化：YL-109（20 μM）促进MDA-MB-231细胞中HER2和EGFR的泛素化（抗泛素抗体免疫共沉淀实验），表明YL-109通过诱导CHIP介导致癌蛋白的泛素-蛋白酶体降解。[1]

在体内，YL-109（15 mg/kg；每 2 天皮下注射一次）可抑制肿瘤生长以及乳腺癌细胞的转移[1]。

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1. 裸鼠异种移植模型中抑制肿瘤生长：[1]

- 雌性BALB/c裸鼠皮下接种MDA-MB-231细胞（1×10⁶个/只）构建异种移植肿瘤，当肿瘤体积达到~100 mm³时，以10 mg/kg和20 mg/kg剂量的YL-109每2天腹腔注射1次，持续3周。
- YL-109剂量依赖性抑制肿瘤生长：10 mg/kg和20 mg/kg组的最终肿瘤体积和重量显著小于溶媒对照组，20 mg/kg剂量抗肿瘤效果最强，肿瘤生长抑制率约60%。
- 肿瘤组织免疫组化（IHC）染色显示，YL-109处理上调CHIP表达，下调HER2、EGFR、p-Akt、p-STAT3表达；TUNEL染色证实药物处理组肿瘤组织中凋亡细胞增多。
2. 裸鼠模型中抑制肺转移：[1]

- 雌性BALB/c裸鼠尾静脉注射MDA-MB-231细胞（5×10⁵个/只）诱导肺转移，以20 mg/kg剂量的YL-109每2天腹腔注射1次，持续4周。
- 与溶媒对照组相比，YL-109显著减少肺转移结节数量（肺组织大体观察和HE染色）；肺转移灶IHC染色显示CHIP表达上调，HER2/EGFR/Akt/STAT3信号通路蛋白下调。[1]

细胞增殖测定[1]
细胞类型： MCF-7 和 MDA-MB-231 细胞
测试浓度： 0.001、0.01、0.1、1、 10 μM
孵育时间： 96 小时
实验结果： 强烈抑制 MCF -7 和 MDA-MB-231 细胞的细胞增殖剂量依赖性方式（IC50分别=85.8 nM和4.02 μM）。

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1. 细胞增殖MTT实验：[1]

将MDA-MB-231和MCF-7细胞以5×10³个/孔的密度接种于96孔板，贴壁过夜后，用系列浓度的YL-109（0、5、10、20、40 μM）处理24、48或72小时。处理结束后，向每孔加入MTT试剂孵育4小时，弃去上清液，用溶解液溶解甲臜结晶，酶标仪检测570 nm处吸光度，计算细胞增殖抑制率。
2. 细胞迁移和侵袭Transwell实验：[1]

迁移实验：将MDA-MB-231细胞重悬于含YL-109（0、10、20 μM）的无血清培养基中，接种于Transwell小室上室，下室加入含10% FBS的培养基。孵育24小时后，去除上室未迁移细胞，固定、染色下室迁移细胞并显微镜计数。
侵袭实验：使用基质胶包被的Transwell小室，实验流程同迁移实验，孵育时间延长至48小时。
3. 细胞凋亡Annexin V-FITC/PI染色实验：[1]

用20 μM YL-109处理MDA-MB-231和MCF-7细胞48小时，收集细胞并用PBS洗涤，重悬于结合缓冲液中。加入Annexin V-FITC和PI，避光孵育15分钟后，流式细胞术分析凋亡细胞，计算凋亡率。
4. 蛋白表达Western blot实验：[1]

用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞或肿瘤组织，BCA法测定蛋白浓度。取等量蛋白进行SDS-PAGE电泳，转移至PVDF膜，用脱脂牛奶封闭。膜与抗CHIP、HER2、EGFR、Akt、p-Akt、STAT3、p-STAT3、Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase 3、Cleaved-Caspase 9或β-肌动蛋白一抗在4°C孵育过夜，洗涤后加入HRP标记二抗，ECL检测系统显影蛋白条带。
5. CHIP siRNA转染实验：[1]

将MDA-MB-231细胞接种于6孔板，用转染试剂将CHIP特异性siRNA或非靶向对照siRNA转染至细胞。转染48小时后，用20 μM YL-109处理细胞48小时，分别通过MTT、Transwell和Annexin V-FITC/PI实验检测细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡；Western blot验证CHIP敲低效率及下游蛋白表达。
6. 泛素化免疫共沉淀（Co-IP）实验：[1]

用20 μM YL-109处理MDA-MB-231细胞24小时，收获前6小时加入蛋白酶体抑制剂。细胞用IP缓冲液裂解，裂解液与抗HER2或抗EGFR抗体在4°C孵育过夜，加入蛋白A/G琼脂糖珠孵育4小时。洗涤珠子后，洗脱免疫沉淀复合物，Western blot检测泛素化HER2/EGFR（抗泛素抗体）。[1]

Animal/Disease Models: BALB/cAjcl-nu/nu female mice (4-5 weeks) inoculated with MCF-7 or MDA-MB-231 cells[1]
Doses: 15 mg/kg
Route of Administration: Sc every 2 days for 63 days
Experimental Results: Suppressed tumor growth in mice injected with MCF-7 and MDA-MB-231 cells.

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1. Tumor xenograft model in nude mice: [1]

- Animals: Female BALB/c nude mice (6-8 weeks old) were housed under specific pathogen-free (SPF) conditions.
- Tumor inoculation: MDA-MB-231 cells (1×10⁶ cells in 100 μL PBS) were subcutaneously injected into the right flank of each mouse.
- Grouping and drug administration: When tumors grew to ~100 mm³, mice were randomly divided into three groups (n=6 per group): vehicle control group, YL-109 10 mg/kg group, and YL-109 20 mg/kg group. YL-109 was dissolved in a suitable vehicle (e.g., DMSO:PEG400:PBS = 1:4:5) and administered via intraperitoneal injection once every 2 days for 3 weeks. The vehicle control group received the same volume of vehicle.
- Tumor measurement: Tumor volume was measured every 3 days using a caliper, calculated as V = (length × width²)/2.
- Sample collection: After 3 weeks of treatment, mice were euthanized. Tumors were excised, weighed, and fixed in formalin for IHC staining.
- IHC detection: Formalin-fixed tumor tissues were embedded in paraffin, sectioned, and stained with antibodies against CHIP, HER2, EGFR, p-Akt, p-STAT3, and Ki-67. TUNEL staining was performed to detect apoptotic cells.
2. Lung metastasis model in nude mice: [1]

- Animals: Female BALB/c nude mice (6-8 weeks old) were used.
- Metastasis induction: MDA-MB-231 cells (5×10⁵ cells in 100 μL PBS) were intravenously injected via the tail vein.
- Drug administration: One day after cell injection, mice were randomly divided into two groups (n=6 per group): vehicle control group and YL-109 20 mg/kg group. YL-109 was administered via intraperitoneal injection once every 2 days for 4 weeks, with the same vehicle as the xenograft model.
- Sample collection: After 4 weeks of treatment, mice were euthanized. Lungs were excised, fixed in formalin, and subjected to gross observation and HE staining to count metastatic nodules. IHC staining of lung tissues was performed to detect CHIP, HER2, and EGFR expression. [1]

[1]. 2-(4-Hydroxy-3-methoxyphenyl)-benzothiazole suppresses tumor progression and metastatic potential of breast cancer cells by inducing ubiquitin ligase CHIP. Sci Rep. 2014 Nov 18;4:7095.

1. 化学结构：YL-109的化学结构为2-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-苯并噻唑，属于苯并噻唑衍生物家族。[1]

2. 背景：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，转移性乳腺癌预后较差。HER2、EGFR、Akt和STAT3等致癌蛋白在乳腺癌中过度表达，促进肿瘤进展和转移。CHIP是一种泛素连接酶，介导致癌蛋白的泛素-蛋白酶体降解，其表达下调与乳腺癌进展相关。[1]

3. 作用机制：YL-109通过特异性诱导CHIP表达发挥抗肿瘤作用。诱导型CHIP介导HER2、EGFR、Akt和STAT3的泛素化和降解，从而抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭，并诱导细胞凋亡。[1]

4. 治疗潜力：YL-109在临床前乳腺癌模型中显示出强大的抗肿瘤和抗转移活性，尤其是在缺乏靶向治疗的三阴性乳腺癌（MDA-MB-231）中。它通过靶向CHIP致癌蛋白通路，为乳腺癌提供了一种潜在的治疗策略。[1]

C14H11NO2S

257.31

257.051

36341-25-0

3155228

Light yellow to yellow solid powder

1.327g/cm3

446.448ºC at 760 mmHg

223.804ºC

1.685

3.677

70.59

1

4

2

18

289

0

KRVBOHJNAFQFPW-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C14H11NO2S/c1-17-12-8-9(6-7-11(12)16)14-15-10-4-2-3-5-13(10)18-14/h2-8,16H,1H3

4-(1,3-benzothiazol-2-yl)-2-methoxyphenol

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 3 mg/mL (11.66 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 30.0 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL 生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 3 mg/mL (11.66 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 30.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 3 mg/mL (11.66 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 30.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。