添加L-抗坏血酸（Asc）仅略微促进细胞生长，而L-抗坏血酸-2-磷酸三钠（0.1-1.5 mM；每2-3天更换一次培养基，持续2-3周）则显著刺激细胞生长。Asc-2P与bFGF联合使用可显著促进细胞生长；然而，添加EGF或胰岛素并无额外作用[1]。较高剂量的Asc-2P可增强runx2表达和ALP活性。L-抗坏血酸-2-磷酸三钠（50 µM-250 µM）是人脂肪干细胞（hASC）有效成骨分化的必要条件。 150 µM asA2-P 与 10 nM 地塞米松 (Dex) 以及 250 µM asA2-P 与 5 nM Dex 的组合可最大程度地促进细胞增殖、ALP 活性和 Runx2 表达 [3]。在人角膜内皮细胞 (HCEC) 中，0.06–0.3 mM 的 Asc-2P（最佳浓度范围为 1.5 mM）可显著刺激细胞生长，而抗坏血酸仅表现出微弱的刺激作用。在去端肽胶原蛋白上，0.3 mM Asc-2P 与 2 ng/mL bFGF 的组合可促进原代培养和传代培养的 HCEC 增殖。 Asc-2P延长了HCEC的复制寿命：未添加Asc-2P培养的细胞在群体倍增水平（PDL）27.3时发生衰老，而添加Asc-2P的细胞在PDL 40以上未出现衰老。Asc-2P降低了氧化性DNA损伤：与未添加Asc-2P的HCEC相比，添加Asc-2P的HCEC传代培养后，线粒体DNA中的8-羟基-2-脱氧鸟苷（8-OHdG）水平显著降低。[1] 在人皮肤成纤维细胞中，单独使用Asc-2P（0.2 mM）可提高I型胶原的生成，增加proα1(I)和proα2(I)胶原mRNA的稳态水平（分别达到对照组的131±4%和127±6%），并刺激这些基因的转录活性。当与人表皮生长因子 (EGF) (10 ng/mL) 共存时，抗坏血酸-2磷酸 (AsA2-P) 可减弱 EGF 对胶原蛋白生成、mRNA 水平和基因转录的抑制作用。[2] 在人脂肪干细胞 (hASCs) 中，较高浓度的 AsA2-P (150–250 μM) 与较低浓度的地塞米松 (10–5 nM) 联合使用可增强成骨分化。具体而言，在人血清培养基中，250 μM AsA2-P 与 5 nM 地塞米松 (OM3) 联合使用可显著提高碱性磷酸酶 (ALP) 活性（与维持培养基相比，P=0.036）和矿化作用。150 μM AsA2-P 与 10 nM 地塞米松 (OM2) 联合使用也可促进矿化作用。在以胎牛血清（FBS）为基础的培养基中，成骨分化较弱，但在含有AsA2-P的培养基中观察到成骨标志基因（runx2A、I型胶原、ALP）的上调。在成分明确的无异种成分RegES培养基中，普通RegES已含有170 μM AsA2-P，支持早期成骨分化，但矿化过程仍需额外添加AsA2-P和地塞米松。[3]

人角膜内皮细胞 (HCEC)：从 12 至 74 岁供体中分离 HCEC，接种于去端肽胶原蛋白包被的培养皿中，并在含 15% 胎牛血清 (FCS) 和 bFGF (2 ng/mL) 的 DMEM 培养基中培养，培养基中添加或不添加 Asc-2P (0.3 mM)。添加 Asc-2P 的原代培养细胞在 2 至 3 周内达到融合，而未添加 Asc-2P 的培养细胞大多生长不良。通过胰蛋白酶消化后进行细胞计数来评估细胞增殖。群体倍增水平 (PDL) 的计算公式为 PDL = log(X1/X0)/log2。为了检测 8-OHdG，将经五次传代培养的 HCEC（添加或不添加 Asc-2P）用抗 8-OHdG 抗体进行免疫染色。为了进行定量分析，我们分离了线粒体DNA，用核酸酶P1和碱性磷酸酶消化，并通过竞争性ELISA法测定了8-OHdG水平（范围0.125–10 ng/mL）。结果显示，Asc-2P处理的细胞中8-OHdG水平显著降低。ZO-1、N-钙黏蛋白、连接蛋白43和Na+/K+-ATP酶的免疫染色显示，在Asc-2P培养的细胞中，这些蛋白的定位正常。RT-PCR检测到了VDAC2、VDAC3、CLCN2、CLCN3、SLC4A4和AQP1的mRNA。[1]
- 人皮肤成纤维细胞：将正常成年人的成纤维细胞培养于含10% FBS的DMEM培养基中。细胞用人EGF（10 ng/mL）和/或Asc-2P（0.2 mM）处理长达14天。为了检测胶原蛋白的生成，在细胞培养的最后2-24小时内用[3H]脯氨酸标记细胞，并定量分析胶原酶敏感和抗胶原蛋白。假设胶原蛋白的脯氨酸含量是正常蛋白的5.4倍，计算相对胶原蛋白产量。采用SDS-PAGE（5%凝胶）分析胶原蛋白类型，分别在有或无DTT存在的情况下进行，随后进行放射自显影和密度分析。为了进行mRNA分析，提取总RNA，并用32P标记的proα1(I)、proα2(I)和β-肌动蛋白cDNA进行斑点印迹或Northern印迹杂交。Asc-2P使proα1(I)和proα2(I) mRNA水平分别增加至对照组的131%和127%。进行核转录延伸分析：将处理后的细胞分离出的细胞核与[α-32P]NTP孵育10分钟（线性掺入），标记的RNA与cDNA斑点杂交，转录活性计算公式为（特异性计数-背景）/（β-肌动蛋白计数-背景）。Asc-2P增加了I型胶原基因的转录活性。[2]
- 人脂肪干细胞（hASCs）：从皮下脂肪组织分离的hASCs在维持培养基（含10% FBS或10%人血清的DMEM/F-12）中培养。为诱导成骨分化，将细胞以7×10³个细胞/cm²的密度接种，24小时后，更换培养基为含有不同浓度的成骨培养基：OM1（50 μM AsA2-P + 100 nM 地塞米松 + 10 mM β-甘油磷酸钠）、OM2（150 μM AsA2-P + 10 nM 地塞米松 + 10 mM β-甘油磷酸钠）、OM3（250 μM AsA2-P + 5 nM 地塞米松 + 10 mM β-甘油磷酸钠）。在第7天和第14天，采用比色法测定ALP活性，并以DNA含量进行标准化（CyQUANT法）。矿化作用通过茜素红S染色检测，并用十六烷基氯化吡啶提取法（540 nm处吸光度）进行定量。采用 qRT-PCR 分析了 runx2A、DLX5、I 型胶原、骨钙素和 ALP 的表达，并以 RPLP0 进行标准化。在人血清培养基中，OM3 显著提高了 ALP 活性（与 MM 相比，P=0.036；与 OM1 相比，P=0.006）和矿化作用（OM2 和 OM3 与 MM 和 OM1 相比）。在胎牛血清培养基中，OM3 在第 14 天上调了 runx2A mRNA 的表达（与 MM 相比，P=0.048）。在 RegES 培养基（含 170 μM AsA2-P 碱）中，所有 OM 均提高了矿化作用。[3]

在人角膜内皮细胞 (HCEC) 中，浓度高达 1.5 mM 的 Asc-2P 几乎没有或完全没有毒性。相比之下，高浓度 (1 mM) 的抗坏血酸具有强烈的细胞毒性作用，可诱导细胞凋亡。Asc-2P 在培养基中不易发生自氧化，不会产生抗坏血酸自由基，而抗坏血酸在环境氧气 (21% O2) 下会迅速氧化，并产生活性氧（主要是 H2O2）。[1] 在人皮肤成纤维细胞中，0.2 mM 的 Asc-2P 耐受性良好，可刺激细胞生长和蛋白质合成，且未观察到明显的细胞毒性。[2] 在人脂肪干细胞 (hASC) 中，浓度高达 250 μM 的 Asc-2P（与 5 nM 地塞米松联用）可促进细胞增殖和分化，且未见毒性报道。含有 170 μM Asc-2P 的 RegES 培养基也支持细胞的旺盛生长。 [3]

[1]. Increased proliferation and replicative lifespan of isolated human corneal endothelial cells with L-ascorbic acid 2-phosphate.Invest Ophthalmol Vis Sci. 2011 Nov 7;52(12):8711-7.

[2]. Epidermal growth factor inhibits transcription of type I collagen genes and production of type I collagen in cultured human skin fibroblasts in the presence and absence of L-ascorbic acid 2-phosphate, a long-acting vitamin C derivative.J Biol Chem. 1991 May 25;266(15):9997-10003.

[3]. Effects of different serum conditions on osteogenic differentiation of human adipose stem cells in vitro.Stem Cell Res Ther. 2013 Feb 15;4(1):17.

抗坏血酸-2磷酸（Asc-2P）是L-抗坏血酸（维生素C）的一种长效、抗氧化衍生物。它在细胞膜上经碱性磷酸酶脱磷酸化为游离的抗坏血酸，从而在不产生细胞毒性抗坏血酸自由基的情况下，向细胞内输送高剂量的维生素C。[1][2]
- 在人角膜内皮细胞中，Asc-2P通过保护细胞免受氧化性DNA损伤来延长其复制寿命，这可由线粒体DNA中8-OHdG水平的降低得到证实。人前房中抗坏血酸的正常浓度约为500 μM，表明其具有生理意义。[1]
- 在人皮肤成纤维细胞中，Asc-2P和EGF竞争性地调节I型胶原基因的转录，提示Asc-2P在维持胶原稳态中发挥作用。 [2] 在人脂肪干细胞中，常用的成骨培养基（OM1，50 μM AsA2-P/100 nM 地塞米松）不如 AsA2-P 浓度更高（150–250 μM）和地塞米松浓度更低（10–5 nM）的配方有效。血清条件（胎牛血清、人血清或无异种成分血清）显著影响成骨分化。无异种成分的 RegES 培养基含有 170 μM AsA2-P，能够早期诱导成骨分化。[3]

C6H6NA3O9P

322.05

321.944

66170-10-3

L-Ascorbic acid 2-phosphate magnesium;113170-55-1;L-Ascorbic acid 2-phosphate;23313-12-4

10990876

White to off-white solid powder

84 °C

172.05

2

9

3

19

357

2

C([C@@H]([C@@H]1C(=C(C(=O)O1)OP(=O)([O-])[O-])[O-])O)O.[Na+].[Na+].[Na+]

YRWWOAFMPXPHEJ-OFBPEYICSA-K

InChI=1S/C6H9O9P.3Na/c7-1-2(8)4-3(9)5(6(10)14-4)15-16(11,12)13;;;/h2,4,7-9H,1H2,(H2,11,12,13);;;/q;3*+1/p-3/t2-,4+;;;/m0.../s1

sodium (R)-5-((S)-1,2-dihydroxyethyl)-2-oxido-4-oxo-4,5-dihydrofuran-3-yl phosphate

2-Phospho-L-ascorbic acid trisodium salt VOK-70103 VOK70103VOK 70103523114

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O : ~150 mg/mL (~465.77 mM)
DMSO : ~6 mg/mL (~18.63 mM)

配方 1 中的溶解度: 120 mg/mL (372.61 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。