5(6)-TAMRA

别名: 5-carboxytetramethylrhodamine; CHEBI:51657; RefChem:537820; 91809-66-4; TAMRA Acid; 5(6)-TAMRA Acid; 5(6)-羧基四甲基罗丹明; 5(6)-羧基四甲基罗丹明内盐
目录号: V28609 纯度: ≥98%
5(6)-TAMRA 是一种荧光染料试剂分子,广泛用作肽和蛋白质的标记。
5(6)-TAMRA CAS号: 98181-63-6
产品类别: New1
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
100mg
250mg
500mg
Other Sizes

Other Forms of 5(6)-TAMRA:

  • 5(6)-TAMRA SE
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产品描述
5(6)-TAMRA 是一种荧光染料试剂分子,广泛用作肽和蛋白质的标记。 It 其Ex/Em 为 520/600 nm.
5(6)-TAMRA(5(6)-羧基四甲基罗丹明,CAS号: 98181-63-6)是一种常用的橙红色荧光染料,分子式为C₂₅H₂₂N₂O₅,分子量为430.45 g/mol。该化合物为5-和6-位羧基异构体的混合物,外观呈深紫色或深红色固体,熔点为>300°C。TAMRA因其明亮的荧光和高光稳定性,广泛用于生物分子(蛋白质、核酸、肽段)的荧光标记,在荧光显微镜、流式细胞术和FRET分析等多种检测平台中具有重要应用。
生物活性&实验参考方法
靶点
Fluorescent dye; 5(6)-TAMRA itself does not target specific biological receptors or enzymes. Instead, it functions as a fluorescent probe by covalently coupling with biomolecules. Its carboxylic acid group can be activated by carbodiimide (e.g., EDC) to react with primary amines on biomolecules (proteins, peptides, nucleic acids), forming stable amide bonds that enable fluorescent labeling and tracking of target molecules. TAMRA's fluorescence properties arise from its rhodamine core structure, which absorbs light at a specific wavelength and re-emits it at a longer wavelength—a process called fluorescence.
体外研究 (In Vitro)
母液制备
1. 蛋白准备
为获得最佳标记效果,请将蛋白(抗体)浓度调整为 2 mg/mL。
1) 蛋白溶液的 pH 值应为 8.5 ± 0.5。若 pH 低于 8.0,请使用 1 M 碳酸氢钠溶液进行调整。
2) 若蛋白浓度低于 2 mg/mL,标记效率将显著降低。建议最终蛋白浓度范围为 2–10 mg/mL,以获得最佳标记效率。
3) 蛋白应置于不含伯胺(如 Tris、甘氨酸)及铵离子的缓冲液中,否则可能影响标记效率。

2. 染料准备
使用无水 DMSO 将 5(6)-TAMRA 染料溶解,配制成 10 mM 储备溶液。通过玻璃管或涡旋振荡充分混匀。
注:5(6)-TAMRA 储备液建议分装后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存。使用前需先用缩合液(500 μg/mL)活化,方可进行后续标记实验。


3. 染料工作液用量计算
标记反应中所需的 5(6)-TAMRA 染料用量取决于待标记蛋白的量。5(6)-TAMRA 染料与蛋白的最佳摩尔比约为 10。
示例:如需标记 500 μL 浓度为 2 mg/mL 的 IgG(分子量 150,000),将 1 mg 5(6)-TAMRA 染料溶于 100 μL DMSO 中,则所需 5(6)-TAMRA 体积为 2.88 μL。具体计算步骤如下:
1) mmol(IgG)= mg/mL(IgG)× mL(IgG)/ MW(IgG)= 2 mg/mL × 0.5 mL / 150,000 mg/mmol = 6.7×10⁻⁶ mmol
2) mmol(5(6)-TAMRA)= mmol(IgG)× 10 = 6.7×10⁻⁶ mmol × 10 = 6.7×10⁻⁵ mmol
3) μL(5(6)-TAMRA)= mmol(5(6)-TAMRA)× MW(5(6)-TAMRA)/ mg/μL(5(6)-TAMRA)= 6.7×10⁻⁵ mmol × 430.45 mg/mmol / 0.01 mg/μL = 2.88 μL
使用方法
1. 标记反应
1) 取按计算体积新鲜配制的 10 mg/mL 5(6)-TAMRA 染料,缓慢加入 0.5 mL 蛋白样品溶液中,轻轻混匀,短暂离心使样品聚集于反应管底部。切忌剧烈混合,以免蛋白变性失活。
2) 将反应管置于避光处,室温下轻轻摇晃孵育 60 分钟。每隔 10–15 分钟,将反应管轻轻颠倒几次,使两种反应物充分混合,提高标记效率。

2. 蛋白纯化脱盐
以下方案以使用 Sephadex G-25 柱纯化染料-蛋白偶联物为例。
1) 按照生产说明书制备 Sephadex G-25 柱。
2) 将反应混合物加至 Sephadex G-25 色谱柱顶部。
3) 当样品流至顶部树脂表面下方时,立即加入 PBS(pH 7.2–7.4)。
4) 继续加入适量 PBS(pH 7.2–7.4),完成柱纯化。收集含有目标染料-蛋白偶联物的组分。
在体外,5(6)-TAMRA广泛用于生物分子的荧光标记。在细菌标记实验中,5(6)-TAMRA可用于标记沙门氏菌(Salmonella typhimurium),通过Cy3滤光片在荧光显微镜下观察和计数黏附细菌。在蛋白-肽相互作用研究中,TAMRA标记的肽段(浓度范围10 nM至5 μM)被用于检测SH2和PTB结构域蛋白微阵列的结合亲和力。TAMRA的荧光特性为:激发波长约541-560 nm,发射波长约565-583 nm,消光系数>90,000 cm⁻¹M⁻¹。
体内研究 (In Vivo)
5(6)-TAMRA被用于研究分子在体内的分布和靶向。在神经科学研究中,TAMRA标记的orexin-A被用于观察orexin-1受体的共内化过程,通过监测TAMRA标记配体的结合和运输来追踪受体-配体复合物的细胞内运输。在肿瘤成像研究中,TAMRA荧光标记与IL-13肽偶联的Gd₃N@C₈₀纳米颗粒(TAMRA-IL-13-f-Gd₃N@C₈₀)被用于小鼠胶质瘤肿瘤中IL-13Rα2表达的MRI研究。在小鼠肠道益生菌定植研究中,TAMRA-D-赖氨酸探针用于两步法标记益生菌,评估其在肠道内的存活率和定植情况。
酶活实验
5(6)-TAMRA主要通过生物偶联技术用于非细胞体系。典型的蛋白质标记流程包括:将目标蛋白(如胶原蛋白I)透析于0.25 M碳酸氢钠标记缓冲液(含0.4 M NaCl,pH 9.5)中过夜;将10 mg/mL TAMRA溶液与透析后的蛋白混合,旋转孵育过夜;通过透析去除游离染料,最终产物储存于4°C避光保存。在蛋白微阵列实验中,TAMRA标记的肽段(浓度10 nM-5 μM)在20 mM Hepes、100 mM KCl、0.1% Tween-20(pH 7.8)的缓冲液中与固相化蛋白域孵育1小时,通过荧光扫描仪检测结合信号。
细胞实验
5(6)-TAMRA广泛用于细胞水平的荧光标记和追踪。在沙门氏菌感染实验中,细菌细胞用5(6)-TAMRA标记后,感染MDCK-1细胞单层或微组织(3小时,37°C,5% CO₂),感染后经3.7%甲醛固定,使用Cy3滤光片和40倍物镜在Leica荧光显微镜下采集图像,手动计数每个视野的黏附细菌数量。在微胶质细胞吞噬实验中,UV照射后的海马神经元用5(6)-TAMRA SE染色,然后与成年小鼠微胶质细胞共培养2小时(37°C),经2.5% PFA固定后,通过Iba1免疫荧光染色和共聚焦显微镜分析吞噬效率。
动物实验
5(6)-TAMRA及其衍生物用于动物模型中的分子示踪研究。在蛋白-肽相互作用研究中,TAMRA标记的肽段被用于SH2和PTB结构域微阵列的结合分析,通过不同浓度梯度(5 μM、3 μM、2 μM、1 μM、500 nM、200 nM、100 nM和10 nM)的肽段孵育1小时,扫描荧光信号确定结合亲和力。在益生菌定植研究中,TAMRA标记的益生菌经口给药于小鼠,通过监测粪便荧光强度评估肠道存活率和定植情况。
药代性质 (ADME/PK)
5(6)-TAMRA的分子量为430.45 g/mol,为小分子荧光染料。其荧光光谱特性为Ex/Em ~541-560/565-583 nm,在pH 7-9的缓冲液中稳定。溶解性方面,在DMSO中溶解度≥23.83 mg/mL,在乙醇中溶解度≥4.45 mg/mL(需温和加热和超声辅助),不溶于水。作为小分子染料,TAMRA本身可能在水性环境中自由扩散,在体内可能迅速排泄或代谢;当与蛋白质或核酸等大分子偶联时,其ADME特性将由所偶联分子的性质主导。储存条件:粉末在-20°C下可保存3年。溶液在-20°C下可保存6个月,应避光保存以防光漂白。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
根据GHS分类,5(6)-TAMRA不归类为危险物质或混合物。该产品仅供科学研究使用,不可用于诊断或医疗目的。在相关文献报道的细胞和动物实验中,TAMRA标记的分子在实验条件下未报告明显毒性效应,但具体毒性特征取决于所标记的分子和实验体系。
参考文献

[1]. Pathway for polyarginine entry into mammalian cells. Biochemistry. 2004 Mar 9;43(9):2438-44.

[2]. Insertion and organization within membranes of the delta-endotoxin pore-forming domain, helix 4-loop-helix 5, and inhibition of its activity by a mutant helix 4 peptide. J Biol Chem. 2000 Aug 4;275(31):23602-7.

[3]. Automated, solid-phase coupling of rhodamine dye acids to 5' amino oligonucleotides. Nucleic Acids Symp Ser. 2000;(44):257-8.

其他信息
5(6)-TAMRA(CAS: 98181-63-6)与5(6)-TAMRA SE(CAS: 246256-50-8)是不同的产品。TAMRA含有羧酸基团,需经EDC活化后才能与伯胺反应;而TAMRA SE含有琥珀酰亚胺酯基团,可直接与伯胺反应,无需额外活化步骤。TAMRA是PROTAC连接子合成中常用的荧光标记基团,可用于PROTAC分子的荧光标记和细胞摄取研究。该染料对光和温度敏感,需严格避光低温保存以确保其荧光性能。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C25H22N2O5
分子量
430.45
精确质量
430.15287
CAS号
98181-63-6
相关CAS号
5(6)-TAMRA SE;246256-50-8
PubChem CID
2762602
外观&性状
Brown to black solid powder
熔点
≥300ºC(lit.)
LogP
9.059
tPSA
194.1
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
6
可旋转键数目(RBC)
3
重原子数目
32
分子复杂度/Complexity
875
定义原子立体中心数目
0
SMILES
CN(C)C1=CC2=C(C=C1)C(=C3C=CC(=[N+](C)C)C=C3O2)C4=C(C=C(C=C4)C(=O)[O-])C(=O)O
InChi Key
YMZMTOFQCVHHFB-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C25H22N2O5/c1-26(2)15-6-9-18-21(12-15)32-22-13-16(27(3)4)7-10-19(22)23(18)17-8-5-14(24(28)29)11-20(17)25(30)31/h5-13H,1-4H3,(H-,28,29,30,31)
化学名
3-carboxy-4-[3-(dimethylamino)-6-dimethylazaniumylidenexanthen-9-yl]benzoate
别名
5-carboxytetramethylrhodamine; CHEBI:51657; RefChem:537820; 91809-66-4; TAMRA Acid; 5(6)-TAMRA Acid;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ≥ 20.83 mg/mL (~48.39 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: 2.08 mg/mL (4.83 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 悬浮液;超声助溶。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.3232 mL 11.6158 mL 23.2315 mL
5 mM 0.4646 mL 2.3232 mL 4.6463 mL
10 mM 0.2323 mL 1.1616 mL 2.3232 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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