2-NBDG

别名: 2-NBDG; 2NBDG; 2 NBDG 2-(N-7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑-4-氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖; 2-(N-7-硝基-2,1,3-苯并噁二唑-4-氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖; 2-脱氧-2-[(7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑-4-基)氨基]-D-葡萄糖; 2-(N-7-硝基-2,1,3-苯并噁二唑-4-氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖, 混合物; 葡萄糖转运; 血糖通道荧光探针2-NBDG
目录号: V7143 纯度: ≥98%
2-NBDG 是葡萄糖的荧光类似物,是一种用于测量细菌和活哺乳动物细胞以及肿瘤活检中葡萄糖摄取的指示剂。
2-NBDG CAS号: 186689-07-6
产品类别: Fluorescent Dye
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
10 mM * 1 mL in DMSO
1mg
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
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  • 1-NBDG
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纯度: ≥98%

产品描述
2-NBDG 是葡萄糖的荧光类似物,是一种用于测量细菌和活哺乳动物细胞以及肿瘤活检中葡萄糖摄取的指示剂。在大肠杆菌中,2-NBDG 的摄取会被 D-葡萄糖竞争性抑制,但不会被 L-葡萄糖或蔗糖抑制。细胞葡萄糖摄取能力的评估在糖尿病研究中起着基础性作用。在这项研究中,我们描述了一种灵敏的非放射性测定法,用于直接快速测量单个活细胞的葡萄糖摄取。该测定基于哺乳动物细胞与荧光d-葡萄糖类似物2-[N-(7-硝基苯-2-氧杂-1,3-二唑-4-基)氨基]-2-脱氧-d-葡萄糖(2-NBDG)的直接孵育,然后用流式细胞术检测细胞产生的荧光。进行了一系列实验来确定该测定的最佳条件。通过这项技术,发现胰岛素在体外失去了对细胞的生理作用,同时一些其他抗糖尿病药物促进了细胞葡萄糖摄取率,其机制可能与胰岛素或每种药物普遍接受的机制不同。我们的研究结果表明,这项技术在医学和研究中都有应用潜力。
生物活性&实验参考方法
靶点
Fluorescent Dye
体外研究 (In Vitro)
1.工作溶液的配制
1.1储备溶液的制备。为了获得1mM储备溶液,将1mg 2-NBDG溶解在2.92mL DDH2O中
1.2工作溶液的制备:用预热的无血清细胞培养基或PBS稀释储备溶液,制备10-200μM的2-NBDG工作溶液
注:请根据您的具体需要调整2-NBDG工作溶液的浓度
2.细胞染色
2.1悬浮细胞:离心收集细胞,加入PBS洗涤两次,每次5分钟
贴壁细胞:弃掉培养基,加入胰蛋白酶消化细胞。离心后,丢弃上清液并用PBS洗涤两次,每次5分钟
2.2加入1mL 2-NBDG工作溶液,在室温下孵育5-60分钟
2.3 400 g,4℃离心3-4分钟,弃去上清液
2.4 加入PBS洗涤细胞两次,每次5分钟
2.5 用1mL无血清培养基或PBS重悬细胞后,在显微镜下观察。如果进行了活力测试,则使用ELISA酶联免疫吸附测定(ELISA)读取器记录540/570 nm处的光密度(O.D.)。使用对照比例计算细胞活力,并相对于药物的对数浓度绘制以计算IC50。
体内研究 (In Vivo)
通过荧光成像,在携带人类癌症异种移植物肿瘤的小鼠中检测到荧光2-NBDG摄取增加的癌症循环细胞,这表明2-NBDG作为超代谢循环癌症细胞荧光成像的示踪剂在临床上的应用[3]。
酶活实验
循环乳腺癌症细胞对荧光2-NBDG吸收增加的荧光成像从肿瘤细胞植入后1周开始,通过穿刺小鼠隐静脉收集小鼠血液样本(100μL/小鼠)。将含有循环乳腺癌症细胞的血液样品与购自Invitrogen的荧光葡萄糖类似物2-NBDG在37°C的黑暗培养箱中以5μg/100μL血液的剂量孵育30分钟。随后,在来自供应商的方案中,用与抗上皮细胞粘附分子(EpCAM)IgG缀合的磁珠收获循环乳腺癌症细胞,随后用细胞摄取荧光2-NBDG对循环乳腺癌症细胞进行荧光成像。简言之,在与2-NBDG孵育结束时,将1μL 1%的磁珠悬浮液添加到100μL的血液样品中,然后在4°C下孵育30分钟,轻轻摇晃,以促进磁珠与循环的乳腺癌症细胞结合。随后,通过磁分离架磁分离从血液中收集循环的乳腺癌症细胞,用PBS洗涤3次,并在100μl PBS中再次悬浮循环的乳腺癌症细胞后转移到96细胞板中。在配备488nm滤光片的荧光显微镜(Olympus)下检查循环的乳腺癌症细胞对2-NBDG的摄取。具有来源于荧光2-NBDG的细胞摄取的荧光信号的大细胞被计数为高代谢循环乳腺癌症细胞,相比之下,小尺寸的正常小鼠血细胞(淋巴细胞和RBC)没有或很少显示2-NBDG荧光信号。通过用手动细胞计数器对96孔板的孔的整个区域进行视觉扫描,获得血液样品中高代谢循环乳腺癌症细胞的总数。实验重复了三次[3]。
细胞实验
2-NBDG摄取测定的染色实施例1:2-NBDG可用作监测活细胞中葡萄糖摄取的荧光指示剂
1.将细胞与2-NBDG(50μM;30分钟;37℃;5%CO2)在无葡萄糖DMEM中孵育
2.彻底清洗细胞并通过显微镜测量荧光
2-NBDG摄取测定的染色实施例2:2-NBDG可用作监测活细胞中葡萄糖摄取的荧光指示剂
1.用含有2-NBDG的低血糖DMEM(150μg/mL;60分钟;37℃)孵育细胞
2.彻底清洗细胞并通过显微镜测量荧光
2-NBDG摄取测定的染色实施例3:2-NBDG可用作监测活细胞中葡萄糖摄取的荧光指示剂
1.将细胞在低葡萄糖DMEM中与2-NBDG(150μg/mL;60分钟;37℃)孵育
2.彻底清洗细胞并通过显微镜测量荧光
2-NBDG摄取测定的染色实施例4:2-NBDG可用作监测活细胞中葡萄糖摄取的荧光指示剂
1.用2-NBDG(100μM;30分钟)孵育细胞
2.彻底清洗细胞并通过显微镜测量荧光
动物实验
Procedures:[4]
Human breast cancer cells were implanted in the mammary gland fat pad of athymic mice to establish orthotopic human breast cancer xenografts as a mouse model of circulating breast cancer cells. Near-infrared fluorescence imaging of the tumor-bearing mice injected with 2-DeoxyGlucosone 750 (2-DG 750) was conducted to assess glucose metabolism of xenograft tumors. Following incubation with fluorescent 2-NBDG, circulating breast cancer cells in the blood samples collected from the tumor-bearing mice were collected by magnetic separation, followed by fluorescence imaging for 2-NBDG uptake by circulating breast cancer cells, and correlation of the number of hypermetabolic circulating breast cancer cells with tumor size at the time when the blood samples were collected.
Results: [4]
Human breast cancer xenograft tumors derived from MDA-MB-231, BT474, or SKBR-3 cells were visualized on near-infrared fluorescence imaging of the tumor-bearing mice injected with 2-DG 750. Hypermetabolic circulating breast cancer cells with increased uptake of fluorescent 2-NBDG were detected in the blood samples from tumor-bearing mice and visualized by fluorescence imaging, but not in the blood samples from normal control mice. The number of hypermetabolic circulating breast cancer cells increased along with growth of xenograft tumors, with the number of hypermetabolic circulating breast cancer cells detected in the mice bearing MDA-MB231 xenografts larger than those in the mice bearing BT474 or SKBR-3 xenograft tumors.
参考文献
[1]. Yamada K, et al. A real-time method of imaging glucose uptake in single, living mammalian cells. Nat Protoc. 2007;2(3):753-62.
[2]. Zou C, et al. 2-NBDG as a fluorescent indicator for direct glucose uptake measurement. J Biochem Biophys Methods. 2005 Sep 30;64(3):207-15.
[3]. J Fluoresc. 2013 Jan;23(1):213-20. doi: 10.1007/s10895-012-1136-z.
其他信息
This protocol details a method for monitoring glucose uptake into single, living mammalian cells using a fluorescent D-glucose derivative, 2-[N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino]-2-deoxy-D-glucose (2-NBDG), as a tracer. The specifically designed chamber and superfusion system for evaluating 2-NBDG uptake into cells in real time can be combined with other fluorescent methods such as Ca2+ imaging and the subsequent immunofluorescent classification of cells exhibiting divergent 2-NBDG uptake. The whole protocol, including immunocytochemistry, can be completed within 2 d (except for cell culture). The procedure for 2-NBDG synthesis is also presented.[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C12H14N4O8
分子量
342.26200
精确质量
342.08117
元素分析
C, 42.11; H, 4.12; N, 16.37; O, 37.40
CAS号
186689-07-6
相关CAS号
2376921-70-7 (1-NBDG)
PubChem CID
6711157
外观&性状
Typically exists as light yellow to orange solids at room temperature
密度
1.750±0.06 g/cm3
沸点
707.6±70.0 °C at 760 mmHg
闪点
381.7±35.7 °C
蒸汽压
0.0±2.4 mmHg at 25°C
折射率
1.77
LogP
-0.41
tPSA
186.92
SMILES
O=C[C@H](NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C2=NON=C21)[C@H]([C@@H]([C@@H](CO)O)O)O
InChi Key
QUTFFEUUGHUPQC-ILWYWAAHSA-N
InChi Code
InChI=1S/C12H14N4O8/c17-3-6(11(20)12(21)8(19)4-18)13-5-1-2-7(16(22)23)10-9(5)14-24-15-10/h1-3,6,8,11-13,18-21H,4H2/t6-,8+,11+,12+/m0/s1
化学名
2-deoxy-2-[(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-yl)amino]-D-glucose
别名
2-NBDG; 2NBDG; 2 NBDG
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Note: This product requires protection from light (avoid light exposure) during transportation and storage.
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
H2O : ~5 mg/mL (~14.61 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: 3.33 mg/mL (9.73 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。 (<60°C).

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.9218 mL 14.6088 mL 29.2176 mL
5 mM 0.5844 mL 2.9218 mL 5.8435 mL
10 mM 0.2922 mL 1.4609 mL 2.9218 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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