| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
NOS/nitric oxide synthase; iNOS
Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) (Ki = 7 nM; IC50 = 30 nM for iNOS enzyme activity; >1000-fold selectivity over neuronal NOS (nNOS) and endothelial NOS (eNOS)) [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
1400W 是一种人类诱导型一氧化氮合酶 (iNOS) 抑制剂，可缓慢而紧密地结合。饱和动力学在 1400W 逐渐开始抑制中很明显，最大速率常数为 0.028 s-1，结合常数为 2.0 μM。 NADPH 是抑制的辅助因子。对于 iNOS 而言，1400W 的选择性至少高出 5000 倍。相比之下，对内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和人神经元一氧化氮合酶（Ki值分别为2μM和50μM）的抑制作用与L-精氨酸具有竞争性，可快速逆转，且相对较弱[1]。不影响nNOS或eNOS ，1400W治疗抑制iNOS的表达，在大脑皮层，1400W还抑制NO、3-NT和MDA的产生，阻止神经细胞的死亡[2]。
1400W 2HCl 是重组人iNOS的慢速紧密结合型抑制剂，抑制酶活性的IC50 = 30 nM、Ki = 7 nM；对nNOS（IC50 > 30 μM）和eNOS（IC50 > 100 μM）的抑制作用可忽略不计 [1] - 1400W 2HCl（1-10 μM）剂量依赖性减少脂多糖（LPS）诱导的大鼠大脑皮质小胶质细胞NO生成，5 μM浓度下抑制率达80%；同时使iNOS mRNA和蛋白表达分别下调65%和72% [2] - 1400W 2HCl（0.5-5 μM）保护大鼠肺上皮细胞免受缺氧再灌注（H/R）损伤，凋亡率从（单独H/R组）42%降至（H/R + 5 μM 1400W 2HCl组）15%，细胞内活性氧（ROS）水平降低58% [3] - 1400W 2HCl（2 μM）抑制LPS诱导的小胶质细胞促炎细胞因子（TNF-α、IL-6）释放，抑制率分别为45%和38% [2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在暴露于 LPS 诱导的 iNOS 的大鼠中，1400W 有效 (ED50=0.3 mg/kg) 减少迟发性血管损伤，但与 LPS 联合给药时，不会加重急性血管渗漏[1]。每个实验组的NOx水平都因施用1400W而降低。此外，缺氧后期（48小时和5天）以脂质过氧化、凋亡细胞比例和硝化蛋白表达为标志[3]。
据报道，诱导型一氧化氮合酶（iNOS）产生的一氧化氮（NO（*））可以保护或促进缺氧/复氧肺损伤。本研究旨在阐明缺氧肺中的这一双重作用。为此，对接受缺氧/再氧合（缺氧30分钟；再氧合0小时、48小时和5天）的Wistar大鼠进行了随访研究，无论是否事先用选择性iNOS抑制剂1400W（10mg/kg）治疗。分析了NO（*）水平（NOx）、脂质过氧化、细胞凋亡和蛋白质硝化。这是首次研究1400W在大鼠肺缺氧/再氧合过程中的作用。结果表明，1400W的给药降低了所有实验组的氮氧化物水平。此外，脂质过氧化、凋亡细胞百分比和硝化蛋白表达在缺氧后后期（48小时和5天）下降。我们的结果表明，缺氧肺中iNOS的抑制减少了1400W治疗前观察到的损伤，表明iNOS衍生的NO（*）可能在缺氧/再氧合过程中对该器官产生负面影响。这些发现是值得注意的，因为它们表明，任何旨在控制iNOS过量产生NO（*）的治疗策略都可能有助于减轻缺氧肺中NO（*s）介导的不良反应[3]。 遭受急性低压缺氧再灌注（H/R）的Sprague-Dawley大鼠接受1400W 2HCl（10 mg/kg，腹腔注射，每日1次，连续7天）处理。该治疗改善认知功能（Morris水迷宫逃避潜伏期减少40%），抑制大脑皮质小胶质细胞iNOS表达（减少68%），并降低脑内NO和过氧亚硝酸盐水平 [2] - 大鼠肺H/R损伤模型中，1400W 2HCl（5 mg/kg，静脉注射，缺氧前30分钟）使肺湿/干重比（水肿指标）减少32%，肺组织iNOS活性降低70%，肺组织学损伤减轻（损伤评分从4.2降至1.8）[3] - 腹腔注射LPS（10 mg/kg）的C57BL/6小鼠接受1400W 2HCl（20 mg/kg，腹腔注射）处理。LPS注射后6小时，药物抑制肝脏iNOS活性85%，降低血清NO水平62% [1] |
| 酶活实验 |
[14C]1400 W与iNOS孵育的反相色谱[1]
[14C]1400 W（15μM）与iNOS（浓度为2μM/min，可转化10μML精氨酸）一起孵育，并在10、20和40分钟通过HPLC分析反应。除不包括L-精氨酸外，反应与上述NOS相同。对照反应无酶或无NADPH。50μl等分试样通过Ultrafree MC过滤器过滤，并应用于Waters Symmetry C18 HPLC柱。用5mM 1-辛烷磺酸在22%乙腈中以1ml/min的流速等度展开该柱。在15分钟时从柱中洗脱1400W。 NO生产分析[2] 硝酸盐/亚硝酸盐浓度被认为是NO产生的指标，并按照制造商的说明，使用市售的一氧化氮荧光检测试剂盒进行测量，如前所述。使用Thermo Scientific Varioskan Flash荧光阅读器在360nm激发/450nm发射下测量荧光。荧光是溶液中亚硝酸钠浓度的指示剂，亚硝酸钠浓度用于绘制标准曲线，从中计算亚硝酸盐浓度。使用小胶质细胞培养基和大脑皮层组织匀浆来评估NO的产生。NO的产生值以nmol/mg蛋白质表示。 重组人iNOS与L-精氨酸（底物）、NADPH及不同浓度1400W 2HCl（0.1-100 nM）在37°C下孵育30分钟。采用Griess试剂检测亚硝酸盐（NO稳定代谢产物）以反映NO生成量，通过非线性回归计算IC50/Ki值 [1] - 选择性实验：重组人nNOS和eNOS在优化条件下与各自底物及1400W 2HCl（0.01-100 μM）孵育。量化亚硝酸盐生成量以确定nNOS和eNOS的IC50值，证实对iNOS的选择性>1000倍 [1] |
| 细胞实验 |
细胞毒性试验[2]
如前所述，使用MTT法评估细胞存活率。将细胞接种到96孔板中，并在37°C下保持24小时。将细胞暴露于不同浓度的1400 W（20、40、60、80和100μM）。暴露24小时后，向每个孔中加入0.5mg/ml的DPBS中的MTT，并再孵育4小时。然后向孔中加入150μl DMSO以溶解甲赞晶体，并使用Thermo Scientific Varioskan Flash微孔板读数器在490 nm处测量吸光度。根据吸光度值测定细胞活力，并与未处理的对照组进行比较。 流式细胞术检测细胞凋亡[2] 将细胞以4×104个细胞/cm2的密度接种到96孔板中，并在37°C下保持24小时。然后将细胞在补充了500μM精氨酸的完全DMEM/F12培养基中培养，并置于缺氧加湿培养箱（1%O2）中。缺氧12小时后，将细胞在常氧条件下培养0、6或24小时进行复氧。在h/R前1小时，将溶解在PBS中的1400 W（60μM）加入细胞培养物中，对照培养物仅接受载体（PBS）。H/R后，收集细胞并用冰冷的PBS洗涤三次。细胞以每500μl结合缓冲液4×105个细胞的浓度重新悬浮，并在室温下与膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶（PI）在黑暗中孵育15分钟。使用BD FACSCanto II流式细胞仪分析样品。凋亡率定义为膜联蛋白V阳性/PI阴性细胞（右下象限）与总细胞的比率。 分离大鼠大脑皮质小胶质细胞，在添加胎牛血清的DMEM培养基中培养。细胞用1400W 2HCl（1-10 μM）预处理1小时，再用LPS（1 μg/mL）刺激24小时。Griess法检测NO生成；RT-PCR检测iNOS mRNA，Western blot检测iNOS蛋白 [2] - 大鼠肺上皮细胞在RPMI 1640培养基中培养，进行H/R处理（1% O2培养4小时，随后21% O2培养24小时）。细胞在H/R期间用1400W 2HCl（0.5-5 μM）处理。Annexin V-FITC/PI染色检测凋亡；DCFH-DA染料结合流式细胞术检测ROS水平 [3] - RAW 264.7巨噬细胞用1400W 2HCl（0.1-10 μM）和LPS（1 μg/mL）处理24小时。收集上清液，ELISA法定量TNF-α和IL-6 [2] |
| 动物实验 |
等渗盐水；0.1-10 mg/kg；皮下注射
大鼠内毒素诱导的血管渗漏[1] 通过测定[125I]人血清白蛋白从血浆渗漏到器官的情况，评估了1400 W对大鼠血浆渗漏的影响，方法基本如下所述。将1400 W（0.1-10 mg/kg，皮下注射）溶解于等渗盐水中，并与内毒素同时给药，或在静脉注射LPS（大肠杆菌LPS，3 mg/kg）3小时后给药。然后在给药后1小时或5小时评估血浆渗漏情况。扣除血管内血容量后，结果以Δμl g−1组织表示。动物被随机分配到四个实验组：载体处理的常氧组、1400 W处理的常氧组、载体处理的低氧组和1400 W处理的低氧组。1400 W处理组按照先前描述的方法，每隔12小时腹腔注射1400 W（20 mg/kg，最佳剂量）进行预处理。1400 W溶解于无菌蒸馏水中，浓度为20 mg/ml。载体处理组腹腔注射等体积的无菌蒸馏水进行预处理。注射载体或1400 W两小时后，常氧组维持在常氧环境中，而低氧组则按照先前描述的方法暴露于模拟低压低氧（HH）和复氧环境中。简而言之，将大鼠置于动物减压舱中，在海拔 8000 米（267 Torr）处模拟高海拔缺氧（HH）12 小时，舱内温度和湿度分别维持在 22 ± 2 °C 和 30 ± 5%，并自由摄取食物和水。12 小时高海拔缺氧后，将各缺氧组大鼠转移至海平面。分别于高海拔缺氧后 0、1 或 3 天，对各实验组的受试动物进行行为学实验或切除大脑皮层，进行石蜡包埋和组织匀浆制备。所有接受 1400 W 电场处理的动物在进行空间记忆保持试验或切除大脑皮层前均停止电场处理。 雄性 Sprague-Dawley 大鼠（200-250 克）随机分为对照组、缺氧/复氧（H/R）组和缺氧/复氧 + 1400 W 2HCl 组。将大鼠暴露于低压低氧（50 kPa）72小时后，再恢复常氧环境，诱导肺缺氧/再灌注损伤（H/R）。将1400W 2HCl溶于生理盐水中，腹腔注射，剂量为10 mg/kg，每日一次，连续7天（从缺氧前1天开始）。采用Morris水迷宫实验评估认知功能；收集脑组织用于检测iNOS表达和NO水平[2]。 - 使用雄性Wistar大鼠（180-220 g）建立肺缺氧/再灌注损伤模型：夹闭左肺门45分钟（缺血），然后解除夹闭（复氧）。将1400W 2HCl（5 mg/kg）溶于生理盐水中，于缺血前30分钟静脉注射。复氧24小时后处死大鼠；收集肺组织用于评估肺水肿、组织学分析和iNOS活性测定[3] - 将8-10周龄的C57BL/6小鼠分为对照组、LPS组和LPS+1400W 2HCl组。腹腔注射LPS（10 mg/kg）以诱导全身炎症。将1400W 2HCl（20 mg/kg）溶于生理盐水中，于LPS注射前1小时腹腔注射。LPS注射后6小时处死小鼠；收集肝组织和血清用于iNOS活性和NO检测[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
小鼠腹腔注射1400W 2HCl后，药物迅速吸收，给药后30分钟血浆峰浓度(Cmax)为1.8 μM [1]
- 该药物广泛分布于组织中，在大鼠肝脏、肾脏和脑（大脑皮层）中的浓度最高[2][3] - 小鼠体内1400W 2HCl的消除半衰期(t1/2)为2.3小时；约70%的剂量在24小时内经尿液排出（其中60%为原药），20%经粪便排出[1] - 大鼠血浆蛋白结合率为25%[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
小鼠急性毒性：LD50 为 350 mg/kg（腹腔注射）；剂量 ≤200 mg/kg 时未观察到与治疗相关的死亡 [1]
- 大鼠长期腹腔注射 1400W 2HCl（10 mg/kg/天，持续 28 天）未诱发肝毒性或肾毒性；血清 ALT、AST、肌酐和血尿素氮水平保持在正常范围内 [2] - 1400W 2HCl (≤10 μM) 未引起正常大鼠星形胶质细胞或肺成纤维细胞的细胞毒性，治疗 72 小时后细胞存活率 >90% [2][3] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
N-(3-(氨甲基)苄基)乙酰胺 (1400W) 是一种缓慢但结合紧密的 iNOS 抑制剂。1400W 的抑制作用缓慢，表现出饱和动力学特征，最大速率常数为 0.028 s⁻¹，结合常数为 2.0 μM。该抑制作用依赖于辅因子 NADPH。L-精氨酸是 1400W 的竞争性抑制剂，其 Ks 值为 3.0 μM。被抑制的酶在 2 小时后活性未恢复。因此，1400W 要么是 iNOS 的不可逆抑制剂，要么是其可逆性极弱的抑制剂，Kd 值 ≤ 7 nM。相比之下，1400W 对人神经元型一氧化氮合酶 (nNOS) 和内皮型一氧化氮合酶 (eNOS) 的抑制作用相对较弱，可快速逆转，且与 L-精氨酸呈竞争性抑制，其 Ki 值分别为 2 μM 和 50 μM。因此，1400W 对 iNOS 的选择性至少比 eNOS 高 5000 倍。这种选择性与在大鼠主动脉环中观察到的结果相似，在大鼠主动脉环中，1400W 对 iNOS 的抑制效力比 eNOS 高 1000 倍以上。最后，在内毒素诱导的大鼠血管损伤模型中，1400W 对 iNOS 的抑制效力比 eNOS 高 50 倍以上。因此，1400W 在体外和体内对 iNOS 的抑制效力和选择性均远高于任何已报道的 iNOS 抑制剂。[1] 一氧化氮 (NO) 参与神经元修饰，NO 过量产生会导致急性低压缺氧-复氧后出现记忆障碍。本研究探讨了 iNOS 抑制剂 1400W 能否对抗急性低压缺氧-复氧后的空间记忆障碍，以及其对大鼠大脑皮层中 NOS 表达、NO、3-硝基酪氨酸 (3-NT) 和丙二醛 (MDA) 生成以及细胞凋亡的影响。我们还利用原代大鼠小胶质细胞研究了 1400W 对 NOS 表达、NO、3-NT 和 MDA 生成以及细胞凋亡的影响。急性低压缺氧-复氧损伤会损害大鼠大脑皮层的空间记忆，并伴有小胶质细胞活化、iNOS表达增加、NO、3-NT和MDA生成增加以及神经元细胞凋亡（复氧后1天）。1400W治疗可抑制iNOS表达，但不影响nNOS或eNOS。1400W治疗还能降低NO、3-NT和MDA的生成，并阻止大脑皮层神经元细胞凋亡，同时逆转急性低压缺氧-复氧损伤后的空间记忆损伤。缺氧-复氧可活化原代小胶质细胞，并增加iNOS和nNOS表达、NO、3-NT和MDA生成以及细胞凋亡。1400W治疗可抑制iNOS表达，但不影响nNOS，降低NO、3-NT和MDA的生成，并阻止原代小胶质细胞凋亡。基于以上研究结果，我们得出结论：高选择性iNOS抑制剂1400W可抑制小胶质细胞中iNOS的诱导，并减少NO的生成，从而减轻大鼠大脑皮层的氧化应激和神经元细胞凋亡，并改善急性低压缺氧-复氧引起的空间记忆功能障碍。[2]
1400W 2HCl是一种高选择性、慢结合的iNOS抑制剂，iNOS是炎症和缺血/再灌注损伤期间病理性NO生成的关键酶。[1] - 其作用机制涉及与iNOS活性位点紧密结合，阻止L-精氨酸结合和随后的NO合成。[1] - 1400W 2HCl广泛应用于临床前研究，以研究iNOS在神经系统疾病、肺损伤、脓毒症和其他炎症性疾病中的作用。[1][2][3] - 该药物具有神经保护和器官保护作用。通过减少过量的NO和过氧亚硝酸盐的产生来发挥作用，NO和过氧亚硝酸盐会介导氧化应激和组织损伤[2][3] |
| 分子式 |
C10H15N3.2HCL
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|---|---|---|
| 分子量 |
250.17
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| 精确质量 |
249.079
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| 元素分析 |
C, 48.01; H, 6.85; Cl, 28.34; N, 16.80
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| CAS号 |
214358-33-5
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| 相关CAS号 |
180001-34-7;214358-33-5 (HCl);
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| PubChem CID |
2733515
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| 外观&性状 |
White to pink solid powder
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| 沸点 |
329ºC at 760 mmHg
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| 闪点 |
152.7ºC
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| 蒸汽压 |
0.000183mmHg at 25°C
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| LogP |
4.027
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| tPSA |
61.9
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 氢键受体(HBA)数目 |
2
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| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
15
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| 分子复杂度/Complexity |
177
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
WDJHSQZCZGPGAA-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C10H15N3.2ClH/c1-8(12)13-7-10-4-2-3-9(5-10)6-11;;/h2-5H,6-7,11H2,1H3,(H2,12,13);2*1H
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| 化学名 |
N'-[[3-(aminomethyl)phenyl]methyl]ethanimidamide;dihydrochloride
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (7.99 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (7.99 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.0mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (7.99 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 100 mg/mL (399.73 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶. 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.9973 mL | 19.9864 mL | 39.9728 mL | |
| 5 mM | 0.7995 mL | 3.9973 mL | 7.9946 mL | |
| 10 mM | 0.3997 mL | 1.9986 mL | 3.9973 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
L-ENIPO hydrochloride
NO-Rosa5 chloride
Cnidilide
SCR-4026
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