| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Fluorescent dye;
Sodium - coupled glucose cotransporters (SGLT1 and SGLT2) [1] Glucose transporters (GLUTs) [1] 1-NBDG is a fluorescent glucose analog that is transported into cells via glucose transporters (GLUTs) and sodium-dependent glucose transporters (SGLTs). Once inside the cell, the fluorescent NBD moiety allows for detection by fluorescence microscopy or flow cytometry. The compound's uptake is competitively inhibited by D-glucose, confirming its specificity for glucose transport pathways. 1-NBDG can be used to monitor glucose uptake in real-time in living cells, making it a valuable tool for studying glucose metabolism, insulin signaling, and the function of glucose transporters in health and disease. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
本研究使用1-NBDG作为荧光葡萄糖类似物,分别在瞬时转染pcDNAhSGLT1的COS-7细胞和稳定表达hSGLT2的CHO-K1细胞中进行葡萄糖摄取实验,以筛选SGLT1和SGLT2抑制剂。结果表明,使用瞬时转染pcDNAhSGLT2的COS-7细胞(hSGLT2/COS-7)筛选SGLT2抑制剂同样可行。此外,该方法还从24孔板扩展至96孔板,适用于高通量筛选。经验证的1-NBDG方法被用于测试樟科约60种植物的195份粗甲醇提取物,以寻找新型天然SGLT抑制剂。最终,从肉桂(Cinnamomum macrostemon)的叶片中鉴定出两种高效的天然SGLT1和SGLT2抑制剂(Yang等,论文撰写中)。这两种化合物(I 和 II)的 IC50 值均在纳摩尔范围内,与根皮苷相当。根皮苷是目前已知的最有效的天然 SGLT 抑制剂,在我们的检测系统中,其对 SGLT1 的 IC50 值为 110 ± 10.2 nM,对 SGLT2 的 IC50 值为 9.65 ± 1.83 nM[1]。
葡萄糖是细胞的重要能量来源。葡萄糖的转运由两种类型的葡萄糖转运蛋白介导:主动钠偶联葡萄糖共转运蛋白 (SGLT) 和被动葡萄糖转运蛋白 (GLUT)。开发一种简便的细胞葡萄糖摄取检测方法对研究具有重要价值。1-(N-(7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑-4-基)氨基)-1-脱氧-D-葡萄糖 (1-NBDG) 是一种新合成的荧光葡萄糖类似物。与 2-NBDG(一种 GLUT 的良好底物,但不是 SGLT 的底物)不同,1-NBDG 可被 GLUT 和 SGLT 转运。因此,1-NBDG 可用于筛选 SGLT1 和 SGLT2 抑制剂。本文进一步表征了 1-NBDG 并将其与 2-NBDG 进行了比较。在碱性条件下,1-NBDG 和 2-NBDG 的荧光均被猝灭,但只有 1-NBDG 的荧光在中和后能够恢复。高效液相色谱 (HPLC) 分析表明,2-NBDG 在 NaOH 溶液中分解导致荧光丧失,而 1-NBDG 保持完整。因此,细胞摄取后,只需用 NaOH 溶液裂解细胞,然后用 HCl 溶液中和,即可在酶标仪上检测到 1-NBDG 的荧光。细胞裂解后,1-NBDG 的荧光稳定性可持续长达 5 小时。然而,与2-NBDG类似,细胞内1-NBDG不稳定,荧光强度在一小时内显著降低。1-NBDG的摄取可在单细胞水平上检测到,SGLT抑制剂对1-NBDG摄取的抑制作用可通过流式细胞术检测。此外,1-NBDG已成功应用于高通量细胞筛选方法,用于筛选潜在的SGLT1和SGLT2抑制剂。研究人员评估了从植物中纯化的67种黄酮类化合物和黄酮苷的SGLT抑制活性,并鉴定出几种选择性SGLT1抑制剂、选择性SGLT2抑制剂以及SGLT1/2双重抑制剂。构效关系分析表明,糖基残基至关重要,因为苷元不具有SGLT抑制活性。此外,糖苷键及其在糖苷配基上的取代位置不仅影响抑制活性,还影响对SGLT1和SGLT2的选择性[1]。 - 细胞葡萄糖摄取:1-NBDG可通过SGLT1、SGLT2和GLUTs转运进入细胞。它可用于检测细胞介导的葡萄糖摄取。1-NBDG的荧光在碱性条件下会被猝灭,中和后可恢复,这使得细胞裂解后可以轻松检测细胞内1-NBDG的水平。细胞裂解后,1-NBDG 在细胞外可稳定存在长达 5 小时,但细胞内 1-NBDG 不稳定,其荧光强度在 1 小时内显著下降 [1] - SGLT 抑制剂筛选:1-NBDG 被用于一种高通量细胞筛选方法,以筛选潜在的 SGLT1 和 SGLT2 抑制剂。通过测量测试化合物对 1-NBDG 摄取的抑制作用,研究人员评估了 67 种黄酮类化合物和黄酮苷,并鉴定出几种选择性 SGLT1 抑制剂、选择性 SGLT2 抑制剂以及双重 SGLT1/2 抑制剂 [1] 1-NBDG 是一种荧光葡萄糖类似物,可用作指示剂,用于测量细菌、活体哺乳动物细胞以及肿瘤活检组织中的葡萄糖摄取。在大肠杆菌中,1-NBDG 的摄取可被 D-葡萄糖竞争性抑制,但不能被 L-葡萄糖或蔗糖抑制。 1-NBDG已被用于在瞬时转染hSGLT1的COS-7细胞和稳定表达hSGLT2的CHO-K1细胞中进行葡萄糖摄取测定,以筛选SGLT1和SGLT2抑制剂。该化合物能够检测单细胞水平的葡萄糖摄取。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在体内,1-NBDG可用于肿瘤活检组织中葡萄糖摄取的成像,并可能用于体内葡萄糖代谢的成像。NBD部分的荧光特性使其能够通过荧光成像技术进行检测。该化合物已被用于肿瘤活检样本中葡萄糖摄取的评估,这可能在癌症诊断和监测方面具有应用前景。然而,由于1-NBDG主要是一种用于体外和离体研究的工具,因此详细的体内成像数据仍然有限。
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| 酶活实验 |
测定 1-NBDG 和 2-NBDG 在碱性、酸性条件或不同 pH 值下的稳定性。[1]
将 1-NBDG 或 2-NBDG 稀释于 pH 值分别为 6.8、7.5、8.0、8.8 和 9.8 的 0.2 N NaOH、0.2 N HCl 或 20 mM Tris 缓冲液中。使用 SpectraMax Paradigm 多功能微孔板读数仪(Molecular Devices)在黑色 96 孔板中检测荧光,1-NBDG 的激发波长为 458 nm,发射波长为 528 nm (458/528 nm),2-NBDG 的激发波长为 475/550 nm。 HPLC 分析[1] 使用 Mightysil RP-18 GP 色谱柱进行 HPLC 分析,流动相为水和乙腈的梯度,从 4 分钟时的 100% 水到 30 分钟时的 100% 乙腈,流速为 1 mL/min。注入10微升样品,并用紫外/可见光检测器(设定波长为475 nm)进行检测。 1-NBDG和2-NBDG细胞内稳定性的测定[1] 将SCC131细胞以1 × 10⁵个细胞/孔的密度接种于24孔板中,并在第二天进行葡萄糖摄取测定。用500 μL温热的胆碱缓冲液洗涤细胞两次,然后用200 μL浓度为160 μM的1-NBDG或2-NBDG钠缓冲液孵育2小时。随后用温热的胆碱缓冲液洗涤细胞两次,置于 500 μL PBS 中,在 37 °C 的 CO2 培养箱中培养 0–5 小时,然后用 600 μL 中性缓冲液裂解细胞,该缓冲液含有 1% 脱氧胆酸钠、1% NP-40、40 mM KCl 和 20 mM Tris-HCl(pH 7.5)。取 100 μL 细胞裂解液转移至黑色 96 孔板中,用于检测荧光强度。 使用 1-NBDG 进行葡萄糖摄取实验的方法是将细胞与荧光葡萄糖类似物孵育。将细胞接种于多孔板或盖玻片上,并在不含葡萄糖的缓冲液中与 1-NBDG(通常为 10–100 μM)于 37 °C 孵育 10–60 分钟。孵育后,用冷缓冲液洗涤细胞以去除细胞外化合物。荧光强度可通过荧光酶标仪(激发波长约 465 nm,发射波长约 540 nm)或流式细胞仪进行测量。在竞争性研究中,细胞在加入 1-NBDG 前,先与不同浓度的 D-葡萄糖或其他糖类进行预孵育。SGLT 抑制剂筛选则使用表达 SGLT1 或 SGLT2 的细胞。 |
| 细胞实验 |
基于细胞的SGLT1和SGLT2抑制剂筛选方法(使用1-NBDG)[1]
将COS-7细胞按照先前描述的方法转染pcDNAhSGLT1或pcDNAhSGLT2,并在第二天以3–5 × 10⁴个细胞/孔的密度接种于96孔板中。细胞过夜贴壁并达到100%汇合后,在含有待测化合物和100或160 μM 1-NBDG的钠缓冲液中,于37 °C孵育1.5小时(SGLT1)或2小时(SGLT2),进行葡萄糖摄取测定。用150 μL温热的胆碱缓冲液冲洗96孔板中的细胞,然后加入50 μL含有1-NBDG和待测化合物的钠缓冲液进行孵育。孵育后,用冷胆碱缓冲液洗涤细胞两次,在显微镜下观察细胞状态,然后用75 μL 0.2 N NaOH裂解细胞,并用75 μL 0.2 N HCl中和。取100 μL裂解液转移至黑色96孔板进行荧光检测。根皮苷用作SGLT抑制剂的阳性对照,1-NBDG溶于胆碱缓冲液中用于检测GLUTs介导的钠非依赖性葡萄糖摄取。在不含 1-NBDG 的钠缓冲液中培养细胞,用于测量自发荧光(细胞背景)。 流式细胞术检测葡萄糖摄取[1] 将处于指数生长期的 6 孔板细胞用 1 mL 温热的胆碱缓冲液洗涤两次,然后在 37 °C 下与 500 μL 浓度为 100 μM 的 1-NBDG 或 2-NBDG(溶于钠缓冲液或胆碱缓冲液)孵育 30 分钟。之后,用温热的胆碱缓冲液洗涤细胞 3 次,并用胰蛋白酶消化收集细胞。离心后,将细胞重悬于冰冷的 PBS 中,并使用 FACSCalibur 流式细胞仪进行分析,FL1 通道的激发波长为 488 nm。使用根皮苷抑制 hSGLT1 介导的葡萄糖转运。使用 Flowing Software 2 进行定量分析。 - 细胞摄取实验:将细胞与适当浓度的 1-NBDG 孵育。孵育一定时间后,洗涤细胞以去除细胞外 1-NBDG。然后,用 NaOH 溶液裂解细胞,并用 HCl 中和后测量荧光强度。荧光强度反映细胞摄取的 1-NBDG 量。1-NBDG 的摄取也可以通过流式细胞术在单细胞水平上检测 [1]。 - SGLT 抑制剂筛选实验:将表达 SGLT1 或 SGLT2 的细胞与不同的测试化合物和 1-NBDG 孵育。在特定的孵育时间后,使用上述细胞裂解和荧光测量方法测量 1-NBDG 的摄取量。比较在有无测试化合物存在下 1-NBDG 的摄取量,以评估测试化合物对 SGLT1 或 SGLT2 的抑制作用 [1]。1-NBDG 的细胞测定采用多种细胞类型,包括 COS-7 细胞、CHO-K1 细胞、原代细胞和癌细胞系。将细胞培养于合适的培养基中,并接种于 96 孔或 24 孔板中。对于葡萄糖摄取测定,用无葡萄糖缓冲液洗涤细胞,并与 1-NBDG (10-100 μM) 孵育 10-60 分钟。使用酶标仪或荧光显微镜测量荧光强度。对于抑制剂研究,在加入 1-NBDG 之前,先将细胞与 SGLT 或 GLUT 抑制剂预孵育。对于细菌测定,将大肠杆菌或其他细菌与 1-NBDG 孵育,并测量荧光强度。 |
| 动物实验 |
对于体内或体外应用,1-NBDG 可用于肿瘤活检样本。将新鲜肿瘤组织与 1-NBDG(50-200 μM)在无葡萄糖缓冲液中于 37°C 孵育 30-60 分钟。然后制备组织切片,并通过显微镜观察荧光,以评估肿瘤不同区域的葡萄糖摄取情况。对于动物研究,可通过静脉或腹腔注射给药 1-NBDG,随后收集组织并进行荧光成像。然而,已发表的详细体内实验方案有限。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
1-NBDG 的分子式为 C12H14N4O8,分子量约为 342.26。它是一种荧光葡萄糖类似物,最大激发波长约为 465 nm,最大发射波长约为 540 nm。该化合物可溶于 DMSO 和水性缓冲液。为保证其长期稳定性,应避光保存于 -20°C。在葡萄糖摄取测定中,该化合物的常用浓度为 10-100 μM。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
由于1-NBDG是一种用于成像应用的科研试剂,因此其毒理学数据有限。该化合物的使用浓度相对较低,暴露时间较短,在标准检测条件下通常被认为无毒。与所有荧光探针一样,应遵循标准的实验室安全预防措施。操作该化合物时应佩戴适当的个人防护装备,并避光保存。
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| 参考文献 |
[1]. Characterization of a fluorescent glucose derivative 1-NBDG and its application in the identification of natural SGLT1/2 inhibitors. J Food Drug Anal. 2021; 29(3): 521–532.
[2]. Development of a novel non-radioactive cell-based method for the screening of SGLT1 and SGLT2 inhibitors using 1-NBDG. Mol Biosyst. 2013 Aug;9(8):2010-20. doi: 10.1039/c3mb70060g. |
| 其他信息 |
葡萄糖是细胞重要的能量来源。葡萄糖的转运由两种类型的葡萄糖转运蛋白介导:主动钠偶联葡萄糖协同转运蛋白(SGLT)和被动葡萄糖转运蛋白(GLUT)。开发一种简便的细胞葡萄糖摄取检测方法具有重要的研究价值。1-(N-(7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑-4-基)氨基)-1-脱氧-D-葡萄糖 (1-NBDG) 是一种新合成的荧光葡萄糖类似物。与 2-NBDG(GLUT 的良好底物,但也是 SGLT 的底物)不同,1-NBDG 可被 GLUT 和 SGLT 转运。因此,1-NBDG 可用于筛选 SGLT1 和 SGLT2 抑制剂。本文进一步表征了 1-NBDG,并将其与 2-NBDG 进行了比较。 1-NBDG 和 2-NBDG 的荧光在碱性条件下均被猝灭,但中和后仅 1-NBDG 的荧光得以恢复。高效液相色谱 (HPLC) 分析表明,2-NBDG 在 NaOH 溶液中分解,导致荧光丧失,而 1-NBDG 保持完整。因此,细胞摄取后,只需用 NaOH 溶液裂解细胞,再用 HCl 溶液中和,即可在微孔板读数仪上检测到 1-NBDG 的荧光。细胞裂解后 1-NBDG 的荧光稳定性可持续长达 5 小时;然而,与 2-NBDG 类似,细胞内 1-NBDG 的稳定性较差,荧光强度在 1 小时内显著下降。1-NBDG 的摄取也可在单细胞水平上进行检测,SGLT 抑制剂对 1-NBDG 摄取的抑制作用可通过流式细胞术进行检测。此外,1-NBDG 已成功应用于高通量细胞筛选方法,用于筛选潜在的 SGLT1 和 SGLT2 抑制剂。研究人员评估了从植物中纯化的 67 种黄酮类化合物和黄酮苷的 SGLT 抑制活性,并鉴定出几种选择性 SGLT1 抑制剂、选择性 SGLT2 抑制剂和双重 SGLT1/2 抑制剂。构效关系分析表明,糖基残基至关重要,因为苷元本身不具有 SGLT 抑制活性。此外,糖苷键及其在苷元上的取代位置不仅影响抑制活性,还影响对 SGLT1 和 SGLT2 的选择性。[1] 1-NBDG 是一种荧光葡萄糖类似物。葡萄糖转运由 SGLT 和 GLUT 介导,它们是开发抗糖尿病和抗癌药物的重要靶点。 1-NBDG 可用于筛选 SGLT 抑制剂,这对相关药物的研发具有重要意义。构效关系分析表明,糖基残基对 SGLT 抑制剂的抑制活性至关重要,糖苷键连接方式和取代位置会影响抑制活性和选择性。[1] 1-NBDG 是一种新合成的荧光葡萄糖衍生物,是 2-NBDG 的类似物。它可用作指示剂,用于检测细菌、活体哺乳动物细胞以及肿瘤活检组织中的葡萄糖摄取。该化合物已被用于筛选 SGLT1 和 SGLT2 抑制剂。其摄取可被 D-葡萄糖竞争性抑制,但不受 L-葡萄糖或蔗糖的抑制。1-NBDG 是研究健康和疾病状态下葡萄糖代谢和转运蛋白功能的重要工具。
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| 分子式 |
C12H14N4O8
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|---|---|
| 分子量 |
342.261562824249
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| 精确质量 |
342.0812
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| 元素分析 |
C, 42.11; H, 4.12; N, 16.37; O, 37.40
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| CAS号 |
2376921-70-7
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| 相关CAS号 |
186689-07-6 (2-NBDG)
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| 外观&性状 |
Typically exists as solids at room temperature
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| LogP |
-1.1
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| tPSA |
187Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
5
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| 氢键受体(HBA)数目 |
11
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
24
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| 分子复杂度/Complexity |
465
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| 定义原子立体中心数目 |
5
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| SMILES |
O1[C@H]([C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1CO)O)O)O)NC1=CC=C(C2C1=NON=2)[N+](=O)[O-]
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| InChi Key |
ZXXYZPVBLJMGPU-UJDFUTJXSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C12H14N4O8/c17-3-6-9(18)10(19)11(20)12(23-6)13-4-1-2-5(16(21)22)8-7(4)14-24-15-8/h1-2,6,9-13,17-20H,3H2/t6-,9-,10+,11-,12-/m1/s1
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| 化学名 |
(2R,3S,4S,5R,6R)-2-(hydroxymethyl)-6-[(4-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-7-yl)amino]oxane-3,4,5-triol
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| 别名 |
1-NBDG; 1NBDG; 1 NBDG; (2R,3S,4S,5R,6R)-2-(Hydroxymethyl)-6-((7-nitrobenzo[c][1,2,5]oxadiazol-4-yl)amino)tetrahydro-2H-pyran-3,4,5-triol; 2376921-70-7; 1-NBDG; (2R,3S,4S,5R,6R)-2-(Hydroxymethyl)-6-((7-nitrobenzo[c][1,2,5]oxadiazol-4-yl)amino)tetrahydro-2H-pyran-3,4,5-triol
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: > 10 mM
H2O : > 10 mM (estimate) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.9218 mL | 14.6088 mL | 29.2176 mL | |
| 5 mM | 0.5844 mL | 2.9218 mL | 5.8435 mL | |
| 10 mM | 0.2922 mL | 1.4609 mL | 2.9218 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。