| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| 2g |
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| 5g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Topoisomerase I
DNA topoisomerase I. No IC50, Ki, EC50, or DC50 values are reported in the specified literature. [2] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
(±)-10-羟基喜树碱（10-OH-喜树碱）是一种拓扑异构酶I抑制剂[1]。(±)-10-羟基喜树碱（10-HCPT，5-20 nM）能以剂量依赖的方式显著抑制Colo 205细胞的增殖。(±)-10-羟基喜树碱（5-20 nM）通过将Colo 205细胞阻滞在细胞周期的G2期，经由caspase-3依赖性机制启动细胞凋亡[2]。将人膀胱癌细胞系（T24）暴露于-10-羟基喜树碱（HPT，0.01–10 μg/mL）中，可导致细胞核碎裂、染色体浓缩和细胞萎缩[3]。
(±)-10-羟基喜树碱在相对较低的浓度（5-20 nM）下，以剂量和时间依赖的方式显著抑制人结肠癌Colo 205细胞的增殖。在20 nM浓度下，120小时的细胞数量与24小时的细胞数量相似，表明其具有很强的生长抑制作用。 [2] 流式细胞术分析（碘化丙啶染色）显示，(±)-10-羟基喜树碱处理48小时后，G2/M期细胞比例和亚G0/G1期（凋亡）细胞比例均呈剂量依赖性增加，而G0/G1期细胞比例相应减少。[2] Western blot分析显示，(±)-10-羟基喜树碱剂量依赖性地增加p21、细胞周期蛋白E、CDK2、细胞周期蛋白B1和cdc25c的表达，同时降低p27的表达。此外，还检测到了p53的表达。PCNA水平未发生改变。尽管细胞周期蛋白B1和cdc25c的表达增加，但p21的增加仍导致G2/M期阻滞。 [2] DNA片段化分析表明，(±)-10-羟基喜树碱处理48小时后，以浓度依赖的方式诱导DNA梯状条带形成，证实了细胞凋亡。[2] 使用DEVD-pNA底物进行的caspase活性分析表明，(±)-10-羟基喜树碱以剂量依赖的方式诱导caspase-3活化，而IETD-pNA（caspase-8）和LEHD-pNA（caspase-9）底物仅显示出较低的活化，表明细胞凋亡是通过caspase-3依赖性途径进行的。[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
(±)-10-羟基喜树碱（10-HCPT，2.5-7.5 mg/kg/2 天，口服）可显著抑制小鼠异种移植瘤的生长。(±)-10-羟基喜树碱（1-7.5 mg/kg，口服，每 2 或 4 天一次）似乎不会对裸鼠造成急性毒性[2]。此外，在小鼠异种移植瘤中，以 2.5-7.5 mg/kg/2 天的剂量口服 10-HCPT 后，观察到肿瘤生长受到显著抑制。在 BALB/c 裸鼠中，每 2 天口服一次 10-HCPT 后，未观察到急性毒性。本研究结果表明，相对较低剂量的 10-HCPT（口服）能够抑制结肠癌的生长，从而促进了该抗癌药物人体试验新方案的制定。[2]
在 BALB/c-nu 小鼠异种移植人结肠癌 Colo 205 细胞模型中，每 4 天口服 2.5、5 或 7.5 mg/kg 剂量的 (±)-10-羟基喜树碱，第 20 天肿瘤体积分别为 273.1±33.7、228.9±45.3 和 182.9±43.9 mm^3，与对照组 (300.5±22.3 mm^3) 相比，5 mg/kg 和 7.5 mg/kg 剂量组的肿瘤体积显著降低 (p<0.05)。 [2] 当每两天以 1、2.5、5 或 7.5 mg/kg 的剂量给予(±)-10-羟基喜树碱时，在第 20 天，肿瘤体积分别显著（p<0.05）缩小至 221.5±20.3、85.9±12.3、60.8±15.4 和 7.2±2.8 mm^3，显示出显著的抗肿瘤疗效。[2] |
| 酶活实验 |
在人类白血病细胞中，DNA拓扑异构酶I (Topo I) 可以以多种不同分子量的形式存在。分子量为98,000的Topo I在500 μM浓度下可被多种核苷三磷酸及其类似物抑制，抑制顺序为：双脱氧GTP > 2-溴-dATP > 双脱氧ATP > 双脱氧CTP > 2-氟-dATP > 2-氯-dATP。相同浓度的这些核苷三磷酸也能抑制分子量为32,000和35,000的Topo I，抑制顺序为：2-溴-dATP > 双脱氧GTP > 2-氟-dATP > 双脱氧ATP；然而，双脱氧CTP和2-氯-dATP对这两种形式的Topo I没有抑制作用。ATP在8 mM浓度下可抑制Topo I的大分子量和小分子量形式。从人白血病细胞中分离的DNA拓扑异构酶II (Topo II) 的活性需要ATP。在所检测的核苷三磷酸中，只有dATP可以替代ATP。在500 μM ATP存在下，等摩尔浓度的2-溴-dATP、双脱氧-ATP、2-氯-dATP、2-氟-dATP和双脱氧-GTP核苷酸类似物均能抑制Topo II酶的解结活性。当核苷酸类似物浓度降低至250 μM时，仅2-溴-dATP仍对Topo II具有显著的抑制作用。除2-溴-dATP外，所研究的类似物似乎都能抑制Topo I和Topo II酶的切口步骤。这些结果与之前报道的喜树碱抑制Topo I和依托泊苷抑制Topo II的机制不同。这些酶学研究表明，Topo I 和 Topo II 活性的抑制可能导致相应核苷类似物在细胞培养中的细胞毒性，尤其是在这些核苷类似物以三磷酸形式在细胞内高浓度积累时[1]。
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| 细胞实验 |
将Colo 205细胞（5 × 10⁵）（ATCC：CCL-222）接种于25T培养瓶中过夜培养后，分别用5、10、15或20 nM的(±)-10-羟基喜树碱处理，作为对照。处理24-120小时后，用胰蛋白酶-EDTA消化收集细胞，然后在4℃、4500 rpm下离心5分钟。将细胞沉淀物重悬于含0.04%台盼蓝的培养基中，然后使用血细胞计数器计数其中的活细胞[2]。
研究10-羟基喜树碱（HPT）是否能诱导膀胱癌细胞凋亡，并建立凋亡细胞的检测方法。 方法：将人膀胱癌细胞系（T24）在体外暴露于不同浓度的10-羟基喜树碱中，并持续不同时间。采用流式细胞术、Hochest 33258染色和苏木精染色检测HPT诱导的细胞凋亡。同时进行DNA凝胶电泳分析以检测DNA片段化。 结果：细胞萎缩、核碎裂和染色体浓缩表明，浓度为0.01-10 μg/ml的HPT可诱导细胞凋亡。流式细胞术分析表明，凋亡细胞的百分比与HPT的浓度和诱导时间相关。T24细胞系暴露于HPT后，在琼脂糖凝胶电泳中出现典型的梯状条带，提示核小体间DNA发生断裂。HPT诱导T24细胞凋亡的最低暴露时间检测结果表明，暴露于HPT 3小时即可触发核小体间DNA断裂。与Hochest 33258染色相比，苏木精染色检测细胞凋亡更加简便、快速和准确。 结论：HPT诱导T24人膀胱癌细胞凋亡的模型可用于进一步研究膀胱癌。苏木精染色是检测细胞凋亡的有效方法[3]。台盼蓝排除法：将Colo 205细胞（5×10^5）接种于25T培养瓶中过夜，然后用5、10、15或20 nM的(±)-10-羟基喜树碱处理24-120小时，处理组不进行处理（对照组），处理组用(±)-10-羟基喜树碱处理24-120小时。收集细胞，重悬于含0.04%台盼蓝的培养基中，用血细胞计数器计数活细胞。 [2] 细胞周期分布分析：处理后，用胰蛋白酶消化细胞，重悬于70%乙醇中，冰上孵育≥1小时，然后重悬于细胞周期检测缓冲液（0.38 mM柠檬酸钠，0.5 mg/ml RNase A，0.01 mg/ml碘化丙啶）中，细胞浓度为5×10^5个/ml。样品避光保存于4℃，并使用ModFit LT 2.0软件进行流式细胞术分析。[2] 蛋白质印迹：将Colo 205细胞培养于含10% FBS的RPMI-1640培养基中。将细胞接种于6孔板中，并用不同浓度的(±)-10-羟基喜树碱孵育48小时。细胞在冰冷的报告基因裂解缓冲液中裂解，蛋白质定量，取15 μg裂解液蛋白进行10% SDS-PAGE电泳分离，转移至PVDF膜，并用针对拓扑异构酶I、p53、p27、磷酸化p27、细胞周期蛋白E、CDK2、PCNA、p21和α-微管蛋白的抗体进行免疫印迹。使用化学发光印迹试剂盒显色，并曝光于X光胶片。[2] Caspase-3活性测定：使用比色法试剂盒测定N-乙酰-Asp-Glu-Val-Asp-pNA (DEVD-pNA)的裂解活性。收集经10-HCPT处理的细胞（3×10^6），在冰冷的裂解缓冲液中裂解，并离心。将 100 μg 细胞裂解液与含有 10 mM DTT 和 200 μM DEVD-pNA 的 2× 反应缓冲液混合，于 37°C 孵育 1 小时，并使用微孔板读数仪在 405 nm 处检测对硝基苯胺的生成。[2] DNA 片段化分析：将处理后的细胞 (2×10^7) 离心沉淀，并重悬于 NP-40 裂解缓冲液（1% NP-40，20 mM EDTA，50 mM Tris-HCl，pH 7.5）中。离心后收集上清液，用 1% SDS 和 2.5 μg/μl RNase 于 56°C 处理 2 小时，然后用蛋白酶 K (2.5 μg/μl) 于 37°C 处理 2 小时。将 DNA 用乙酸铵和乙醇沉淀，离心收集，然后用溴化乙锭染色，在 1.5% 琼脂糖凝胶上进行电泳。[2] |
| 动物实验 |
BALB/c-nu小鼠饲养于层流室中，温度保持在25 ± 2˚C，并维持12小时光照/12小时黑暗的昼夜节律。使用不含血清的RPMI-1640培养基收集并重悬Colo 205细胞。将细胞浓度调整至1 × 10⁷个细胞/mL后，取0.1 mL细胞悬液皮下注射至小鼠侧腹部。每个实验组使用3至7只荷瘤小鼠。当肿瘤大小达到3-5 mm时开始治疗，使用溶于丙二醇的(±)-10-羟基喜树碱溶液进行给药。将(±)-10-羟基喜树碱腹腔注射（即每两到四天一次），剂量分别为1、2.5、5、7.5和1 mg/kg（注射体积为0.1 mL/20 g体重）。对照组每两天注射一次丙二醇溶剂。实验期间，每周记录两次小鼠的体重和肿瘤大小。使用游标卡尺测量肿瘤大小。肿瘤体积(V)的计算公式为V (mm³) = 0.4AB²，其中A和B分别代表肿瘤的最长直径和最短直径。实验结束后，用二氧化碳气体处死所有小鼠。为进行病理分析，切除肿瘤、肝脏、肾脏和肺脏，进行保存、包埋，并用苏木精-伊红染色[2]。
获得BALB/c-nu小鼠，并在无菌条件下饲养。将Colo 205细胞（1×10^7个细胞/ml，0.1 ml）皮下注射到小鼠侧腹部。当肿瘤大小达到3-5 mm时，开始治疗。将(±)-10-羟基喜树碱溶于丙二醇中，每两天或每四天口服一次，剂量分别为1、2.5、5或7.5 mg/kg（注射体积：0.1 ml/20 g体重）。对照组每两天给予丙二醇溶剂。每周监测两次肿瘤大小（用游标卡尺测量）和体重。肿瘤体积按公式 V (mm^3) = 0.4 × A × B^2 计算，其中 A 为最长直径，B 为最短直径。实验结束时，用二氧化碳气体处死小鼠，收集肿瘤、肝脏、肾脏和肺脏，进行固定、包埋，并用苏木精-伊红染色，用于病理分析。[2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在BALB/c裸鼠中，以1-7.5 mg/kg的剂量每2天或4天口服给予(±)-10-羟基喜树碱后，未观察到急性毒性。除7.5 mg/kg/2天给药组外，其他组均未发现体重显著下降。对肝脏、肺脏和肾脏组织切片进行苏木精-伊红染色后进行组织病理学检查，未发现组织损伤。[2]
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
10-羟基喜树碱正在临床试验NCT00956787（AR-67 (DB-67)治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的研究）中进行研究。另见：10-羟基喜树碱（注：已移至此处）。
(±)-10-羟基喜树碱是一种拓扑异构酶I抑制剂，它能捕获拓扑异构酶I-DNA切割复合物，阻止其降解并产生DNA损伤，从而导致细胞凋亡。它能诱导结肠癌细胞发生G2/M期细胞周期阻滞和caspase-3依赖性凋亡。研究表明，低剂量、长期口服给药安全有效，提示其可能成为一种潜在的结肠癌口服治疗临床方案。[2] |
| 分子式 |
C20H16N2O5
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|---|---|---|
| 分子量 |
364.35
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| 精确质量 |
364.105
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| 元素分析 |
C, 65.93; H, 4.43; N, 7.69; O, 21.96
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| CAS号 |
64439-81-2
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| 相关CAS号 |
(S)-10-Hydroxycamptothecin;19685-09-7
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| PubChem CID |
4330531
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid
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| 密度 |
1.6±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
820.7±65.0 °C at 760 mmHg
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| 熔点 |
230-237°C
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| 闪点 |
450.1±34.3 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±3.1 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.777
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| LogP |
1.32
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| tPSA |
101.65
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
1
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| 重原子数目 |
27
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| 分子复杂度/Complexity |
774
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O1C(C(C([H])([H])C([H])([H])[H])(C2C([H])=C3C4=C(C([H])=C5C([H])=C(C([H])=C([H])C5=N4)O[H])C([H])([H])N3C(C=2C1([H])[H])=O)O[H])=O
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| InChi Key |
HAWSQZCWOQZXHI-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H16N2O5/c1-2-20(26)14-7-16-17-11(5-10-6-12(23)3-4-15(10)21-17)8-22(16)18(24)13(14)9-27-19(20)25/h3-7,23,26H,2,8-9H2,1H3
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| 化学名 |
19-ethyl-7,19-dihydroxy-17-oxa-3,13-diazapentacyclo[11.8.0.02,11.04,9.015,20]henicosa-1(21),2(11),3,5,7,9,15(20)-heptaene-14,18-dione
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (6.86 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7446 mL | 13.7231 mL | 27.4461 mL | |
| 5 mM | 0.5489 mL | 2.7446 mL | 5.4892 mL | |
| 10 mM | 0.2745 mL | 1.3723 mL | 2.7446 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Top1-IN-2
Top1/2-IN-1
MGB1Y
DNA Gyrase-IN-18
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