PI3K

PDGFR 740Y-P 肽刺激肌肉细胞的有丝分裂反应。 740Y-P 肽刺激有丝分裂的能力具有高度特异性，而不是细胞渗透性 SH2 结构域结合肽的一般特征[2]。通过众所周知的 PI 3-激酶-Akt 存活级联，740Y-P 在促进神经元细胞存活方面与生长因子 (FGF2) 一样有效。 PDGFR740Y-P 肽不需要胰岛素，可以刺激神经元细胞存活[1]。

740 YP 增加阿尔茨海默病大鼠模型中 AKT 和 PI3K 磷酸化的程度，并降低用 A(25-32) 治疗的海马组织中 ROS 水平的程度。研究人员发现，GABAB受体激活可以恢复AD大鼠的空间记忆和学习能力，并通过激活PI3K/Akt信号通路抑制神经元凋亡和海马萎缩。此外，GABAB受体激活通过激活PI3K/Akt信号通路，降低MDA水平，增加SOD、GSH-Px和CAT水平，从而减轻氧化应激损伤。 结论：综上所述， 研究结果表明，GABAB受体激活通过激活PI3K/Akt信号通路抑制AD大鼠神经元氧化应激损伤，这可能是AD潜在的新治疗靶点。

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此外，成功建模的大鼠分别给予巴氯芬（AD +巴氯芬组）、740-Y-P（PI3K/Akt信号通路激动剂）（AD + 740-Y-P组）和LY294002 （AD + LY294002组）治疗，每组10只。对大鼠海马提取物进行不同处理，通过western blot分析检测PI3k和Akt的磷酸化程度（图3B， C）。与正常组相比，AD +巴氯芬组、AD +强bbb740 - y - p 组、AD + LY294002组和AD +巴氯芬+ LY294002组大鼠PI3k和Akt的磷酸化程度下降。此外，与AD组相比，AD +巴氯芬组和AD + 740-Y-P组PI3k和Akt磷酸化程度增强，而AD + LY294002组PI3k和Akt磷酸化程度降低。[3]
此外，我们采用western blot分析各组海马提取物中Bax、Bcl-2、cleaved caspase 3和caspase-3的表达情况（图3B、D）。结果显示，AD +巴氯芬组和AD + 740-Y-P组中Bcl-2和caspase-3的表达升高，Bax和cleaved caspase-3的表达降低；而在AD + LY294002组中，Bcl-2和Caspase-3的表达显著降低，Bax和cleaved - Caspase-3的表达显著升高。AD +巴氯芬+ LY294002组大鼠Bcl-2和Caspase-3表达下调，Bax和cleaved - Caspase-3表达上调。综上所述，GABAB受体可激活PI3K/Akt信号通路，抑制海马细胞凋亡。[3]

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与a β处理海马组织相比，巴氯芬或740-Y-P处理a β处理海马组织的ROS水平降低。ELISA结果显示，与AD组、AD +巴氯芬组、AD + 740-Y-P组、AD + LY294002组、AD +巴氯芬+ LY294002组相比，正常组MDA水平明显降低，SOD、GSH-Px、CAT水平明显升高（p < 0.05）。AD +巴氯芬或AD +740-Y-P组MDA水平显著降低，SOD、GSH-Px、CAT水平显著升高，AD + LY294002组MDA水平显著升高，SOD、GSH-Px、CAT水平显著降低（均p < 0.05）。[3]

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采用流式细胞术检测巴氯芬、740-Y-P、LY294002、Aβ联合用药对培养海马神经元凋亡的影响。结果显示（图6B），与对照组相比，其他各组凋亡细胞数量均显著增加，与Aβ组相比，Aβ+巴氯芬组和Aβ+740-Y-P组的凋亡率降低，而Aβ+ LY294002组的凋亡率高于Aβ+ LY294002组。［3］

小磷酸肽与PI3-激酶p85调节亚基的SH2结构域的结合可以在体外激活该酶。在本研究中，已经评估了特异性结合p85的SH2结构域的细胞可渗透肽在C2肌肉细胞系中刺激促有丝分裂反应的能力。与其他四种SH2结合肽相比，该肽在刺激进入S期方面与血清、EGF和FGF一样有效。wortmannin和雷帕霉素抑制了对p85结合肽（而不是FGF）的反应，表明该肽激活了PI3-激酶/S6激酶信号通路。肽反应不受MEK抑制剂（PD098059）的抑制，也不刺激Erk磷酸化。因此，在p85结合肽激活的途径和p42/p44 MAPK级联之间似乎没有直接的串扰[2]。

740-Y-P增加阿尔茨海默病大鼠模型中 AKT 和 PI3K 磷酸化的程度，并降低用 A(25-32) 处理的海马组织中 ROS 水平的程度。NIH HBSS（含 10% FCS、Ca2+ 和 Mn2+ 游离），以及将 50 μg/ml 740-Y-P肽或等体积的 PBS 作为对照与 2 106 个 3T3 细胞悬浮液在 37°C 下孵育。 2小时后将细胞离心、清洗并用胰蛋白酶消化以分解非内化的肽。然后，将细胞重悬于裂解缓冲液（50 mM Tris pH 7.4、150 mM NaCl、10% 甘油、2% NP40、0.25% 脱氧胆酸盐、1 mM EDTA、1 mM 钒酸盐、Boehringer-Mannheim 的蛋白酶抑制剂“完整”混合物中）并在 4°C 下孵育 1 小时。通过以 1.4×104g 离心 5 分钟澄清裂解物，然后将上清液与链霉亲和素-琼脂糖珠一起孵育 1 小时。之后，将珠子在裂解缓冲液中洗涤 3 次，在 SDS 样品缓冲液中煮沸，在 12% 凝胶上通过 SDS-PAGE 解析，转移到硝酸纤维素上，并用 p85 单克隆抗体进行免疫印迹。

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海马神经元细胞的分离培养[3]
直率地分离海马体，同时切除血管和脑膜。海马切成直径0.4 mm的小块。切片用0.25%胰蛋白酶和0.04 DNA酶反应12 min，加入马血清终止反应。用移液管滋养10次分散细胞。细胞悬液在含10%胎牛血清、5%马血清、25 mmol/L KCI、10 mmol/L HEPES、105 U/L青霉素和0.1 g/L链霉素的MEM中培养。经直径为75μm的尼龙筛网过滤器过滤后，将样品置于涂有聚l -赖氨酸氢溴化物载玻片的35 mm培养皿中，在5% CO2和95% O2中37℃孵育，密度为0.6×10~9 L-1。第3天，在培养液中添加5μmol/L阿糖胞苷，每24 h更换一次。培养后第7天，采用SP法进行神经元特异性烯醇化酶免疫细胞化学染色，鉴定海马神经元细胞。分别用Aβ（终浓度为25μmol/L）、巴氯芬（终浓度为25μmol/L）、740-Y-P（终浓度为20μmol/L）、LY294002（终浓度为10μmol/L）单独或联合作用培养细胞。每次处理持续24 h。以未处理的细胞为对照。

为了验证这一假设，我们分别通过腹腔注射GABAB受体激动剂（巴氯芬）、PI3K/Akt信号通路激动剂（740-YP）和拮抗剂（LY294002）建立了大鼠AD模型。采用Morris水迷宫实验检测GABAB激活对AD大鼠空间记忆和学习能力的影响。同时，我们利用原代神经元培养物在体内和体外检测了GABAB和PI3K/Akt信号通路对细胞凋亡和氧化应激损伤的影响[3]。70只健康成年雄性SD大鼠[SPF级；年龄2-3个月，体重32.10±24.70 g]饲养于25±2℃、12/12小时昼夜循环的环境中，自由摄取食物和水。经过7天的适应期后，将60只大鼠随机分为1组，每组10只。AD模型大鼠分别腹腔注射GABAB受体激动剂巴氯芬（2.0 mg/kg）、PI3K/Akt信号通路激动剂740-YP（10 mg/kg）、PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002（20 mg/kg），或巴氯芬（2.0 mg/kg）+LY294002（20 mg/kg）联合用药。各组大鼠连续接受不同处理6周。处理和行为学测试的实验方案见图1。[3]

[1]. Mol Cell Neurosci. 1999 Apr;13(4):272-80.

[2]. Biochem Biophys Res Commun. 1998 Oct 9;251(1):148-52.

[3]. J Alzheimers Dis. 2020;76(4):1513-1526.

PI 3-激酶已成为调控神经元细胞存活的关键酶。然而，目前尚未证实由p85亚基调控的内源性PI 3-激酶激活是否足以促进细胞存活。此外，FGF家族生长因子是否通过PI 3-激酶依赖性通路促进细胞存活也尚不清楚。我们此前开发了一种细胞可渗透的p85结合肽，并证实其能够刺激肌肉细胞产生依赖于PI 3-激酶/p70 S6激酶通路的促有丝分裂反应。在本研究中，我们发现该肽能够挽救血清剥夺诱导的小脑颗粒细胞死亡，且该反应与生长因子（FGF2）的反应相当。使用wortmannin、LY294002和雷帕霉素进行的实验表明，该肽的促存活反应依赖于PI 3-激酶活性，而非p70 S6激酶活性。肽段反应与PI 3-激酶依赖的Akt磷酸化相关，Akt是PI 3-激酶存活级联反应中已知的下游效应分子。与p85结合肽刺激的存活反应相反，FGF2刺激的反应不受wortmannin或LY294002的抑制，也与Akt的磷酸化无关。因此，我们可以得出结论：由p85调控的内源性PI 3-激酶池的激活足以维持细胞存活；然而，FGF2等生长因子显然可以以不依赖于PI 3-激酶的方式促进细胞存活。[1]

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小磷酸肽与PI 3-激酶p85调节亚基的SH2结构域结合可在体外激活该酶。本研究评估了一种可渗透细胞的肽，该肽特异性结合p85的SH2结构域，并考察了其在C2肌肉细胞系中刺激有丝分裂反应的能力。与其他四种SH2结合肽相比，该肽在刺激细胞进入S期方面与血清、EGF和FGF一样有效。沃特曼宁和雷帕霉素可抑制p85结合肽（而非FGF）诱导的细胞增殖反应，表明该肽激活了PI3K/S6激酶信号通路。MEK抑制剂（PD098059）不抑制该肽的诱导反应，且该肽不刺激Erk磷酸化。因此，p85结合肽激活的通路与p42/p44 MAPK级联之间似乎不存在直接的相互作用。[2]

C141H222N43O39PS3

3270.7049

3268.561

1236188-16-1

740 Y-P TFA

90488730

Arg-Gln-Ile-Lys-Ile-Trp-Phe-Gln-Asn-Arg-Arg-Met-Lys-Trp-Lys-Lys-Ser-Asp-Gly-Gly-{PO2-Tyr}-Met-Asp-Met-Ser; H-Arg-Gln-Ile-Lys-Ile-Trp-Phe-Gln-Asn-Arg-Arg-Met-Lys-Trp-Lys-Lys-Ser-Asp-Gly-Gly-Tyr(PO3H2)-Met-Asp-Met-Ser-OH

R-Q-I-K-I-W-F-Q-N-R-R-M-K-W-K-K-S-D-G-G-{PO2-Y}-M-D-M-S

White to off-white solid

1.5±0.1 g/cm3

1.679

-6.32

1470Ų

50

50

117

227

7280

25

S(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]([H])(C(N([H])[C@]([H])(C(N([H])[C@]([H])(C(N([H])[C@]([H])(C(N([H])[C@]([H])(C(N([H])[C@]([H])(C(N([H])[C@]([H])(C(N([H])C([H])([H])C(N([H])C([H])([H])C(N([H])[C@]([H])(C(N([H])[C@]([H])(C(N([H])[C@]([H])(C(N([H])[C@]([H])(C(N([H])[C@]([H])(C(=O)O[H])C([H])([H])O[H])=O)C([H])([H])C([H])([H])SC([H])([H])[H])=O)C([H])([H])C(=O)O[H])=O)C([H])([H])C([H])([H])SC([H])([H])[H])=O)C([H])([H])C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])OP(=O)(O[H])O[H])=O)=O)=O)C([H])([H])C(=O)O[H])=O)C([H])([H])O[H])=O)C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])[H])=O)C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])[H])=O)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12)=O)C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])[H])=O)N([H])C([C@]([H])(C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])/C(=N/[H])/N([H])[H])N([H])C([C@]([H])(C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])/C(=N/[H])/N([H])[H])N([H])C([C@]([H])(C([H])([H])C(N([H])[H])=O)N([H])C([C@]([H])(C([H])([H])C([H])([H])C(N([H])[H])=O)N([H])C([C@]([H])(C([H])([H])C1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H])N([H])C([C@]([H])(C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12)N([H])C([C@]([H])([C@@]([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])N([H])C([C@]([H])(C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])[H])N([H])C([C@]([H])([C@@]([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])N([H])C([C@]([H])(C([H])([H])C([H])([H])C(N([H])[H])=O)N([H])C([C@]([H])(C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])/C(=N/[H])/N([H])[H])N([H])[H])=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O

XCGMILZGRGEWHL-QYGSNONCSA-N

InChI=1S/C141H222N43O39PS3/c1-8-75(3)114(184-128(208)94(46-48-108(148)188)164-116(196)84(146)32-25-56-156-139(150)151)136(216)174-90(38-20-24-55-145)127(207)183-115(76(4)9-2)137(217)180-101(65-80-70-160-86-34-16-14-31-83(80)86)132(212)175-99(62-77-28-11-10-12-29-77)130(210)170-93(45-47-107(147)187)123(203)177-102(66-109(149)189)133(213)169-92(40-27-58-158-141(154)155)119(199)167-91(39-26-57-157-140(152)153)120(200)171-95(49-59-225-5)124(204)166-88(36-18-22-53-143)121(201)176-100(64-79-69-159-85-33-15-13-30-82(79)85)131(211)168-87(35-17-21-52-142)118(198)165-89(37-19-23-54-144)122(202)181-105(73-185)135(215)178-103(67-112(192)193)117(197)162-71-110(190)161-72-111(191)163-98(63-78-41-43-81(44-42-78)223-224(220,221)222)129(209)172-96(50-60-226-6)125(205)179-104(68-113(194)195)134(214)173-97(51-61-227-7)126(206)182-106(74-186)138(218)219/h10-16,28-31,33-34,41-44,69-70,75-76,84,87-106,114-115,159-160,185-186H,8-9,17-27,32,35-40,45-68,71-74,142-146H2,1-7H3,(H2,147,187)(H2,148,188)(H2,149,189)(H,161,190)(H,162,197)(H,163,191)(H,164,196)(H,165,198)(H,166,204)(H,167,199)(H,168,211)(H,169,213)(H,170,210)(H,171,200)(H,172,209)(H,173,214)(H,174,216)(H,175,212)(H,176,201)(H,177,203)(H,178,215)(H,179,205)(H,180,217)(H,181,202)(H,182,206)(H,183,207)(H,184,208)(H,192,193)(H,194,195)(H,218,219)(H4,150,151,156)(H4,152,153,157)(H4,154,155,158)(H2,220,221,222)/t75-,76-,84-,87-,88-,89-,90-,91-,92-,93-,94-,95-,96-,97-,98-,99-,100-,101-,102-,103-,104-,105-,106-,114-,115-/m0/s1

(3S)-3-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-amino-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]acetyl]amino]acetyl]amino]-3-(4-phosphonooxyphenyl)propanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-4-[[(2S)-1-[[(1S)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-oxobutanoic acid

740 Y-P; 740 YP; 740YPDGFR; PDGFR740Y-P;740 Y P; 740-YPDGFR; PDGFR 740 Y-P; 740 YPDGFR; PDGFR 740Y-P; H-Arg-Gln-Ile-Lys-Ile-Trp-Phe-Gln-Asn-Arg-Arg-Met-Lys-Trp-Lys-Lys-Ser-Asp-Gly-Gly-Tyr(PO3H2)-Met-Asp-Met-Ser-OH; Alternative Name: PDGFR740Y-P; 740 Y-P?; PDGFR 740Y-P

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 25~100 mg/mL (7.6~30.6 mM)
Ethanol: 8 mg/mL (~2.5 mM)
H2O: 5 mg/mL (1.5 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (0.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (0.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (0.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。