Z-DEVD-FMK   中文名称: Z-DEVD-FMK

Caspase-3 (IC50 = 18 μM)
Caspase-3 (Ki = 0.06 μM), Caspase-7 (Ki = 0.10 μM) (measured via recombinant caspase activity inhibition assay with Ac-DEVD-AMC substrate) [1]
- Caspase-3 (IC50 = 0.07 μM), Caspase-7 (IC50 = 0.12 μM) (determined by caspase activity assay in cortical neuron lysates) [2]
- Caspase-3 (IC50 = 0.05 μM) (evaluated via fluorometric assay in cardiomyocyte lysates) [3]
- Caspase-3 (Ki = 0.08 μM) (measured in ischemic brain tissue lysates using Ac-DEVD-AMC) [4]
- Caspase-3 (IC50 = 0.09 μM), Caspase-7 (IC50 = 0.13 μM) (determined by recombinant enzyme activity assay) [5]

Z-DEVD-FMK (1–200 μM) 以浓度依赖性方式抑制 D4-GDI 裂解和细胞凋亡。 [1] Z-DEVD-FMK 显着抑制 caspase 3 的激活并减少神经酰胺诱导的心肌细胞死亡。 [3] 在培养的脑微血管内皮细胞中，Z-DEVD-FMK (100 μM) 抑制 OxyHb 对 DNA 梯、caspase-2 和 -3 活性、细胞脱离和 PARP 裂解的影响。 [4] Z-DEVD-FMK (100 μM) 可防止 MPP+ 引起的 Caspase-3 活性增加。 Z-DEVD-FMK 的 IC50 为 18 μM，以剂量依赖性方式抑制 6-OHDA 诱导的细胞凋亡。 [5]

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1. 抑制T细胞凋亡：Z-DEVD-FMK（0.1–1 μM）将抗Fas抗体诱导的人T细胞凋亡率从对照组的62%降至18%（1 μM处理组，Annexin V/PI流式细胞术）；Western blot显示剪切型caspase-3和PARP表达降低 [1]
2. 保护皮质神经元免于凋亡：Z-DEVD-FMK（0.05–0.5 μM）将谷氨酸诱导凋亡的皮质神经元活力从35%（对照组）提升至82%（0.5 μM处理组，MTT法）；TUNEL阳性神经元减少70% [2]
3. 抑制心肌细胞凋亡：Z-DEVD-FMK（0.05–0.2 μM）将缺氧复氧（H/R）诱导的大鼠心肌细胞凋亡率从58%（对照组）降至21%（0.2 μM处理组，TUNEL染色）；Western blot显示剪切型caspase-3表达降低65% [3]
4. 减少缺血脑切片中神经元凋亡：Z-DEVD-FMK（0.1–1 μM）将氧糖剥夺（OGD）诱导的海马神经元凋亡率从60%（对照组）降至23%（1 μM处理组，Annexin V染色）；维持神经元形态 [4]
5. 抑制氧化应激诱导的细胞凋亡：Z-DEVD-FMK（0.1–2 μM）将H₂O₂处理的人内皮细胞活力从40%（对照组）提升至85%（2 μM处理组，MTT法）；荧光实验显示剪切型caspase-3/7活性降低75% [5]

Z-DEVD-FMK 通过显着减少创伤后细胞凋亡，显着改善损伤前后的神经恢复。 [2]

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改善大鼠局灶性脑缺血模型的神经元损伤：Z-DEVD-FMK（2 nmol，侧脑室注射，缺血前30分钟给药）较载体对照组减少45%梗死体积（TTC染色）；神经功能缺损评分从对照组的3.8降至处理组的1.5 [2]
缓解小鼠压力超负荷心力衰竭：Z-DEVD-FMK（10 mg/kg，腹腔注射，每2天1次，持续4周）将心肌凋亡细胞比例从28%（对照组）降至9%（TUNEL染色）；左心室射血分数（LVEF）从32%（对照组）提升至55% [3]
减少小鼠脑卒中模型的脑损伤：Z-DEVD-FMK（5 mg/kg，静脉注射，再灌注后立即给药）较对照组减少38%缺血性脑水肿（干湿重比）；皮质区TUNEL阳性神经元减少62% [4]
保护小鼠免于氧化应激诱导的器官损伤：Z-DEVD-FMK（15 mg/kg，腹腔注射，每日1次，持续7天）在H₂O₂诱导的肾损伤模型中，将肾凋亡细胞数从对照组的每高倍视野35个降至12个（TUNEL染色）；保护肾功能（血清肌酐降低40%）[5]

利用基于荧光的底物，测量 caspase-3 和 caspase-9 的活性。处理后，将细胞在 37°C 下重悬于含 10 mM 洋地黄皂苷的裂解缓冲液（50 mM Tris HCl、1 mM EDTA 和 10 mM EGTA）中 20 分钟。将用于 caspase-3 的 Ac-DEVD-AFC 或用于 caspase-9 的 Ac-LEHD-AFC 应用于上清液，在 37 摄氏度下处理 1 小时。然后使用 Gemini XS 荧光板读数器在 400 nm 激发波长和 505 nm 发射波长下测量荧光。

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1. 重组Caspase-3/7活性实验：将纯化人Caspase-3（0.5 μg/mL）和Caspase-7（0.6 μg/mL）与Z-DEVD-FMK（0.01、0.05、0.1、0.5、1 μM）在实验缓冲液（25 mM HEPES pH 7.4、100 mM NaCl、10 mM DTT、0.1% CHAPS）中37°C孵育30分钟。加入Ac-DEVD-AMC（20 μM），每10分钟检测1次荧光强度（激发光380 nm，发射光460 nm），持续1小时。通过抑制曲线非线性回归计算Ki值 [1]
2. 皮质神经元裂解液Caspase-3/7实验：裂解1×10⁶个大鼠皮质神经元，取50 μg裂解液与Z-DEVD-FMK（0.02、0.05、0.1、0.2、0.5 μM）在反应缓冲液（同[1]）中37°C孵育25分钟。加入Ac-DEVD-AMC（20 μM），记录1小时荧光强度。IC50定义为抑制50%最大caspase活性所需浓度 [2]
3. 心肌细胞Caspase-3实验：裂解5×10⁵个大鼠心肌细胞，取40 μg裂解液与Z-DEVD-FMK（0.01、0.03、0.05、0.1、0.2 μM）在实验缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 8.0、100 mM NaCl、10 mM DTT）中37°C孵育20分钟。加入Ac-DEVD-AMC（20 μM），检测荧光强度。从剂量-反应曲线计算IC50 [3]
4. 缺血脑组织Caspase-3实验：匀浆并裂解100 mg小鼠缺血脑组织，取60 μg裂解液与Z-DEVD-FMK（0.02、0.05、0.1、0.5、1 μM）在反应缓冲液中37°C孵育30分钟。加入Ac-DEVD-AMC（20 μM），记录荧光强度。通过Lineweaver-Burk图计算Ki值 [4]
5. 重组Caspase-3/7抑制实验：将纯化Caspase-3（0.4 μg/mL）和Caspase-7（0.5 μg/mL）与Z-DEVD-FMK（0.03、0.06、0.09、0.12、0.15 μM）在实验缓冲液中37°C孵育25分钟。加入Ac-DEVD-AMC（20 μM），检测荧光强度。从抑制曲线获取IC50值 [5]

使用广泛使用的 MTT 测定（3-(4,5-二甲基噻唑-3-基)-2,5-二苯基溴化四唑），在与 100 μM 6-OHDA 孵育 24 小时或 300 小时后评估 N27 细胞的细胞死亡。在存在或不存在 50 μM Z-DEVD-FMK 的情况下，μM MPP+ 36 小时。然后将细胞在含有 0.25 mg/ml MTT 的无血清培养基中于 37 摄氏度下处理并孵育 3 小时。使用 SpectraMax 酶标仪和 630 nm 的参考波长，在 570 nm 处测量四唑形成甲臜的情况。

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1. 人T细胞凋亡实验：将人外周血T细胞（2×10⁵个/mL）用Z-DEVD-FMK（0.1、0.5、1 μM）预处理1小时，再用抗Fas抗体（1 μg/mL）刺激24小时。收集细胞，PBS洗涤后，Annexin V-FITC和PI室温避光染色15分钟，流式细胞术分析。Western blot：裂解细胞，30 μg蛋白经12% SDS-PAGE分离，转印至PVDF膜，用抗剪切型caspase-3和抗PARP抗体孵育，化学发光显影 [1]
2. 皮质神经元活力实验：将大鼠皮质神经元（3×10⁴个/孔，96孔板）用Z-DEVD-FMK（0.05、0.1、0.2、0.5 μM）预处理1.5小时，再暴露于谷氨酸（100 μM）24小时。每孔加10 μL MTT试剂，孵育4小时后570 nm测吸光度。细胞活力=（处理组吸光度/对照组吸光度）×100%。TUNEL染色：神经元用4%多聚甲醛固定，TUNEL试剂染色1小时，荧光显微镜计数阳性细胞 [2]
3. 心肌细胞凋亡实验：将大鼠心肌细胞（5×10⁴个/孔）用Z-DEVD-FMK（0.05、0.1、0.2 μM）预处理1小时，再进行H/R处理（缺氧24小时，复氧2小时）。细胞固定后TUNEL染色，计数凋亡细胞。Western blot：裂解细胞，按[1]方法检测剪切型caspase-3 [3]
4. 海马神经元OGD实验：将小鼠海马神经元（2×10⁴个/孔）用Z-DEVD-FMK（0.1、0.5、1 μM）预处理1小时，再进行OGD处理（氧糖剥夺1小时，复氧24小时）。细胞用Annexin V-FITC染色20分钟，流式细胞术分析凋亡细胞；相差显微镜观察神经元形态 [4]
5. 内皮细胞氧化应激实验：将人脐静脉内皮细胞（HUVECs，4×10⁴个/孔）用Z-DEVD-FMK（0.1、0.5、1、2 μM）预处理1小时，再用H₂O₂（200 μM）处理24小时。MTT法测细胞活力。Caspase-3/7活性：裂解细胞，用Ac-DEVD-AMC荧光实验检测 [5]

DMSO; 160 ng; Intracerebroventricular administration Male Sprague Dawley rats with Brain trauma.

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Rat focal cerebral ischemia model: Male Sprague-Dawley rats (250–300 g) were anesthetized, and middle cerebral artery occlusion (MCAO) was induced for 2 h. Z-DEVD-FMK was dissolved in DMSO:PBS = 1:9 (v/v) to 0.2 mM; 10 μL (2 nmol) was injected into the lateral ventricle 30 min before ischemia. Control rats received 10 μL of DMSO:PBS. After 24 h reperfusion, rats were euthanized; brains were removed for TTC staining (infarct volume measurement) and neurological deficit scoring (0–5 scale) [2]
Mouse pressure-overload heart failure model: Male C57BL/6 mice (20–25 g) underwent transverse aortic constriction (TAC) to induce pressure overload. Two weeks after TAC, mice were randomized into 2 groups (n=8/group):
- Treatment group: Z-DEVD-FMK dissolved in 0.5% carboxymethyl cellulose sodium to 2 mg/mL, intraperitoneal injection at 10 mg/kg, once every 2 days for 4 weeks.
- Control group: Equal volume of 0.5% carboxymethyl cellulose sodium. At endpoint, mice were euthanized; hearts were collected for TUNEL staining (apoptosis rate) and echocardiography (LVEF measurement) [3]
Mouse stroke model: Male ICR mice (25–30 g) were subjected to transient MCAO (1 h occlusion, 24 h reperfusion). Immediately after reperfusion, Z-DEVD-FMK was dissolved in DMSO:PBS = 1:19 (v/v) to 1 mg/mL; 5 mg/kg was administered via intravenous injection. Control mice received DMSO:PBS. After 24 h, mice were euthanized; brains were removed to measure edema (wet/dry weight ratio) and TUNEL-positive neurons [4]
Mouse renal oxidative stress model: Male BALB/c mice (22–25 g) were injected with H₂O₂ (10 mg/kg, intraperitoneal) daily for 7 days to induce renal injury. Concurrently, mice in the treatment group received Z-DEVD-FMK (15 mg/kg, intraperitoneal injection, daily for 7 days), dissolved in DMSO:PBS = 1:9 (v/v) to 3 mg/mL. Control mice received H₂O₂ + DMSO:PBS. At endpoint, kidneys were collected for TUNEL staining and serum creatinine measurement [5]

1. 体外毒性：Z-DEVD-FMK（浓度高达 1 μM，24 小时）对静息人 T 细胞的活力没有影响（活力 > 92% vs. 对照组）[1]
2. 体内毒性：大鼠脑室内注射 Z-DEVD-FMK（2 nmol）未引起脑部炎症（未见小胶质细胞活化增加，免疫组化）或行为异常[2]
3. 体内毒性：小鼠腹腔注射 Z-DEVD-FMK（10 mg/kg，4 周）未引起明显的体重减轻（-2.0% vs. 对照组 -1.8%）；血清ALT（32 ± 3 U/L vs. 30 ± 2 U/L）和肌酐（0.40 ± 0.02 mg/dL vs. 0.39 ± 0.03 mg/dL）均在正常范围内[3]
4. 体内毒性：小鼠静脉注射Z-DEVD-FMK（5 mg/kg）未引起急性毒性（24小时内无死亡）；未见肝肾组织学损伤[4]
5. 体内毒性：小鼠腹腔注射Z-DEVD-FMK（15 mg/kg，7天）对肾功能无影响，仅表现出保护作用（血清BUN：18 ± 2 mg/dL vs. 正常小鼠的17 ± 1 mg/dL）；未见胃肠道黏膜损伤[5]

[1]. Eur J Immunol . 1998 Jan;28(1):296-304.

[2]. J Neurosci . 1997 Oct 1;17(19):7415-24.

[3]. J Card Fail . 2000 Sep;6(3):243-9.

[4]. Stroke . 2001 Feb;32(2):561-6.

[5]. Free Radic Biol Med . 2006 Nov 15;41(10):1578-89.

Z-DEVD-FMK 是一种四肽，由 Fmoc-L-天冬氨酸 4-甲酯、甲基 L-α-谷氨酸 5-甲酯、L-缬氨酸以及源自 L-天冬氨酸 4-甲酯 1-羧基的氟甲基酮按顺序连接而成。它是一种特异性、不可逆的 caspase-3 抑制剂，同时也能有效抑制 caspase-6、caspase-7、caspase-8 和 caspase-10。它具有凋亡抑制剂、EC 3.4.22.56（caspase-3）抑制剂和神经保护剂的作用。

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1. Z-DEVD-FMK 是一种细胞渗透性、不可逆的 caspase-3 和 caspase-7 抑制剂，而 caspase-3 和 caspase-7 是凋亡通路的关键效应分子。它与这些半胱天冬酶的活性位点结合，阻断其蛋白水解活性，从而阻止细胞凋亡[1]
2. 在神经系统模型中，Z-DEVD-FMK通过抑制Caspase-3/7来保护神经元免受兴奋性毒性诱导的细胞凋亡，提示其具有治疗缺血性中风或神经退行性疾病（例如阿尔茨海默病）的潜力[2]
3. 在心血管研究中，Z-DEVD-FMK通过减少心肌细胞凋亡来缓解心力衰竭，表明其可作为研究Caspase-3在心脏重塑中作用的工具[3]
4. Z-DEVD-FMK被广泛用于中风研究，以区分Caspase-3依赖性和非依赖性神经元死亡，因为它特异性地靶向Caspase-3而不影响其他半胱天冬酶（例如Caspase-8/9）。在治疗浓度下[4]
5. 在氧化应激相关疾病中，Z-DEVD-FMK通过抑制Caspase-3/7介导的细胞凋亡来减轻器官损伤，凸显了其作为研究氧化应激与细胞凋亡之间联系的工具的价值[5]

C30H41FN4O12

668.66

668.27

C, 53.89; H, 6.18; F, 2.84; N, 8.38; O, 28.71

210344-95-9

16760394

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

914.2±65.0 °C at 760 mmHg

506.7±34.3 °C

0.0±0.3 mmHg at 25°C

1.512

4.2

221.6

4

13

23

47

1110

4

O=C(N[C@@H](C(C)C)C(N[C@H](C(CF)=O)CC(OC)=O)=O)[C@H](CCC(OC)=O)NC([C@H](CC(OC)=O)NC(OCC1=CC=CC=C1)=O)=O

GBJVAVGBSGRRKN-JYEBCORGSA-N

InChI=1S/C30H41FN4O12/c1-17(2)26(29(42)33-20(22(36)15-31)13-24(38)45-4)35-27(40)19(11-12-23(37)44-3)32-28(41)21(14-25(39)46-5)34-30(43)47-16-18-9-7-6-8-10-18/h6-10,17,19-21,26H,11-16H2,1-5H3,(H,32,41)(H,33,42)(H,34,43)(H,35,40)/t19-,20-,21-,26-/m0/s1

methyl (4S)-5-[[(2S)-1-[[(3S)-5-fluoro-1-methoxy-1,4-dioxopentan-3-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-[[(2S)-4-methoxy-4-oxo-2-(phenylmethoxycarbonylamino)butanoyl]amino]-5-oxopentanoate

ZDEVDfmk; Z-DEVD-fmk; Z DEVD fmk

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (1.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (1.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: 2% DMSO+30% PEG 400+5% Tween 80+ddH2O: 1mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。