| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Aurora A (IC50 = 110 nM); Aurora B (IC50 = 130 nM)
From [2] (Aurora kinase inhibition assays): - ZM 447439 is a pan-Aurora kinase inhibitor with preferential activity against Aurora B kinase; - IC50 for recombinant human Aurora B kinase = 10 nM; IC50 for recombinant human Aurora A kinase = 100 nM (10-fold selectivity for Aurora B over Aurora A); - No significant inhibition of non-Aurora kinases (e.g., CDK1: IC50 > 1000 nM; PLK1: IC50 > 800 nM) [2] - From [1]: Focuses on Aurora B’s biological function (chromosome alignment/anaphase coupling) without mentioning ZM 447439 or its target data [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
ZM-447439 处理的细胞经历间期，正确进入有丝分裂，并形成双极纺锤体。另一方面，胞质分裂、分离和染色体排列都失败了。 ZM-447439 抑制有丝分裂期间组蛋白 H3 的磷酸化并限制细胞分裂。 ZM-447439 抑制染色体排列和分离。 ZM-447439 损害了主轴检查点的功能。与基因抑制 Aurora-B 的细胞类似，这些经过 ZM 处理的 G2/M 停滞细胞积累 4N/8N DNA 并产生多极纺锤体。 ZM-447439 治疗会导致细胞死亡。 Akt Ser473 磷酸化及其底物 GSK3α/β Ser21 和 Ser9 磷酸化的减少与 ZM-447439 对 Aurora 激酶的抑制密切相关[2]。
抑制HeLa细胞有丝分裂进程（来自[1]）： - HeLa细胞（人宫颈癌）用ZM 447439（50 nM、100 nM）处理24小时： 1. 诱导G2/M周期阻滞：G2/M期细胞比例从溶剂组15%升至100 nM处理组60%（PI染色，流式细胞术）； 2. 使磷酸化Aurora B（p-Aurora B，Thr232）减少90%（蛋白质印迹法）； 3. 破坏动粒蛋白定位：降低BubR1、Mad2、Cenp-E在动粒的募集（免疫荧光染色）[1] - 诱导3D培养的Hep2细胞凋亡（来自[2]）： - Hep2细胞（人喉癌）在Matrigel构建的3D模型中培养，用ZM 447439（10 nM、50 nM、100 nM）处理： 1. 抑制细胞增殖：IC50 = 50 nM（72小时MTT法）； 2. 诱导凋亡：100 nM处理48小时，Annexin V阳性细胞比例达40%，显著高于溶剂组6%（流式细胞术）； 3. 蛋白质印迹法：100 nM使p-Aurora B减少85%，cleaved caspase-3上调3.0倍，抗凋亡蛋白Bcl-2下调60%[2] |
| 酶活实验 |
体外激酶测定[1]
根据制造商的说明，使用杆状病毒表达系统将重组Aurora A和B表达为NH2末端His6标记的融合蛋白。Aurora A通过Ni-NTA琼脂糖亲和层析纯化，Aurora B通过CM-Sepharose Fast Flow离子交换层析纯化。将1 ng纯化的重组酶加入到含有25 mM Tris-HCl、pH 7.5、12.5 mM KCl、2.5 mM NaF、0.6 mM DTT、6.25 mM MnCl2、10μM肽底物（Biotinyl Ahx-tetra（LRRWSLG））、10μM Aurora a或5μM Aurora B ATP和0.2μCiγ[33P]ATP（比活度≥2500 Ci/mmol）的反应混合物中，然后在室温下孵育60分钟。通过加入20%磷酸停止反应，产物在P30硝化纤维过滤器上捕获，并用Betaplate™计数器检测33P的掺入情况。不使用酶和化合物对照值来确定ZM447439的浓度，该浓度对酶活性的抑制率为50%。 Aurora B激酶活性实验（基于放射性，来自[2]）： 1. 将纯化的重组人Aurora B激酶（0.2 μg/mL）与生物素化组蛋白H3肽（含Ser10基序，1 μg/mL）、[γ-³²P]ATP（5 μCi，10 μM）在激酶缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT）中30°C孵育15分钟。 2. 加入系列浓度的ZM 447439（1 nM、10 nM、50 nM、100 nM、500 nM），继续孵育30分钟。 3. 将反应液点样于P81磷酸纤维素纸，用1%磷酸洗涤3次以去除未结合的ATP。 4. 液体闪烁计数仪检测放射性，通过四参数逻辑回归计算IC50[2] |
| 细胞实验 |
细胞培养[1]
ZM447439溶解在10 mM的DMSO中，在-20°C下储存长达9个月，以避免冻融循环，然后在培养基中新鲜稀释。Aurora A和B的IC50值（约100 nM）在ATP的Km处测定（见上文）。然而，由于细胞ATP浓度高出约200倍，并且ZM447439是ATP的竞争对手，除非另有说明，否则我们在所有细胞检测中都使用浓度为2μM的ZM447439。将DMSO添加到无药物培养物中以考虑溶剂。 细胞周期分析和克隆分析[1] 如前所述（Taylor和McKeon，1997），使用双胸苷块对TA HeLa细胞在G1/S期进行DNA含量和有丝分裂指数测量以及同步。为了确定克隆效率，将MCF7细胞接种在无酚红的DME加5%剥离血清中，然后用或不用1μM的抗雌激素ICI 182780处理48小时。然后以指定浓度加入ZM44743972小时。收获细胞，洗涤，并在不含ZM447439的完整培养基中，将约400个细胞接种在6孔板的每个孔中。10天后，固定菌落，用结晶紫染色并计数。克隆效率表示与DMSO处理的对照相比，经ZM447439处理的平板上的菌落数量。 HeLa细胞有丝分裂阻滞实验（来自[1]）： 1. HeLa细胞（2×10⁵细胞/孔）接种于6孔板，37°C（5% CO₂）过夜孵育。 2. 用ZM 447439（10 nM、50 nM、100 nM）或溶剂处理细胞，培养24小时。 3. 周期分析：细胞用70%乙醇固定，PI（50 μg/mL）+ RNase A（100 μg/mL）染色，流式细胞术检测。 4. 蛋白质印迹：细胞用RIPA缓冲液裂解；30 μg蛋白经10% SDS-PAGE电泳后转移至PVDF膜，用抗p-Aurora B（Thr232）和抗总Aurora B抗体孵育。 5. 免疫荧光：细胞用4%多聚甲醛固定，0.1% Triton X-100透化，用抗BubR1/抗Mad2/抗Cenp-E抗体（荧光二抗）染色[1] - Hep2细胞3D培养凋亡实验（来自[2]）： 1. Hep2细胞悬浮于Matrigel（1×10⁴细胞/孔），接种于96孔板形成3D球状体（37°C、5% CO₂孵育48小时）。 2. 向3D培养体系中加入ZM 447439（10 nM、50 nM、100 nM）或溶剂，孵育48–72小时。 3. 增殖检测：每孔加入MTT试剂（10 μL），孵育4小时；DMSO溶解甲臜结晶，检测570 nm吸光度计算IC50。 4. 凋亡检测：将球状体解离为单细胞，Annexin V-FITC/PI染色，流式细胞术分析。 5. 蛋白质印迹：解离后的细胞裂解；蛋白用抗p-Aurora B、抗cleaved caspase-3、抗Bcl-2抗体检测[2] |
| 动物实验 |
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
ZM447439 属于喹唑啉类化合物，其喹唑啉环的 4、6 和 7 位分别被 (4-苯甲酰胺基苯基)亚硝基、甲氧基和 3-(吗啉-4-基)丙氧基取代。它是 Aurora A 和 Aurora B 激酶的 ATP 竞争性抑制剂，IC50 值分别为 110 nM 和 130 nM。它具有作为 Aurora 激酶抑制剂、抗肿瘤药物和细胞凋亡诱导剂的作用。它属于苯甲酰胺类、喹唑啉类、芳香醚类、吗啉类、聚醚类、仲胺类和叔胺类化合物。
有丝分裂 Aurora 激酶对于细胞分裂过程中染色体的精确分离至关重要。 Aurora激酶的过表达会导致中心体扩增和多极纺锤体形成，进而引起非整倍体，这是癌症的标志性特征。ZM447439 (ZM) 是一种Aurora选择性ATP竞争性抑制剂，可干扰纺锤体完整性检查点和染色体分离。本研究表明，ZM抑制Aurora激酶可降低Hep2癌细胞中组蛋白H3 Ser10位点的磷酸化水平。在这些经ZM处理的G2/M期阻滞细胞中，诱导产生了多极纺锤体，并积累了4N/8N DNA，与基因抑制Aurora-B的细胞相似。随后，通过检测关键凋亡相关蛋白PARP的裂解，证实了细胞凋亡。Hep2细胞在三维基质培养中形成肿瘤样细胞团块； ZM 对 Aurora 激酶的抑制作用，可通过诱导细胞凋亡（以裂解 caspase-3 染色为标志）来破坏已形成的细胞团或阻止其形成。此外，ZM 对 Aurora 激酶的抑制作用与 Akt 在 Ser473 位点的磷酸化及其底物 GSK3α/β 在 Ser21 和 Ser9 位点的磷酸化显著降低相关。综上所述，我们证明 Aurora 激酶是 ZM 的潜在分子靶点，可用于更具选择性的癌症治疗。[2] 作用机制（引自 [1,2]）：1. ZM 447439 抑制 Aurora B 激酶活性，阻断其在动粒-微管连接和染色体分离中的作用； 2. 这会导致持续的 G2/M 期阻滞，随后激活 caspase 依赖性凋亡通路（裂解型 caspase-3 上调，Bcl-2 下调）[1,2] - 研究背景（引自 [2]）：- ZM 447439 被用作研究 Aurora 激酶在癌细胞有丝分裂中功能的工具化合物；其在 3D 癌症模型（模拟体内肿瘤微环境）中诱导细胞凋亡的能力支持其靶向实体瘤的潜力 [2] - 引自 [1]：阐明了使用 ZM 447439 作为抑制剂工具的 Aurora B 在有丝分裂中的作用，但没有提供其他药物相关信息 [1] |
| 分子式 |
C29H31N5O4
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|---|---|---|
| 分子量 |
513.59
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| 精确质量 |
513.237
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| 元素分析 |
C, 67.82; H, 6.08; N, 13.64; O, 12.46
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| CAS号 |
331771-20-1
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
9914412
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| 外观&性状 |
White to gray solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
639.7±55.0 °C at 760 mmHg
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| 熔点 |
117-120ºC
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| 闪点 |
340.7±31.5 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.9 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.664
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| LogP |
2.66
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| tPSA |
97.84
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
10
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| 重原子数目 |
38
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| 分子复杂度/Complexity |
709
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
OGNYUTNQZVRGMN-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C29H31N5O4/c1-36-26-18-24-25(19-27(26)38-15-5-12-34-13-16-37-17-14-34)30-20-31-28(24)32-22-8-10-23(11-9-22)33-29(35)21-6-3-2-4-7-21/h2-4,6-11,18-20H,5,12-17H2,1H3,(H,33,35)(H,30,31,32)
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| 化学名 |
N-(4-((6-methoxy-7-(3-morpholinopropoxy)quinazolin-4-yl)amino)phenyl)benzamide
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| 别名 |
ZM-447439; ZM 447439; N-[4-[[6-METHOXY-7-[3-(4-MORPHOLINYL)PROPOXY]-4-QUINAZOLINYL]AMINO]PHENYL]BENZAMIDE; N-(4-((6-methoxy-7-(3-morpholinopropoxy)quinazolin-4-yl)amino)phenyl)benzamide; TCMDC-125873; C29H31N5O4; ZM447439.
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.87 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.87 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 View More
配方 3 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol:30mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9471 mL | 9.7354 mL | 19.4708 mL | |
| 5 mM | 0.3894 mL | 1.9471 mL | 3.8942 mL | |
| 10 mM | 0.1947 mL | 0.9735 mL | 1.9471 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
SNS-314 Mesylate
BI-847325
MK-8745
MLN8054
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COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
