Vehicle for drug delivery
Transcription Factor EB (TFEB) activator, cholesterol depletion agent[1]
Cholesterol homeostasis modulator[2]

用 HP-β-CD 处理细胞会激活转录因子 EB（溶酶体活性和自噬的基本调节因子），并促进自噬清除 [1]。 HP-β-CD 疗法可降低细胞内胆固醇，并通过 G2/M 细胞周期停滞和死亡有效抑制白血病细胞增殖。暴露72小时后，HP-β-CD的IC50值在3.86-10.09 mM范围内。 HP-β-CD 对携带 T315I BCR-ABL 突变（对大多数 ABL 酪氨酸激酶抑制剂具有抗性）的 CML 细胞和具有白血病干细胞特征的缺氧适应 CML 细胞也显示出抗癌作用。此外，HP-β-CD 会降低人原代 AML 和 CML 细胞的集落形成能力 [2]。

---

用HPβCD（0.1-10 mM）处理稳定表达TFEB-3×FLAG的HeLa细胞，诱导了TFEB的核转位，表明TFEB被激活。核转位程度呈浓度依赖性，在1-10 mM时观察到最大激活[1]
HPβCD（1 mM）处理24小时后，上调了HeLa/TFEB细胞中参与溶酶体功能的TFEB靶基因（GBA：5.1倍；HEXA：2.7倍；LAMP1：3.5倍）和自噬（MAPLC3B：4.8倍；SQSTM1：2.1倍；BECN1：3.0倍）的mRNA表达[1]
HPβCD（1 mM）处理诱导自噬激活，表现为GFP-LC3点状结构增加、Western blot中LC3-II/LC3-I比率增加以及在巴弗洛霉素A1（100 nM）存在下自噬通量增强[1]
在LINCL患者来源的成纤维细胞中，HPβCD（0.1-10 mM）处理以浓度和时间依赖性的方式减少了自发荧光蜡样脂褐素的积累，在1-10 mM处理3天后达到最大清除效果[1]
HPβCD（1 mM）处理LINCL成纤维细胞3天后，也诱导了TFEB核转位，并上调了溶酶体（GBA：2.7倍；HEXA：2.8倍；LAMP1：1.6倍）和自噬（MAPLC3B：3.2倍；SQSTM1：2.5倍；BECN1：2.5倍）基因的表达[1]
TFEB siRNA沉默减弱了HPβCD介导的蜡样脂褐素清除以及溶酶体/自噬基因的上调，证实了TFEB在该过程中的作用[1]
ATG7 siRNA沉默也减少了HPβCD介导的蜡样脂褐素清除，表明清除过程依赖于自噬[1]
HPβCD处理（0.1-10 mM，3天）未在LINCL成纤维细胞中诱导早期或晚期凋亡，通过膜联蛋白V和碘化丙啶染色测定[1]
HP-β-CyD 以剂量和时间依赖性的方式抑制多种白血病细胞系（急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性髓系白血病）的生长。在13个细胞系中，处理72小时的IC₅₀值范围为3.86 mM至10.09 mM[2]
HP-β-CyD (5-15 mM) 在BV173和K562细胞中诱导细胞凋亡，通过膜联蛋白V/7-AAD染色在24小时后测定[2]
HP-β-CyD (5-15 mM) 在BV173、K562及其他白血病细胞系中诱导G₂/M期细胞周期停滞，通过碘化丙啶染色和流式细胞术在12小时后测定[2]
HP-β-CyD (5-10 mM) 处理1-3小时，以时间和剂量依赖性的方式促进胆固醇从Ba/F3 BCR-ABLWT和BV173细胞中外排，并降低细胞内胆固醇含量[2]
HP-β-CyD (10 mM) 处理调节白血病细胞中的信号通路：在BV173细胞中抑制Stat5、Akt和Lyn的磷酸化，在K562细胞中降低p-Lyn水平（8-24小时后恢复），同时增加两个细胞系中的p-ERK1/2水平[2]
HP-β-CyD 抑制表达T315I BCR-ABL突变（对伊马替尼和达沙替尼耐药）的Ba/F3细胞的生长，IC₅₀为6.87 ± 0.76 mM，与对野生型细胞的效果相当[2]
HP-β-CyD 抑制低氧适应（干细胞样）CML细胞系K562/HA和KCL22/HA的生长，IC₅₀值分别为3.86 mM和5.61 mM[2]
HP-β-CyD (5-15 mM) 在甲基纤维素培养体系中抑制来自急性髓系白血病（AML）和加速期慢性髓系白血病（CML-AP）患者的原代单个核细胞的集落形成能力[2]
HP-β-CyD (高达15 mM) 未显著抑制正常人原代肝细胞的生长（IC₅₀: 18.65 mM）[2]
在使用正常小鼠骨髓单个核细胞的集落形成实验中，5 mM和15 mM的HP-β-CyD分别将集落数减少至对照的93%和84%，而25 mM则将其减少至52.4%[2]

由于溶酶体贮积病患者产生的细胞溶酶体自噬系统活性降低，HP-β-CD 治疗可增加转录因子 EB 介导的蛋白脂质聚集体清除和积累 [1]。当HP-β-CD腹腔注射时，白血病小鼠模型可以具有更高的存活率。全身给予 HP-β-CD 的小鼠没有表现出任何明显的负面影响 [2]。

---

与载体对照组相比，腹腔注射HP-β-CyD（50 mM或150 mM溶于生理盐水，200 μL，每日两次，连续20天）显著延长了移植Ba/F3 BCR-ABLWT白血病细胞的裸鼠的生存期[2]
与载体对照组相比，腹腔注射HP-β-CyD（50 mM或150 mM溶于生理盐水，200 μL，每周连续5天，持续13周）显著延长了异种移植人BV173白血病细胞的NOD/SCID小鼠的生存期[2]

进行了三肽基肽酶1（TPP1）酶活性测定，以确认LINCL患者来源的成纤维细胞与健康个体成纤维细胞相比的酶活性缺失。裂解细胞后，收集上清液，使用特定底物测量TPP1活性[1]

HP-β-CyD对体外细胞生长的影响[2]
如前所述，使用台盼蓝染料排除法评估细胞存活率，使用改良的甲基噻唑二苯基四氮唑（MTT）试验和SF试剂评估细胞增殖。将包括人原代肝细胞在内的细胞以每孔100μL培养基中1×104个细胞的密度接种在平底96孔板中，并与不同浓度的HP-β-CyD一起孵育72小时。计算每种浓度的三次重复的平均值。

---

蛋白质印迹分析[2]
如前所述，使用裂解缓冲液从细胞中制备用或不用HP-β-CyD处理的白血病细胞的全细胞裂解物，并稍作修改。使用10%NuPAGE电泳系统分离蛋白质，转移到硝化纤维膜上，在室温下用5%牛血清白蛋白封闭1小时，并在4°C下与一抗孵育过夜。抗Akt、磷酸化Akt（Thr308或Ser473）、磷酸化Erk1/2（Thr202/Thr204）、磷酸酸化Stat5、Lyn、Stat5、Erk1/2、肌动蛋白和磷酸化Lyn的抗体用作一抗。辣根过氧化物酶偶联免疫球蛋白IgG用作第二抗体。使用增强型化学发光试剂盒进行检测。这些结果代表了至少两个独立的实验。使用ImageJ软件定量背景减除后的免疫印迹信号强度。

---

细胞周期分析[2]
如前所述进行人白血病细胞系的细胞周期分析。简而言之，用指定浓度的HP-β-CyD处理1×106个细胞。HP-β-CyD处理后12或24小时，收集细胞并用70%乙醇固定。然后将细胞与0.1%Triton X-100和0.5%RNase A在室温下孵育30分钟，并用50μg/mL碘化丙啶染色。通过流式细胞术分析细胞DNA含量，并使用带有CellQuest软件的FACS Caliber流式细胞仪测定细胞周期特征。数据为三个独立实验的平均值±标准差。

---

细胞凋亡检测[2]
根据制造商的说明，通过用7-氨基放线菌素D（7-AAD）和膜联蛋白V对细胞进行染色来进行凋亡测定。细胞在6孔板中以4×105个细胞的密度培养，并与不同浓度的HP-β-CyD一起孵育12或24小时。然后，用7-氨基放线菌素D（7-AAD）和膜联蛋白V-APC对细胞进行染色，并使用带有Diva软件的FACSAriaII系统进行分析。

---

造血集落形成试验[2]
如前所述，使用标准甲基纤维素培养试验研究了正常造血祖细胞中HP-β-CyD的毒性。将10周龄C57BL/6N小鼠骨髓中的2×104个单核细胞暴露于1 mL MethoCult M3434中的0、5、15或25 mM HP-β-CyD。培养8天后，使用倒置显微镜计数菌落数量。数据表示菌落的平均数±标准差（n=3）。临床样本是在知情同意的情况下获得的。白血病患者的单核细胞在含有重组细胞因子的半固体培养基中培养。

---

胆固醇测定[2]
将白血病细胞（3×106）与5或10 mM HP-β-CyD在37°C的HBSS（pH 7.4）中孵育1、2或3小时。通过离心（3000rpm，5分钟）回收细胞培养上清液。使用胆固醇E-test Wako测定上清液中总胆固醇的浓度。数据为三个实验的平均值±标准差。用甲醇：氯仿（1:2）提取细胞脂质，酶法测定总胆固醇和游离胆固醇。酯化胆固醇的量是通过从总胆固醇中减去游离胆固醇来计算的。通过BCA测定法测定细胞蛋白浓度。数据为三个实验的平均值±标准差。对于filipin染色，将细胞与β-CyDs（10 mM）一起孵育1小时。此后，使用基于胆固醇细胞的检测试剂盒检测细胞胆固醇。

---

对于免疫荧光实验，将细胞接种在盖玻片上并用HPβCD处理，然后固定和透化。使用针对FLAG、LC3、LAMP2或TFEB等靶标的一抗，然后使用荧光二抗。通过共聚焦显微镜获取图像，并分析共定位和荧光强度[1]
使用定量RT-PCR测量mRNA表达。从处理细胞中提取总RNA，合成cDNA，并使用基因特异性引物进行qPCR。表达水平归一化至GAPDH，并与未处理对照进行比较[1]
进行Western blot分析以检测蛋白水平。裂解细胞，通过SDS-PAGE分离蛋白，转膜，使用抗LC3和GAPDH的一抗以及HRP标记的二抗进行探测，最后进行化学发光检测[1]
使用膜联蛋白V-FITC/碘化丙啶试剂盒进行细胞凋亡测定。处理后的细胞进行染色，并通过流式细胞术分析以量化早期和晚期凋亡细胞群[1]
对于siRNA转染，将细胞接种于孔板中，并使用转染试剂转染TFEB特异性或对照siRNA。2天后，用HPβCD再处理3天，然后进行分析[1]
使用台盼蓝染料排斥法和改良的MTT法评估细胞活力和增殖。将细胞接种于96孔板中，用HP-β-CyD处理72小时。使用非线性回归分析确定IC₅₀值[2]
对于细胞凋亡实验，将细胞与HP-β-CyD培养12或24小时，然后用膜联蛋白V-APC和7-AAD染色，并通过流式细胞术分析[2]
对于细胞周期分析，用HP-β-CyD处理12或24小时的细胞被固定、透化、用RNase A处理、碘化丙啶染色，并通过流式细胞术分析以确定DNA含量[2]
对于胆固醇外排实验，将白血病细胞与HP-β-CyD在缓冲液中孵育，通过离心收集上清液，并使用商业酶法试剂盒测量总胆固醇浓度[2]
对于细胞内胆固醇测量，使用甲醇:氯仿从处理细胞中提取脂质，并通过酶法测定总胆固醇和游离胆固醇。酯化胆固醇通过相减计算[2]
对于非律宾菌素染色，用HP-β-CyD处理的细胞用非律宾菌素溶液染色，并通过荧光显微镜观察以评估细胞胆固醇水平[2]
对于Western印迹分析，制备处理细胞的全细胞裂解物，通过SDS-PAGE分离蛋白，转膜，并用特异性一抗和二抗进行探测检测[2]
对于造血集落形成实验，将骨髓单个核细胞或原代白血病细胞接种于含有HP-β-CyD和细胞因子的甲基纤维素培养基中。培养8-13天后计数集落[2]

Murine leukemia model[2]
Two different experimental settings were used. The protocol was approved by the Committee on the Ethics of Animal Experiments of the Saga University (Permit number: 25-028-0). First, nude mice were intravenously transplanted with 1×106 EGFP+ Ba/F3 BCR-ABLWT cells. These mice were intraperitoneally injected with 200 μL vehicle (saline) or HP-β-CyD (50 or 150 mM) for 20 consecutive days 3 days after transplantation, and survival was monitored daily. Leukemic cell engraftment was confirmed by detection of GFP-positive cells in the recipient’s BM using flow cytometry.[2]
The second experimental setting involved a human leukemia xenograft model. BV173 cells (1×106) were intravenously injected into sublethally irradiated (2 Gy) NOD/SCID mice. After 72 hours, xenotransplanted mice were intraperitoneally injected with 200 μL vehicle or HP-β-CyD (50 or 150 mM) for 5 consecutive days every week for 13 weeks, and survival was monitored daily. The percentage of human leukemic cells in BM was determined by flow cytometry after double staining with FITC-conjugated anti-human CD19 and PE/Cy7-conjugated anti-mouse CD45 antibodies. All surgery was performed under sodium pentobarbital anesthesia, and all efforts were made to minimize suffering. Mice were euthanized with ether when they became moribund or unable to obtain food or water, as recommended by the institutional guidelines of Saga University. Survival data were analyzed by a log-rank nonparametric test and shown as Kaplan-Meier survival curves (n = 10 for each group).[2]

---

Lung histology[2]
HP-β-CyD was administered to NOD/SCID mice for 13 weeks as described in the above section entitled “Murine leukemia model”. Age-matched mice were used as a control. Lungs were perfused with 10% buffered formalin and excised. Tissues were fixed in 10% buffered formalin and embedded in paraffin. These blocks were then sectioned and stained with hematoxylin and eosin (H&E).

---

For the murine Ba/F3 BCR-ABLWT leukemia model, nude mice were intravenously transplanted with 1×10⁶ EGFP⁺ Ba/F3 BCR-ABLWT cells. Three days later, mice received intraperitoneal injections of 200 μL vehicle (saline), 50 mM HP-β-CyD (695.5 mg/kg), or 150 mM HP-β-CyD (2086.5 mg/kg) twice daily for 20 consecutive days. Survival was monitored daily[2]
For the human leukemia xenograft model, NOD/SCID mice were sublethally irradiated (2 Gy) and intravenously injected with 1×10⁶ BV173 cells. Three days later, mice received intraperitoneal injections of 200 μL vehicle (saline), 50 mM HP-β-CyD (695.5 mg/kg), or 150 mM HP-β-CyD (2086.5 mg/kg) for 5 consecutive days every week for 13 weeks. Survival was monitored daily[2]

In the described mouse studies, systemic administration of HP-β-CyD (up to 150 mM, 2086.5 mg/kg, i.p.) did not cause gross lesions, hemolysis, or anemia[2]
Histological examination of lungs from NOD/SCID mice treated with HP-β-CyD for 13 weeks showed no obvious changes compared to age-matched controls[2]
In contrast, all mice injected with 150 mM methyl-β-cyclodextrin (M-β-CyD) died of diffuse alveolar hemorrhage within 24 hours[2]

[1]. 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin promotes transcription factor EB-mediated activation of autophagy: implications for therapy. J Biol Chem. 2014 Apr 4;289(14):10211-22.

[2]. 2-Hydroxypropyl-β-Cyclodextrin Acts as a Novel Anticancer Agent. PLoS One. 2015 Nov 4;10(11):e0141946.

Derivative of beta-cyclodextrin that is used as an excipient for steroid drugs and as a lipid chelator.

---

HPβCD is an FDA-approved excipient used to improve drug stability and bioavailability[1]
It can extract cholesterol from biological membranes by trapping it in its hydrophobic core[1]
The study proposes a model where cellular uptake of HPβCD leads to TFEB activation, which in turn upregulates lysosomal and autophagy genes, enhancing clearance of storage material like ceroid lipopigment in lysosomal storage disorder models[1]
HPβCD-mediated autophagy activation under the studied conditions was not associated with apoptosis induction, suggesting a pro-survival response[1]
HP-β-CyD is an FDA-approved pharmaceutical excipient used to improve drug solubility and bioavailability, and is clinically used for Niemann-Pick Type C disease[2]
The study proposes that HP-β-CyD exerts anticancer effects by disrupting cholesterol homeostasis in cancer cells, leading to apoptosis and cell-cycle arrest[2]
HP-β-CyD showed efficacy against TKI-resistant leukemia cells (including T315I mutant) and hypoxia-adapted stem cell-like leukemic cells[2]
The concentration of HP-β-CyD required for in vivo efficacy (approximately 2 g/kg) is comparable to doses used in clinical trials for Niemann-Pick Type C disease[2]

C63H12O42

1541.54

1540.662

128446-35-5

128446-35-5 ;107745-73-3;

4363642

Typically exists as White to off-white solids at room temperature

1.4±0.1 g/cm3

1521.9±60.0 °C at 760 mmHg

278ºC (dec.)

874.2±32.9 °C

0.0±0.6 mmHg at 25°C

1.545

-6.23

618.66

21

42

28

105

2010

0

CO[C@@H]1[C@H](O[R])[C@@H](O)[C@H](C)[C@@H](CO[R])O1.[C;D2]CC(O)C.[R].[7].[R=H or]

ODLHGICHYURWBS-FOSILIAISA-N

InChI=1S/C63H112O42/c1-22(64)8-85-15-29-50-36(71)43(78)57(92-29)100-51-30(16-86-9-23(2)65)94-59(45(80)38(51)73)102-53-32(18-88-11-25(4)67)96-61(47(82)40(53)75)104-55-34(20-90-13-27(6)69)98-63(49(84)42(55)77)105-56-35(21-91-14-28(7)70)97-62(48(83)41(56)76)103-54-33(19-89-12-26(5)68)95-60(46(81)39(54)74)101-52-31(17-87-10-24(3)66)93-58(99-50)44(79)37(52)72/h22-84H,8-21H2,1-7H3/t22?,23?,24?,25?,26?,27?,28?,29-,30-,31-,32-,33-,34-,35-,36-,37-,38-,39-,40-,41-,42-,43-,44-,45-,46-,47-,48-,49-,50-,51-,52-,53-,54-,55-,56-,57-,58-,59-,60-,61-,62-,63-/m0/s1

(1R,3S,5S,6R,8S,10S,11R,13S,15S,16R,18S,20S,21R,23S,25S,26R,28S,30S,31R,33S,35S,36S,37S,38S,39S,40S,41S,42S,43S,44S,45S,46S,47S,48S,49S)-5,10,15,20,25,30,35-heptakis(2-hydroxypropoxymethyl)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29,32,34-tetradecaoxaoctacyclo[31.2.2.23,6.28,11.213,16.218,21.223,26.228,31]nonatetracontane-36,37,38,39,40,41,42,43,44,45,46,47,48,49-tetradecol

Hydroxypropyl betadex (2-Hydroxypropyl)-β-cyclodextrinHydroxypropyl-β-cyclodextrin; HP-β-CD; (2-Hydroxypropyl)-; A-cyclodextrin; MFCD00069372; HP-??cyclodextrin; ODLHGICHYURWBS-FOSILIAISA-N; HMS3885J22; s4760;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~50 mg/mL
H2O : ~50 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (Infinity mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (Infinity mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (Infinity mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

配方 4 中的溶解度: 100 mg/mL (Infinity mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶 (<60°C).

---

配方 5 中的溶解度: 200 mg/mL (Infinity mM) in Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。