ZD7288   中文名称: ZD 7288

HCN/hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel

ZD7288充当激活环标记门控 (HCN) 通道阻断剂，包括瞬态和超瞬态。 ZD7288以浓度抑制方式抑制谷胱甘肽释放。经过 1、5 和 50 μM ZD7288 24 小时缓冲期后，细胞外液的谷氨酸水平分别降至 69.0±2.8%、31.4±2.0% 和 4.4±0.3%（与对照组相比，P<0.01）。 DMEM/F12组比率[100.2±4.2%]）。添加 ZD7288 (25) 个氨基酸 20 分钟后，50 μM 谷氨酸产生的 [Ca2+]i 分别增加至谷氨酸的 59.2±2.7%、41.4±2.3% 和 21.0±1.4%（P <0.01，与 50 μM 谷氨酸组比较）[1]。

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接下来，我们研究了ZD7288对培养的海马神经元谷氨酸释放的影响。ZD7288以浓度依赖的方式抑制谷氨酸的释放（图3B）。用1、5和50µM ZD7288孵育24小时后，细胞外液中的谷氨酸含量分别降至69.0±2.8%、31.4±2.0%和4.4±0.3%（与DMEM/F12组[100.2±4.2%]相比，P<0.01）。
据报道，通过提高cAMP水平可以增强Ih通道的活性。为了证实ZD7288对谷氨酸释放的抑制作用是依赖于Ih通道的，我们使用毛喉素和8-Br-cAMP探索了cAMP水平的药理学升高对谷氨酸分泌的影响。用5和50µM 8-Br-cAMP孵育后，细胞外液中的谷氨酸含量分别增加到136.1±7.4%和188.1±13.8%（与DMEM/F12组相比，P<0.01）。此外，与毛喉素（1和5µM）一起孵育后，细胞外谷氨酸含量分别增加到177.6±6.8%和308.7±6.9%（与DMEM/F12组相比，P<0.01）。

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ZD7288对谷氨酸诱导的大鼠海马神经元[Ca2+]i升高的影响[1]
细胞内钙在递质释放中起着重要作用。因此，我们还测量了ZD7288对细胞内钙水平的影响。在培养的海马神经元中，谷氨酸（50µM）引起[Ca2+]i显著增加，比基线增加78.0±3.3%。与ZD7288（25、50或100µM）孵育20分钟后，50µM谷氨酸诱导的[Ca2+]i升高分别减弱至59.2±2.7%、41.4±2.3%和21.0±1.4%（与50µM的谷氨酸组相比，P<0.01；图4）。ZD7288以浓度依赖的方式减弱谷氨酸诱导的[Ca2+]i升高。我们还探讨了8-Br-cAMP对谷氨酸诱导的[Ca2+]i升高的影响。8-Br-cAMP促进谷氨酸诱导的[Ca2+]i升高（图4）。与5和50µM 8-Br-cAMP孵育5分钟后，谷氨酸诱导的[Ca2+]i分别增加了101.3±3.1%和125.4±3.4%（与50µM谷氨酸组相比，P<0.01）。与ZD7288孵育20分钟后，50µM 8-Br-cAMP使谷氨酸诱导的[Ca2+]i升高了86.2±3.3%（与50µM 8-Br-cAMP组相比，P<0.01）。用50µM ZD7288处理几乎完全逆转了[Ca2+]i中8-Br-cAMP的促进作用。

在高频刺激前 5 分钟应用 ZD72880.1 μM 时，场兴奋性突触后电位 (fEPSP) 的幅度显着降低。这种抑制作用在记录期间持续存在。高频刺激 30 分钟后，应用 0.1 μM ZD7288 几乎逆转了已建立的长时程增强 (LTP)。高频刺激前 5 分钟，与生理盐水组相比，应用 ZD7288 (0.1 μM) 导致谷氨酸含量降低 74.9±8.0% (P<0.05)。此外，高频刺激30分钟后，应用0.1 μM ZD7288可显着降低谷氨酸浓度，与生理盐水组相比达到77.0%±9.4%（P<0.05）[1]。

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ZD7288对大鼠执行通路CA3突触LTP诱导的影响[1]
我们之前的体内研究表明，ZD7288以浓度依赖的方式抑制了穿孔通路CA3突触的基础突触传递（Zheng等人，2006）。在这里，我们已经证明ZD7288和CsCl阻断了LTP在执行通路CA3突触的诱导。在90分钟的记录期内，高频刺激导致接受生理盐水的大鼠fEPSP振幅显著增加，fEPSP的平均幅度为基线值的281.8±6.6%（P<0.05；图1）。通过高频刺激穿孔通路纤维，在穿孔通路-CA3突触中诱导LTP。然而，在高频刺激前5分钟应用0.1µM的ZD7288显著降低了fEPSP的振幅，并且这种抑制作用在整个记录期间都保持不变。高频刺激后30、60和90分钟，fEPSP振幅分别为基线的92.4±10.1%、85.6±12.0%和85.2±11.8%（与生理盐水组相比，P<0.01）。ZD7288显著抑制了LTP的诱导。

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为了证实ZD7288诱导的LTP减少是由于其阻断Ih通道的作用，我们使用了另一种已知的Ih阻断剂Cs+，通常用作Ih的诊断工具（Wickenden等人，2009），以测试其对LTP诱导的影响。Cs+（1 mM）显著抑制了LTP在执行通路CA3合成酶的诱导。在高频刺激前5分钟施加CsCl（1 mM）后，fEPSP振幅在每个时间点都显著降低。高频刺激后30、60和90分钟，fEPSP振幅分别为基线的41.6±12.8%、75.6±11.6%和78.1±5.5%（与生理盐水组相比，P<0.01）。Cs+对LTP的抑制作用随时间减弱。我们的结果表明，Ih通道参与了执行通路-CA3突触LTP的诱导。

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ZD7288对大鼠执行通路CA3突触LTP维持的影响[1]
为了进一步研究Ih通道在LTP维持中的作用，研究了ZD7288对先前建立的LTP的影响。高频刺激30分钟后应用0.1µM ZD7288几乎完全逆转了已建立的LTP（图2）。高频刺激后60分钟和90分钟，振幅分别为基线的92.6±6.4%和88.9±7.6%（与生理盐水组相比，P<0.01）。高频刺激30分钟后应用1 mM CsCl产生了类似的抑制作用。高频刺激后60分钟和90分钟，fEPSP振幅分别为基线的62.6±7.6%和84.8±18.8%（与生理盐水组相比，P<0.01）。此外，CsCl的抑制作用随时间而降低。这些结果表明，ZD7288和Cs+阻断了大鼠执行通路-CA3突触的LTP维持。

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ZD7288对海马谷氨酸释放的影响[1]
在一些神经元中，突触前Ih通道通过控制递质释放来调节突触传递。谷氨酸在执行通路CA3突触的LTP形成中起着重要作用，其中LTP诱导依赖于N-甲基-D-天冬氨酸受体（McMahon和Barrionuevo，2002）。我们研究了ZD7288对海马组织谷氨酸释放的影响。高频刺激的应用导致接受生理盐水的大鼠谷氨酸水平略有升高（图3A）。谷氨酸水平增加到111.1±9.6%（与接受生理盐水和无高频刺激的对照组大鼠相比，P>0.05[138.4±34.3µmol/g蛋白质，标准化为100±8.8%]）。在高频刺激前5分钟应用ZD7288（0.1µM）后，谷氨酸含量降至74.9±8.0%（与生理盐水组相比，P<0.05）。在高频刺激前施加CsCl（1mM）产生了与ZD7288相同的效果；谷氨酸含量降至71.9±10.0%（与生理盐水组相比，P<0.05）。此外，在高频刺激30分钟后应用0.1µM ZD7288，谷氨酸含量显著降低至77.0%±9.4%（与生理盐水组相比，P<0.05）。高频刺激后用1mM CsCl处理，谷氨酸含量降至82.5%±9.1%。然而，与生理盐水组相比，没有显著差异（P>0.05）。

神经元培养[1]
从新生（1-2天大）Sprague-Dawley大鼠中获得原代海马神经元。将大鼠斩首，迅速取出大脑，放入冰冷的磷酸盐缓冲盐水中。将海马体解剖出来，在37°C下用0.125%胰蛋白酶消化20分钟，然后进行机械分离和1000×g离心8分钟。将细胞重新悬浮并铺在96孔板（用于氨基酸分析）或聚-D-赖氨酸涂层盖玻片（用于测量内部钙浓度[Ca2+]i）上。神经元在含有10%胎牛血清、100 U/L青霉素、100 mg/L链霉素和0.5 mM谷氨酰胺的Dulbecco改良Eagle培养基/Ham营养混合物F12中培养，并在5%CO2培养箱中保持在37°C。在72小时时向培养基中加入10mg/L阿拉伯糖基胞嘧啶以减少非神经元细胞的数量。每两天更换一半的培养基。实验在第8-11天进行。将细胞与ZD7288（1、5或50µM）、8-溴腺苷环腺苷酸（8-Br-cAMP，5或50μM）或毛喉素（1或5µM）一起孵育24小时，收集培养基进行谷氨酸测定。

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谷氨酸测量[1]
LTP记录后，小心地将同侧海马体与大脑分离，用冰冷的生理盐水清洗，并在-80°C下冷冻直至处理。将解冻的组织在0.4M高氯酸中均质化。取等分试样进行蛋白质测定后，将匀浆在4°C下以10000×g离心15分钟。然后用2M KHCO3中和匀浆，并在3000×g下离心5分钟。上清液在-80°C下冷冻进行分析。使用考马斯亮蓝测量蛋白质水平。药物孵育24小时后收集神经元培养基，在3000×g下离心5分钟。上清液储存在-80°C下进行分析。如前所述（McMahon和Barrionuevo，2002），在用O-邻苯二甲醛 进行自动柱前衍生化后，使用高效液相色谱法（Kromasil ODS2 C18柱）进行谷氨酸分析，并使用分光光度计进行荧光检测（激发波长330 nm，发射波长420 nm）。根据每个峰面积，使用外标法定量谷氨酸的浓度。数据根据从输注生理盐水的海马组织和用DMEM/F12处理的神经元中获得的基线谷氨酸值进行归一化。每个样品中的谷氨酸水平表示为样品中谷氨酸与基线值的比率。

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[Ca2+]i[1]的测量
[Ca2+]i测量是根据我们之前在神经元中的研究进行的（Huang等人，2009）。将培养的海马神经元与1µM Fura-2乙酰氧基羟甲基酯在37°C下孵育30分钟，用人工脑脊液（含有140 mM NaCl、5 mM KCl、2 mM CaCl2、1 mM MgCl2、10 mM葡萄糖和10 mM羟乙基哌嗪乙磺酸，pH 7.3）洗涤三次，然后在室温下在黑暗中孵育30 min。通过Ratio Vision数字荧光显微镜系统观察到Fura-2荧光。荧光信号由340和380nm激发波长诱发，并由TILLvisION 4.0软件在510nm处收集。340:380 nm荧光比用于表示[Ca2+]i。峰值钙变化表示为从基线增加的百分比。在用50µM谷氨酸刺激之前，神经元在ZD7288（25、50或100µM）或8-Br-cAMP（5或50µM）中孵育15分钟。所有实验重复三次，在4-5个培养皿中使用不同批次的细胞。

体内电生理记录[1]
动物经腹腔注射氨基甲酸乙酯（1.2 g/kg）麻醉后，固定于立体定位仪上。实验过程中，使用恒温水循环系统将体温维持在37 ± 0.5°C。以颅骨标志点前囟（bregma）为立体定位参考点。在颅骨上开小孔，将刺激电极（双极不锈钢，直径140 µm）置于穿通通路（前后方向6.8–7.0 mm，头外侧方向4.3–4.5 mm，深度3.0–4.0 mm），并将记录电极（单极不锈钢，直径140 µm）置于同侧海马CA3区（前后方向3.3–3.5 mm，头外侧方向3.3–3.5 mm）。记录电极的深度根据最大反应确定。使用带有隔离单元的可编程电刺激器，每 2 秒施加一次测试刺激（0.5 Hz，持续时间 0.15 ms）。场兴奋性突触后电位 (fEPSP) 由 SMUP-PC 生物信号处理系统采集、放大、监测和分析。基线 fEPSP 记录为最大反应的 50-60%。随后，通过一系列高频刺激（4 组，每组 50 个脉冲，频率 100 Hz，持续时间 150 µs，组间间隔 20 秒）诱导长时程增强 (LTP)。在高频刺激后 90 分钟记录 fEPSP。基线值通过计算高频刺激前 30 分钟内 5 个不同时间点的 EPSP 平均振幅得出。fEPSP 绝对振幅与基线值的比值用于描述振幅水平。
对于海马生理盐水或药物给药，将套管小心地插入CA3区，导入管与记录电极平行固定，其末端高于电极尖端0.1–0.2 mm。
为了测试阻滞剂对LTP诱导的影响，我们在高频刺激前5分钟施加0.1 µM ZD7288或单价阳离子铯(Cs+)（一种已知的非特异性Ih拮抗剂，5 µM CsCl）。为了测试阻滞剂对LTP维持的影响，我们在高频刺激后30分钟使用输注/抽取泵缓慢给予ZD7288/Cs+。

[1]. ZD7288, a selective hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel blocker, inhibits hippocampal synaptic plasticity. Neural Regen Res. 2016 May;11(5):779-86.

4-(N-乙基-N-苯基氨基)-1,2-二甲基-6-(甲氨基)嘧啶氯化物是一种有机分子实体。

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选择性超极化激活环核苷酸门控 (HCN) 通道阻滞剂 4-(N-乙基-N-苯基氨基)-1,2-二甲基-6-(甲氨基)嘧啶氯化物 (ZD7288) 可阻断大鼠海马穿通通路-CA3 区长时程增强 (LTP) 的诱导。为了探究 ZD7288 的作用机制，我们记录了雄性 Sprague-Dawley 大鼠穿通通路-CA3 区突触的兴奋性突触后电位 (EPSP)。我们使用高效液相色谱法测定了海马和培养的海马神经元中的谷氨酸含量，并使用 Fura-2 测定了细胞内 Ca²⁺ 浓度 [Ca²⁺]i。 ZD7288抑制了长时程增强作用的诱导和维持，非特异性HCN通道阻滞剂铯也具有类似的作用。ZD7288还降低了海马组织和培养的海马神经元中谷氨酸的释放。此外，ZD7288以浓度依赖的方式减弱了谷氨酸诱导的[Ca(2+)]i升高，并逆转了8-Br-cAMP介导的谷氨酸诱导的[Ca(2+)]i升高的促进作用。我们的结果表明，ZD7288抑制大鼠海马神经元中谷氨酸的释放及其导致的[Ca(2+)]i升高，从而抑制海马突触可塑性。[1] Ih通道在调节神经元的兴奋性和节律性活动中发挥着重要作用。Ih通道在突触调节和可塑性中也至关重要。在著名的海马环路三突触模型中，ZD7288通过抑制突触后谷氨酸受体来抑制穿通通路-颗粒细胞突触的传递（Chen，2004）。ZD7288诱导的苔藓纤维长时程增强（LTP）减弱是由于其抑制了神经递质的释放（Mellor等，2002）。我们之前的研究表明，Ih通道也通过抑制N-甲基-D-天冬氨酸受体功能参与Schaffer-CA1通路LTP（He等，2010）。在此，我们研究了Ih在皮层直接投射到海马的突触可塑性中的作用。我们重点关注穿通通路-CA3突触，它是皮层投射到海马CA3区的主要通路，介导记忆提取。与之前的研究一致，这些研究表明穿通通路输入可能能够驱动 CA3 锥体细胞放电（Urban 等人，1998；McMahon 和 Barrionuevo，2002），我们的数据表明，穿通通路纤维刺激可诱导 LTP，平均 fEPSP 幅度在 1 小时以上维持在基线的 282%。此外，ZD7288 处理抑制了 LTP 的诱导，并完全逆转了已建立的 LTP，且抑制作用至少持续 1 小时。[1]
除了阻断 Ih 通道（这可能导致突触后谷氨酸受体的非特异性抑制）之外，ZD7288 还通过抑制穿通通路-颗粒细胞突触处突触后 α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸 (AMPA) 和 N-甲基-D-天冬氨酸 (NMDA) 受体介导的反应来抑制 LTP（Chen，2004）。McMahon 和 Barrionuevo (2002) 的研究表明，穿通通路-CA3 LTP 依赖于 NMDA 受体。为了探究 ZD7288 诱导的突触抑制是否是 Ih 通道阻断的特异性结果，我们研究了其作用是否与另一种 Ih 通道阻断剂氯化铯 (CsCl) 相似。事实上，1 mM CsCl 产生的 LTP 抑制作用与 ZD7288 相当，在高频刺激前应用可阻断 LTP 的诱导，在高频刺激后应用则可逆转 LTP 的诱导。这些数据表明，当 Ih 通道被阻断时，LTP 的诱导和维持均受到抑制，提示 Ih 通道可能直接参与 LTP 的诱导和维持过程。然而，CsCl 的抑制作用随时间逐渐减弱。由于 Cs+ 是一种非选择性 Ih 通道阻断剂，钾通道的抑制可能导致了这种抑制作用的减弱。[1]
Ih 通道广泛分布于神经系统中，并在哺乳动物突触前末端已被鉴定（Southan 等，2000；Cuttle 等，2001）。这些通道由 HCN1-HCN4 亚基组成。 HCN1 和 HCN2 位于突触前，定位于 CA3 锥体细胞层（Notomi 和 Shigemoto，2004）。许多先前的研究表明，功能性突触前 Ih 通道通过控制神经递质的释放，在突触传递和长期可塑性中发挥重要作用（Beaumont 和 Zucker，2000；Mellor 等，2002；Huang 和 Hsu，2003）。为了探究 ZD7288 是否通过突触前机制抑制穿通通路-CA3 通路的突触可塑性，我们检测了 ZD7288 对谷氨酸释放的影响。我们发现，在高频刺激前后，ZD7288 处理组的海马细胞谷氨酸含量低于生理盐水组，并且 CsCl（1 mM）也能抑制谷氨酸的释放。高频刺激后谷氨酸水平的升高表明刺激激活了谷氨酸能神经元。然而，谷氨酸的升高与对照组相比并无显著差异。这可能是因为本研究使用了整个海马体来检测谷氨酸含量。因此，我们进一步利用培养的海马神经元研究了ZD7288对谷氨酸释放的影响。正如预期的那样，ZD7288显著抑制了培养细胞中谷氨酸的释放。Ih通道的激活不仅受超极化的影响，还受细胞内cAMP水平的调控。cAMP通过直接与通道结合或间接激活蛋白激酶A来增强Ih通道的活性（Lüthi和McCormick，1998；Abi-Gerges等，2000；Mellor等，2002；Genlain等，2007）。细胞内 cAMP 水平升高和蛋白激酶 A 的激活是 LTP 生成所必需的（Pape，1996；Mellor 等，2002）。ZD7288 通过阻断 Ih 通道抑制 cAMP 触发的微型兴奋性突触后电流频率的增加（Genlain 等，2007）。本研究中，我们使用 cAMP 类似物 8-Br-cAMP 和腺苷酸环化酶激活剂福斯克林来提高 cAMP 水平。我们发现，8-Br-cAMP 和福斯克林均能增加培养的海马神经元中谷氨酸的释放。这些结果表明 Ih 通道参与谷氨酸的释放。ZD7288 通过抑制谷氨酸释放和阻断 Ih 通道来抑制 LTP 的形成。[1]
目前提出了两种机制来解释 Ih 通道对谷氨酸释放的调节作用。一种机制与Ca2+诱导的Ca2+从胞内钙库释放有关，提示Ih通道的激活伴随Ca2+内流触发了调节过程（Yu et al., 2004）。另一种提出的机制是Ih通道以钙非依赖的方式直接与释放机制偶联（Beaumont and Zucker, 2000）。在本研究中，为了检验ZD7288诱导的谷氨酸释放抑制是否与细胞内钙相关，我们使用谷氨酸作为激活剂来诱导[Ca2+]i升高。ZD7288以浓度依赖的方式抑制谷氨酸诱导的[Ca2+]i升高，并逆转8-Br-cAMP诱导的[Ca2+]i升高。我们的数据表明，ZD7288对谷氨酸释放的抑制作用源于其对[Ca2+]i的减弱。 Ih通道的激活可能通过去极化增强Ca2+流入突触前末端；电压依赖性钙通道的开放反过来又会导致谷氨酸释放的持续增强。需要更多研究来探索这一机制的细节。[1]
Ih通道与多种疾病相关，包括癫痫、血管性痴呆和周围神经痛（Li et al., 2010; Takasu et al., 2010; DiFrancesco et al., 2011）。缺血是神经系统中最常见的损伤因素之一。谷氨酸的过度释放和细胞内Ca2+的超载在缺血性神经元死亡中起着关键作用（Mori et al., 2004; Zhao et al., 2006）。神经元过度兴奋会增强钙离子内流，进而触发兴奋性神经递质（尤其是谷氨酸）的释放。缺血期间谷氨酸的过度释放会导致额外的Ca2+内流。Ih通道参与缺血性损伤。我们之前的研究表明，在慢性不完全性全脑缺血中，HCN1 mRNA和蛋白表达均降低（Li et al., 2010）。我们推测，Ih通道阻滞剂ZD7288能够抑制谷氨酸的释放以及谷氨酸诱导的[Ca2+]i升高，这可能有助于其在脑缺血条件下发挥神经保护作用。[1]
总之，Ih通道阻滞剂ZD7288能够显著抑制穿通通路-CA3突触的长时程增强（LTP）。这种抑制作用可能是由于减弱了大鼠海马神经元中谷氨酸的释放以及谷氨酸诱导的[Ca2+]i升高所致。

C15H21CLN4

292.807041883469

292.145

C, 70.28; H, 7.86; N, 21.86

133059-99-1

123983

White to off-white solid powder

359.9ºC at 760 mmHg

171.4ºC

2.31E-05mmHg at 25°C

32.04

1

3

3

20

402

0

Cl.N(C1C=CC=CC=1)(CC)C1=C/C(=N\C)/N(C)C(C)=N1

DUWKUHWHTPRMAP-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C15H20N4.ClH/c1-5-19(13-9-7-6-8-10-13)15-11-14(16-3)18(4)12(2)17-15;/h6-11H,5H2,1-4H3;1H

N-ethyl-1,2-dimethyl-6-methylimino-N-phenylpyrimidin-4-amine;hydrochloride

ZD 7288; ZD-7288; 133059-99-1; 4-Pyrimidinamine, N-ethyl-1,6-dihydro-1,2-dimethyl-6-(methylimino)-N-phenyl-, hydrochloride (1:1); 4-(N-Ethyl-N-phenylamino)-1,2-dimethyl-6-(methylamino)pyrimidinium chloride; Zeneca ZD7288; N-ethyl-1,2-dimethyl-6-methylimino-N-phenylpyrimidin-4-amine;hydrochloride; 4-Pyrimidinamine, N-ethyl-1,6-dihydro-1,2-dimethyl-6-(methylimino)-N-phenyl-, monohydrochloride; Ici-D2788; ZD7288

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~50 mg/mL (~170.76 mM)
H2O : ≥ 50 mg/mL (~170.76 mM)

配方 1 中的溶解度: 100 mg/mL (341.52 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。