1-NBDG

别名: 1-NBDG; 1NBDG; 1 NBDG; (2R,3S,4S,5R,6R)-2-(Hydroxymethyl)-6-((7-nitrobenzo[c][1,2,5]oxadiazol-4-yl)amino)tetrahydro-2H-pyran-3,4,5-triol; 2376921-70-7; 1-NBDG; (2R,3S,4S,5R,6R)-2-(Hydroxymethyl)-6-((7-nitrobenzo[c][1,2,5]oxadiazol-4-yl)amino)tetrahydro-2H-pyran-3,4,5-triol
目录号: V41383 纯度: ≥98%
1-NBDG 是 2-NBDG 的类似物,是葡萄糖的荧光类似物,也是用于测量细菌和活哺乳动物细胞以及肿瘤活检中葡萄糖摄取的指示剂。
1-NBDG CAS号: 2376921-70-7
产品类别: New12
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产品描述
1-NBDG是2-NBDG的类似物,是一种葡萄糖的荧光类似物,可用作指示剂,用于测量细菌和活体哺乳动物细胞以及肿瘤活检中葡萄糖的摄取。在大肠杆菌中,D-葡萄糖可竞争性抑制1-NBDG的摄取,而L-葡萄糖或蔗糖则无此作用。与2-NBDG(其是GLUTs的良好底物,但不是SGLTs的底物)不同,1-NBDG可被GLUTs和SGLTs转运。因此,1-NBDG可用于筛选SGLT1和SGLT2抑制剂。钠偶联葡萄糖共转运蛋白SGLT1和SGLT2分别在肠道吸收和肾脏重吸收葡萄糖方面发挥重要作用。阻断SGLT2是降低血糖水平的一种新机制,其作用机制是通过抑制肾脏对葡萄糖的重吸收。目前,选择性SGLT2抑制剂正处于研发阶段,用于治疗2型糖尿病。此外,已有报道指出SGLT1功能紊乱与心肌病和癌症相关。因此,SGLT1和SGLT2都是潜在的治疗靶点。本文报道了一种基于细胞的非放射性SGLT抑制剂筛选方法。该方法使用瞬时表达人SGLT1 (hSGLT1)的COS-7细胞、稳定表达人SGLT2 (hSGLT2)的CHO-K1细胞以及一种新型荧光D-葡萄糖类似物1-NBDG作为底物。我们的数据表明,1-NBDG可以很好地替代目前使用的同位素标记SGLT底物14C-AMG。 1-NBDG 转运的米氏常数 (0.55 mM) 与 D-葡萄糖 (0.51 mM) 和 AMG (0.40 mM) 通过 hSGLT1 转运的米氏常数相似。在我们基于细胞的系统中,使用 1-NBDG 和 14C-AMG 测得的 SGLT 抑制剂根皮苷对 hSGLT1 的 IC50 值相同 (0.11 μM)。使用 1-NBDG 测得的达格列净(一种已知的选择性 SGLT2 抑制剂)对 hSGLT2 和 hSGLT1 的 IC50 值分别为 1.86 nM 和 880 nM,与已发表的使用 14C-AMG 获得的结果相当。与 14C-AMG 相比,使用 1-NBDG 更经济、方便,并且可能更灵敏。综上所述,使用1-NBDG的非放射性系统已被验证为一种快速可靠的SGLT1和SGLT2抑制剂筛选方法。
1-NBDG(1-(N-(7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑-4-基))-氨基-1-脱氧葡萄糖)是一种荧光葡萄糖类似物,是2-NBDG的类似物,可用作指示剂,用于测量细菌、活体哺乳动物细胞和肿瘤活检组织中的葡萄糖摄取。该化合物是一种新合成的荧光葡萄糖衍生物,能够实时监测葡萄糖的转运和代谢。1-NBDG的摄取可被D-葡萄糖竞争性抑制,但不受L-葡萄糖或蔗糖的抑制,这表明其对葡萄糖转运蛋白具有特异性。1-NBDG已被用于SGLT1和SGLT2抑制剂的筛选以及各种细胞类型中葡萄糖摄取的研究。
生物活性&实验参考方法
靶点
Fluorescent dye;
Sodium - coupled glucose cotransporters (SGLT1 and SGLT2) [1]
Glucose transporters (GLUTs) [1]
1-NBDG is a fluorescent glucose analog that is transported into cells via glucose transporters (GLUTs) and sodium-dependent glucose transporters (SGLTs). Once inside the cell, the fluorescent NBD moiety allows for detection by fluorescence microscopy or flow cytometry. The compound's uptake is competitively inhibited by D-glucose, confirming its specificity for glucose transport pathways. 1-NBDG can be used to monitor glucose uptake in real-time in living cells, making it a valuable tool for studying glucose metabolism, insulin signaling, and the function of glucose transporters in health and disease.
体外研究 (In Vitro)
本研究使用1-NBDG作为荧光葡萄糖类似物,分别在瞬时转染pcDNAhSGLT1的COS-7细胞和稳定表达hSGLT2的CHO-K1细胞中进行葡萄糖摄取实验,以筛选SGLT1和SGLT2抑制剂。结果表明,使用瞬时转染pcDNAhSGLT2的COS-7细胞(hSGLT2/COS-7)筛选SGLT2抑制剂同样可行。此外,该方法还从24孔板扩展至96孔板,适用于高通量筛选。经验证的1-NBDG方法被用于测试樟科约60种植物的195份粗甲醇提取物,以寻找新型天然SGLT抑制剂。最终,从肉桂(Cinnamomum macrostemon)的叶片中鉴定出两种高效的天然SGLT1和SGLT2抑制剂(Yang等,论文撰写中)。这两种化合物(I 和 II)的 IC50 值均在纳摩尔范围内,与根皮苷相当。根皮苷是目前已知的最有效的天然 SGLT 抑制剂,在我们的检测系统中,其对 SGLT1 的 IC50 值为 110 ± 10.2 nM,对 SGLT2 的 IC50 值为 9.65 ± 1.83 nM[1]。
葡萄糖是细胞的重要能量来源。葡萄糖的转运由两种类型的葡萄糖转运蛋白介导:主动钠偶联葡萄糖共转运蛋白 (SGLT) 和被动葡萄糖转运蛋白 (GLUT)。开发一种简便的细胞葡萄糖摄取检测方法对研究具有重要价值。1-(N-(7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑-4-基)氨基)-1-脱氧-D-葡萄糖 (1-NBDG) 是一种新合成的荧光葡萄糖类似物。与 2-NBDG(一种 GLUT 的良好底物,但不是 SGLT 的底物)不同,1-NBDG 可被 GLUT 和 SGLT 转运。因此,1-NBDG 可用于筛选 SGLT1 和 SGLT2 抑制剂。本文进一步表征了 1-NBDG 并将其与 2-NBDG 进行了比较。在碱性条件下,1-NBDG 和 2-NBDG 的荧光均被猝灭,但只有 1-NBDG 的荧光在中和后能够恢复。高效液相色谱 (HPLC) 分析表明,2-NBDG 在 NaOH 溶液中分解导致荧光丧失,而 1-NBDG 保持完整。因此,细胞摄取后,只需用 NaOH 溶液裂解细胞,然后用 HCl 溶液中和,即可在酶标仪上检测到 1-NBDG 的荧光。细胞裂解后,1-NBDG 的荧光稳定性可持续长达 5 小时。然而,与2-NBDG类似,细胞内1-NBDG不稳定,荧光强度在一小时内显著降低。1-NBDG的摄取可在单细胞水平上检测到,SGLT抑制剂对1-NBDG摄取的抑制作用可通过流式细胞术检测。此外,1-NBDG已成功应用于高通量细胞筛选方法,用于筛选潜在的SGLT1和SGLT2抑制剂。研究人员评估了从植物中纯化的67种黄酮类化合物和黄酮苷的SGLT抑制活性,并鉴定出几种选择性SGLT1抑制剂、选择性SGLT2抑制剂以及SGLT1/2双重抑制剂。构效关系分析表明,糖基残基至关重要,因为苷元不具有SGLT抑制活性。此外,糖苷键及其在糖苷配基上的取代位置不仅影响抑制活性,还影响对SGLT1和SGLT2的选择性[1]。
- 细胞葡萄糖摄取:1-NBDG可通过SGLT1、SGLT2和GLUTs转运进入细胞。它可用于检测细胞介导的葡萄糖摄取。1-NBDG的荧光在碱性条件下会被猝灭,中和后可恢复,这使得细胞裂解后可以轻松检测细胞内1-NBDG的水平。细胞裂解后,1-NBDG 在细胞外可稳定存在长达 5 小时,但细胞内 1-NBDG 不稳定,其荧光强度在 1 小时内显著下降 [1]
- SGLT 抑制剂筛选:1-NBDG 被用于一种高通量细胞筛选方法,以筛选潜在的 SGLT1 和 SGLT2 抑制剂。通过测量测试化合物对 1-NBDG 摄取的抑制作用,研究人员评估了 67 种黄酮类化合物和黄酮苷,并鉴定出几种选择性 SGLT1 抑制剂、选择性 SGLT2 抑制剂以及双重 SGLT1/2 抑制剂 [1]
1-NBDG 是一种荧光葡萄糖类似物,可用作指示剂,用于测量细菌、活体哺乳动物细胞以及肿瘤活检组织中的葡萄糖摄取。在大肠杆菌中,1-NBDG 的摄取可被 D-葡萄糖竞争性抑制,但不能被 L-葡萄糖或蔗糖抑制。 1-NBDG已被用于在瞬时转染hSGLT1的COS-7细胞和稳定表达hSGLT2的CHO-K1细胞中进行葡萄糖摄取测定,以筛选SGLT1和SGLT2抑制剂。该化合物能够检测单细胞水平的葡萄糖摄取。
体内研究 (In Vivo)
在体内,1-NBDG可用于肿瘤活检组织中葡萄糖摄取的成像,并可能用于体内葡萄糖代谢的成像。NBD部分的荧光特性使其能够通过荧光成像技术进行检测。该化合物已被用于肿瘤活检样本中葡萄糖摄取的评估,这可能在癌症诊断和监测方面具有应用前景。然而,由于1-NBDG主要是一种用于体外和离体研究的工具,因此详细的体内成像数据仍然有限。
酶活实验
测定 1-NBDG 和 2-NBDG 在碱性、酸性条件或不同 pH 值下的稳定性。[1]
将 1-NBDG 或 2-NBDG 稀释于 pH 值分别为 6.8、7.5、8.0、8.8 和 9.8 的 0.2 N NaOH、0.2 N HCl 或 20 mM Tris 缓冲液中。使用 SpectraMax Paradigm 多功能微孔板读数仪(Molecular Devices)在黑色 96 孔板中检测荧光,1-NBDG 的激发波长为 458 nm,发射波长为 528 nm (458/528 nm),2-NBDG 的激发波长为 475/550 nm。
HPLC 分析[1]
使用 Mightysil RP-18 GP 色谱柱进行 HPLC 分析,流动相为水和乙腈的梯度,从 4 分钟时的 100% 水到 30 分钟时的 100% 乙腈,流速为 1 mL/min。注入10微升样品,并用紫外/可见光检测器(设定波长为475 nm)进行检测。
1-NBDG和2-NBDG细胞内稳定性的测定[1]
将SCC131细胞以1 × 10⁵个细胞/孔的密度接种于24孔板中,并在第二天进行葡萄糖摄取测定。用500 μL温热的胆碱缓冲液洗涤细胞两次,然后用200 μL浓度为160 μM的1-NBDG或2-NBDG钠缓冲液孵育2小时。随后用温热的胆碱缓冲液洗涤细胞两次,置于 500 μL PBS 中,在 37 °C 的 CO2 培养箱中培养 0–5 小时,然后用 600 μL 中性缓冲液裂解细胞,该缓冲液含有 1% 脱氧胆酸钠、1% NP-40、40 mM KCl 和 20 mM Tris-HCl(pH 7.5)。取 100 μL 细胞裂解液转移至黑色 96 孔板中,用于检测荧光强度。
使用 1-NBDG 进行葡萄糖摄取实验的方法是将细胞与荧光葡萄糖类似物孵育。将细胞接种于多孔板或盖玻片上,并在不含葡萄糖的缓冲液中与 1-NBDG(通常为 10–100 μM)于 37 °C 孵育 10–60 分钟。孵育后,用冷缓冲液洗涤细胞以去除细胞外化合物。荧光强度可通过荧光酶标仪(激发波长约 465 nm,发射波长约 540 nm)或流式细胞仪进行测量。在竞争性研究中,细胞在加入 1-NBDG 前,先与不同浓度的 D-葡萄糖或其他糖类进行预孵育。SGLT 抑制剂筛选则使用表达 SGLT1 或 SGLT2 的细胞。
细胞实验
基于细胞的SGLT1和SGLT2抑制剂筛选方法(使用1-NBDG)[1]
将COS-7细胞按照先前描述的方法转染pcDNAhSGLT1或pcDNAhSGLT2,并在第二天以3–5 × 10⁴个细胞/孔的密度接种于96孔板中。细胞过夜贴壁并达到100%汇合后,在含有待测化合物和100或160 μM 1-NBDG的钠缓冲液中,于37 °C孵育1.5小时(SGLT1)或2小时(SGLT2),进行葡萄糖摄取测定。用150 μL温热的胆碱缓冲液冲洗96孔板中的细胞,然后加入50 μL含有1-NBDG和待测化合物的钠缓冲液进行孵育。孵育后,用冷胆碱缓冲液洗涤细胞两次,在显微镜下观察细胞状态,然后用75 μL 0.2 N NaOH裂解细胞,并用75 μL 0.2 N HCl中和。取100 μL裂解液转移至黑色96孔板进行荧光检测。根皮苷用作SGLT抑制剂的阳性对照,1-NBDG溶于胆碱缓冲液中用于检测GLUTs介导的钠非依赖性葡萄糖摄取。在不含 1-NBDG 的钠缓冲液中培养细胞,用于测量自发荧光(细胞背景)。
流式细胞术检测葡萄糖摄取[1]
将处于指数生长期的 6 孔板细胞用 1 mL 温热的胆碱缓冲液洗涤两次,然后在 37 °C 下与 500 μL 浓度为 100 μM 的 1-NBDG 或 2-NBDG(溶于钠缓冲液或胆碱缓冲液)孵育 30 分钟。之后,用温热的胆碱缓冲液洗涤细胞 3 次,并用胰蛋白酶消化收集细胞。离心后,将细胞重悬于冰冷的 PBS 中,并使用 FACSCalibur 流式细胞仪进行分析,FL1 通道的激发波长为 488 nm。使用根皮苷抑制 hSGLT1 介导的葡萄糖转运。使用 Flowing Software 2 进行定量分析。
- 细胞摄取实验:将细胞与适当浓度的 1-NBDG 孵育。孵育一定时间后,洗涤细胞以去除细胞外 1-NBDG。然后,用 NaOH 溶液裂解细胞,并用 HCl 中和后测量荧光强度。荧光强度反映细胞摄取的 1-NBDG 量。1-NBDG 的摄取也可以通过流式细胞术在单细胞水平上检测 [1]。
- SGLT 抑制剂筛选实验:将表达 SGLT1 或 SGLT2 的细胞与不同的测试化合物和 1-NBDG 孵育。在特定的孵育时间后,使用上述细胞裂解和荧光测量方法测量 1-NBDG 的摄取量。比较在有无测试化合物存在下 1-NBDG 的摄取量,以评估测试化合物对 SGLT1 或 SGLT2 的抑制作用 [1]。1-NBDG 的细胞测定采用多种细胞类型,包括 COS-7 细胞、CHO-K1 细胞、原代细胞和癌细胞系。将细胞培养于合适的培养基中,并接种于 96 孔或 24 孔板中。对于葡萄糖摄取测定,用无葡萄糖缓冲液洗涤细胞,并与 1-NBDG (10-100 μM) 孵育 10-60 分钟。使用酶标仪或荧光显微镜测量荧光强度。对于抑制剂研究,在加入 1-NBDG 之前,先将细胞与 SGLT 或 GLUT 抑制剂预孵育。对于细菌测定,将大肠杆菌或其他细菌与 1-NBDG 孵育,并测量荧光强度。
动物实验
对于体内或体外应用,1-NBDG 可用于肿瘤活检样本。将新鲜肿瘤组织与 1-NBDG(50-200 μM)在无葡萄糖缓冲液中于 37°C 孵育 30-60 分钟。然后制备组织切片,并通过显微镜观察荧光,以评估肿瘤不同区域的葡萄糖摄取情况。对于动物研究,可通过静脉或腹腔注射给药 1-NBDG,随后收集组织并进行荧光成像。然而,已发表的详细体内实验方案有限。
药代性质 (ADME/PK)
1-NBDG 的分子式为 C12H14N4O8,分子量约为 342.26。它是一种荧光葡萄糖类似物,最大激发波长约为 465 nm,最大发射波长约为 540 nm。该化合物可溶于 DMSO 和水性缓冲液。为保证其长期稳定性,应避光保存于 -20°C。在葡萄糖摄取测定中,该化合物的常用浓度为 10-100 μM。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
由于1-NBDG是一种用于成像应用的科研试剂,因此其毒理学数据有限。该化合物的使用浓度相对较低,暴露时间较短,在标准检测条件下通常被认为无毒。与所有荧光探针一样,应遵循标准的实验室安全预防措施。操作该化合物时应佩戴适当的个人防护装备,并避光保存。
参考文献
[1]. Characterization of a fluorescent glucose derivative 1-NBDG and its application in the identification of natural SGLT1/2 inhibitors. J Food Drug Anal. 2021; 29(3): 521–532.
[2]. Development of a novel non-radioactive cell-based method for the screening of SGLT1 and SGLT2 inhibitors using 1-NBDG. Mol Biosyst. 2013 Aug;9(8):2010-20. doi: 10.1039/c3mb70060g.
其他信息
葡萄糖是细胞重要的能量来源。葡萄糖的转运由两种类型的葡萄糖转运蛋白介导:主动钠偶联葡萄糖协同转运蛋白(SGLT)和被动葡萄糖转运蛋白(GLUT)。开发一种简便的细胞葡萄糖摄取检测方法具有重要的研究价值。1-(N-(7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑-4-基)氨基)-1-脱氧-D-葡萄糖 (1-NBDG) 是一种新合成的荧光葡萄糖类似物。与 2-NBDG(GLUT 的良好底物,但也是 SGLT 的底物)不同,1-NBDG 可被 GLUT 和 SGLT 转运。因此,1-NBDG 可用于筛选 SGLT1 和 SGLT2 抑制剂。本文进一步表征了 1-NBDG,并将其与 2-NBDG 进行了比较。 1-NBDG 和 2-NBDG 的荧光在碱性条件下均被猝灭,但中和后仅 1-NBDG 的荧光得以恢复。高效液相色谱 (HPLC) 分析表明,2-NBDG 在 NaOH 溶液中分解,导致荧光丧失,而 1-NBDG 保持完整。因此,细胞摄取后,只需用 NaOH 溶液裂解细胞,再用 HCl 溶液中和,即可在微孔板读数仪上检测到 1-NBDG 的荧光。细胞裂解后 1-NBDG 的荧光稳定性可持续长达 5 小时;然而,与 2-NBDG 类似,细胞内 1-NBDG 的稳定性较差,荧光强度在 1 小时内显著下降。1-NBDG 的摄取也可在单细胞水平上进行检测,SGLT 抑制剂对 1-NBDG 摄取的抑制作用可通过流式细胞术进行检测。此外,1-NBDG 已成功应用于高通量细胞筛选方法,用于筛选潜在的 SGLT1 和 SGLT2 抑制剂。研究人员评估了从植物中纯化的 67 种黄酮类化合物和黄酮苷的 SGLT 抑制活性,并鉴定出几种选择性 SGLT1 抑制剂、选择性 SGLT2 抑制剂和双重 SGLT1/2 抑制剂。构效关系分析表明,糖基残基至关重要,因为苷元本身不具有 SGLT 抑制活性。此外,糖苷键及其在苷元上的取代位置不仅影响抑制活性,还影响对 SGLT1 和 SGLT2 的选择性。[1] 1-NBDG 是一种荧光葡萄糖类似物。葡萄糖转运由 SGLT 和 GLUT 介导,它们是开发抗糖尿病和抗癌药物的重要靶点。 1-NBDG 可用于筛选 SGLT 抑制剂,这对相关药物的研发具有重要意义。构效关系分析表明,糖基残基对 SGLT 抑制剂的抑制活性至关重要,糖苷键连接方式和取代位置会影响抑制活性和选择性。[1] 1-NBDG 是一种新合成的荧光葡萄糖衍生物,是 2-NBDG 的类似物。它可用作指示剂,用于检测细菌、活体哺乳动物细胞以及肿瘤活检组织中的葡萄糖摄取。该化合物已被用于筛选 SGLT1 和 SGLT2 抑制剂。其摄取可被 D-葡萄糖竞争性抑制,但不受 L-葡萄糖或蔗糖的抑制。1-NBDG 是研究健康和疾病状态下葡萄糖代谢和转运蛋白功能的重要工具。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C12H14N4O8
分子量
342.261562824249
精确质量
342.0812
元素分析
C, 42.11; H, 4.12; N, 16.37; O, 37.40
CAS号
2376921-70-7
相关CAS号
186689-07-6 (2-NBDG)
外观&性状
Typically exists as solids at room temperature
LogP
-1.1
tPSA
187Ų
氢键供体(HBD)数目
5
氢键受体(HBA)数目
11
可旋转键数目(RBC)
3
重原子数目
24
分子复杂度/Complexity
465
定义原子立体中心数目
5
SMILES
O1[C@H]([C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1CO)O)O)O)NC1=CC=C(C2C1=NON=2)[N+](=O)[O-]
InChi Key
ZXXYZPVBLJMGPU-UJDFUTJXSA-N
InChi Code
InChI=1S/C12H14N4O8/c17-3-6-9(18)10(19)11(20)12(23-6)13-4-1-2-5(16(21)22)8-7(4)14-24-15-8/h1-2,6,9-13,17-20H,3H2/t6-,9-,10+,11-,12-/m1/s1
化学名
(2R,3S,4S,5R,6R)-2-(hydroxymethyl)-6-[(4-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-7-yl)amino]oxane-3,4,5-triol
别名
1-NBDG; 1NBDG; 1 NBDG; (2R,3S,4S,5R,6R)-2-(Hydroxymethyl)-6-((7-nitrobenzo[c][1,2,5]oxadiazol-4-yl)amino)tetrahydro-2H-pyran-3,4,5-triol; 2376921-70-7; 1-NBDG; (2R,3S,4S,5R,6R)-2-(Hydroxymethyl)-6-((7-nitrobenzo[c][1,2,5]oxadiazol-4-yl)amino)tetrahydro-2H-pyran-3,4,5-triol
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: > 10 mM
H2O : > 10 mM (estimate)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.9218 mL 14.6088 mL 29.2176 mL
5 mM 0.5844 mL 2.9218 mL 5.8435 mL
10 mM 0.2922 mL 1.4609 mL 2.9218 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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