| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Caspase-1, caspase-5, and cathepsin B.
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| 体外研究 (In Vitro) |
Z-WEHD-FMK（80 μM；9 小时）几乎完全阻断了沙眼衣原体引起的 golgin-84 裂解，并提高了细胞中 GM130 的表达 [1]。Z-WEHD-FMK 成功抑制了 0909I E. 在暴露于 E. piscicida 前 30 分钟引起的细胞焦亡形态和 E. piscicida 诱导的 ZF4 细胞毒性。此外，它还能预防胞质 LPS 引起的细胞毒性 [2]。值得注意的是，Z-WEHD-FMK（20 μM；在 Cr3+、Ni2+ 和 Co2+ 处理后 18-24 小时）可使 IL-1β 的产生减少 76%-86%，在 200-400 ppm Cr3+ 处理下也观察到类似的减少（35%）。当Ni2+浓度为48 ppm或更高时，caspase-1抑制剂可使Co2+浓度降低40%至45%。最终，caspase-1抑制剂可将Co2+浓度降低至6 ppm时的检测阈值以下，而在骨髓来源的巨噬细胞（BMDM）中，当浓度为12至24 ppm时，Co2+浓度的降低幅度可能在40%至48%之间[3]。
Z-WEHD-FMK 是一种强效、可透过细胞膜且不可逆的炎症性 caspase-1 和 caspase-5 抑制剂。它对组织蛋白酶 B 的活性也具有显著的抑制作用，IC50 为 6 uM。Z-WEHD-FMK 通过共价修饰活性位点半胱氨酸，阻断这些酶的蛋白水解活性。在细胞实验中，用 Z-WEHD-FMK（80 uM；9 小时）处理可几乎完全阻断沙眼衣原体诱导的 golgin-84 裂解，并增加 GM130 的表达，表明 caspase-1 活性受到显著抑制。在暴露于爱德华氏菌（Edwardsiella piscicida）前 30 分钟加入 Z-WEHD-FMK，可有效抑制爱德华氏菌诱导的 ZF4 细胞毒性和焦亡形态。此外，Z-WEHD-FMK 还能抑制胞质 LPS 递送诱导的细胞毒性。在金属诱导的炎症模型中，Z-WEHD-FMK（20 uM；18-24 小时）处理可显著降低 Cr3⁺、Ni2⁺ 和 Co2⁺ 离子引起的 IL-1β 释放，降低幅度达 76% 至 86%。这证实了其作为炎症小体激活的强效抑制剂的作用。WEHD 序列是 caspase-1 和 -5 的优先识别基序，这解释了该抑制剂对这两种 caspase 的选择性高于其他家族成员（如 caspase-3）。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
Z-WEHD-FMK 主要用作体外工具来解析炎症通路，目前关于其在动物模型中体内系统疗效的公开数据有限。然而，它已成功用于小鼠体内实验，以证实 caspase-1 在炎症模型中的作用。例如，在脓毒症或急性肺损伤的小鼠模型中，在进行刺激（例如，LPS 或细菌）之前腹腔注射 Z-WEHD-FMK，可降低血清和支气管肺泡灌洗液 (BALF) 中 IL-1β 和 IL-18 的水平，并提高存活率。这些作用直接归因于 caspase-1 的抑制以及随之而来的细胞焦亡和细胞因子成熟的减少。这些数据支持将 caspase-1/5 抑制剂用作潜在的抗炎疗法。然而，由于 Z-WEHD-FMK 的肽类性质和潜在的脱靶效应，它主要被视为一种研究工具，而非候选药物。
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| 酶活实验 |
采用荧光法或比色法测定Z-WEHD-FMK对caspase-1的体外抑制活性。典型的测定方法如下：将重组人caspase-1激活后，加入测定缓冲液（例如，50 mM HEPES，pH 7.4，100 mM NaCl，10 mM DTT，1 mM EDTA，0.1% CHAPS）中，并加入不同浓度的Z-WEHD-FMK（通常为0.1 nM至100 uM），于室温下孵育30-60分钟。预孵育后，向反应混合物中加入caspase-1特异性荧光肽底物，例如Ac-WEHD-AMC（7-氨基-4-甲基香豆素）或Ac-WEHD-AFC（7-氨基-4-三氟甲基香豆素）。活性 caspase-1 对底物的切割会释放出荧光标记的 AMC 或 AFC 基团。使用荧光微孔板读数仪监测荧光强度随时间的变化（AMC 的激发波长：380 nm，发射波长：460 nm；AFC 的激发波长：400 nm，发射波长：505 nm）。初始反应速率 (V0) 由荧光强度线性增加的部分计算得出。IC50 值通过绘制反应速率与抑制剂浓度的关系曲线，并将数据拟合到剂量-反应抑制曲线来确定。使用类似的底物（例如 Ac-WEHD-AMC）进行相同的检测，以评估 caspase-5 的抑制情况。为了确认不可逆结合，进行稀释或“跳跃稀释”实验。将 caspase 与高浓度抑制剂预孵育较长时间，然后取一定量的预孵育液稀释到含有底物的大体积检测缓冲液中。如果抑制是不可逆的（共价的），即使稀释后酶活性仍然很低。对于组织蛋白酶B，可以使用类似的测定方法，但要使用组织蛋白酶B特异性底物，例如Z-RR-AMC，最佳pH值为5.5-6.0。
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| 细胞实验 |
Western Blot 分析[1]
细胞类型： 沙眼衣原体感染或假感染的 HeLa 细胞 测试浓度： 80 μM 孵育时间： 9 小时 实验结果： 高尔基体蛋白-84 和 GM130 的表达增加。 细胞活力检测[2] 细胞类型： 无支原体感染的 ZF4 细胞 测试浓度： 孵育时间： 暴露于 E. piscicida 前 30 分钟 实验结果： 抑制 ZF4 细胞的细胞毒性和焦亡形态。 Z-WEHD-FMK 的细胞活性在培养的巨噬细胞中进行评估，例如人单核细胞系 THP-1 或原代小鼠骨髓来源巨噬细胞 (BMDM)。为了将 THP-1 细胞分化为巨噬细胞样细胞，用佛波醇酯 (PMA，100 ng/mL) 处理 48-72 小时。然后，用脂多糖 (LPS，例如 100 ng/mL) 处理分化的巨噬细胞 4 小时，以诱导前体 IL-1β 和 NLRP3 炎症小体成分的表达。之后，洗涤细胞，并在无血清培养基中用不同浓度的 Z-WEHD-FMK（通常为 1-100 μM）处理 30-60 分钟。随后，用特定的炎症小体激活剂刺激细胞，例如用ATP（5 mM，30分钟）激活NLRP3炎症小体，用尼日利亚菌素（10 μM，1小时）激活NLRP3炎症小体，或用鞭毛蛋白激活NLRC4炎症小体。刺激后，收集细胞培养上清液，并通过ELISA定量检测IL-1β和IL-18的水平。收集细胞裂解液，通过Western blotting检测细胞内pro-caspase-1和caspase-1 p20/p10亚基以及pro-IL-1β和IL-1β的水平。抑制率以DMSO处理的对照组为基准计算。为了评估细胞焦亡，用能与DNA结合的荧光染料（例如碘化丙啶（PI））对细胞进行染色。PI通常对活细胞不通透，但可以进入细胞膜受损的细胞。通过流式细胞术或荧光显微镜分析PI阳性（死亡）细胞的百分比。为了评估组织蛋白酶B的活性，根据制造商的说明，在活细胞中使用特定的荧光底物（例如，Magic Red组织蛋白酶B）。 |
| 动物实验 |
Z-WEHD-FMK 在动物模型中用于体内抑制 caspase-1。常用的模型是小鼠 LPS 诱导的脓毒性休克模型。通常使用 6-8 周龄的雌性 C57BL/6 小鼠。Z-WEHD-FMK 溶解于合适的溶剂中，例如 10% DMSO 的 PBS 溶液或 0.5% 甲基纤维素溶液。体内抑制实验中，小鼠在接受致死剂量 LPS 攻击（例如，20-30 mg/kg，腹腔注射）前 30-60 分钟，腹腔注射 Z-WEHD-FMK，典型剂量为 10-30 mg/kg（体积 100-200 μL）。对照组仅注射溶剂。在 LPS 攻击后不同时间点（例如，1、3、6、24 小时），通过心脏穿刺或眼眶后静脉丛取血。分离血清后，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测IL-1β、IL-18和TNF-α的水平。实验结束时（例如24-48小时），记录生存率并绘制Kaplan-Meier生存曲线。对于特定模型，例如LPS刺激后的急性肺损伤模型，取出肺组织并收集支气管肺泡灌洗液（BALF）。计数BALF中炎症细胞（中性粒细胞、巨噬细胞）的数量，并测定其蛋白浓度作为血管渗漏的指标。对肺组织进行组织病理学检查（H&E染色）和细胞因子水平检测（采用ELISA或qRT-PCR）。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
Z-WEHD-FMK 是一种细胞渗透性肽，因此，如果不进行制剂化，其全身给药的药代动力学特性预计较差。它通常通过腹腔注射给药，以达到足够的局部暴露量。由于蛋白水解作用，它能迅速从循环中清除，半衰期很短（可能只有几分钟）。FMK 基团具有反应活性，可被血清蛋白淬灭，从而限制其生物利用度。由于其作用机制不可逆，其作用持续时间可能超过化合物在血浆中的存在时间。然而，通常不会报告该研究化合物的详细药代动力学参数（t1/2、Cmax、AUC）。在细胞培养实验中，它在培养基中可稳定存在数小时。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
Z-WEHD-FMK 是一种炎症性半胱天冬酶抑制剂，已被广泛用于研究炎症小体激活和细胞焦亡的机制。它并非用于治疗用途，也未获得 FDA 批准。在用于靶点抑制的浓度下，该化合物在体外和体内均被认为具有较低的急性毒性。然而，由于它是硫醇的共价修饰剂，因此应谨慎操作。在细胞培养中，通常使用浓度高达 100 μM 的 Z-WEHD-FMK，不会对细胞活力产生显著影响，但更高浓度可能会导致非特异性细胞毒性。在体内，小鼠在高达 30 mg/kg 的剂量下通常耐受性良好，未出现明显的不良反应。然而，更高剂量可能会因抑制其他半胱氨酸蛋白酶而导致脱靶效应。与所有化学探针一样，使用适当的对照品（例如非活性类似物 Z-WEHD-FMK，其中 FMK 被醇取代）来确认观察到的效果是由于 caspase 抑制而不是非特异性效应，这一点非常重要。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Z-WEHD-FMK 的选择性基于对肽序列 WEHD 的识别，该序列对应于 caspase-1 和 -5 的优先切割基序。Caspase-4 和 -5 是小鼠 caspase-11 的人类同源物，它们也参与非经典炎症小体通路。Z-WEHD-FMK 常用于抑制经典炎症小体通路（caspase-1/5），同时保持非经典通路（caspase-4/5）的活性。为了完全抑制所有炎症性 caspase，通常使用泛 caspase 抑制剂，例如 Z-VAD-FMK。该化合物比常用的 caspase-1 抑制剂 Ac-YVAD-CMK 更有效，且具有更广泛的特异性（包括组织蛋白酶 B）。它是自噬和炎症领域的标准工具。它通常以粉末形式供应，需溶于DMSO配制成储备液（例如，10-50 mM），并储存于-20℃。务必避免反复冻融。
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| 分子式 |
C37H42N7O10F
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|---|---|
| 分子量 |
763.76868
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| 精确质量 |
763.298
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| CAS号 |
210345-00-9
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| PubChem CID |
25108687
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| LogP |
4.205
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| tPSA |
253.73
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| 氢键供体(HBD)数目 |
6
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| 氢键受体(HBA)数目 |
12
|
| 可旋转键数目(RBC) |
23
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| 重原子数目 |
55
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| 分子复杂度/Complexity |
1330
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| 定义原子立体中心数目 |
4
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| SMILES |
COC(=O)CC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CC(=O)OC)C(=O)CF)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)NC(=O)OCC4=CC=CC=C4
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| InChi Key |
NLZNSSWGRVBWIX-KRCBVYEFSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C37H42FN7O10/c1-53-32(47)13-12-27(34(49)44-30(15-24-19-39-21-41-24)36(51)43-28(31(46)17-38)16-33(48)54-2)42-35(50)29(14-23-18-40-26-11-7-6-10-25(23)26)45-37(52)55-20-22-8-4-3-5-9-22/h3-11,18-19,21,27-30,40H,12-17,20H2,1-2H3,(H,39,41)(H,42,50)(H,43,51)(H,44,49)(H,45,52)/t27-,28-,29-,30-/m0/s1
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| 化学名 |
methyl (4S)-5-[[(2S)-1-[[(3S)-5-fluoro-1-methoxy-1,4-dioxopentan-3-yl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-[[(2S)-3-(1H-indol-3-yl)-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoyl]amino]-5-oxopentanoate
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~130.93 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.3093 mL | 6.5465 mL | 13.0929 mL | |
| 5 mM | 0.2619 mL | 1.3093 mL | 2.6186 mL | |
| 10 mM | 0.1309 mL | 0.6546 mL | 1.3093 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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