| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Non-muscle myosin II (NMII)[1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
使用牛角膜内皮细胞，研究了靶向 NMII 改善 CEC 迁移的治疗潜力 (BCEC)。通过减少逆行肌动蛋白流动和增强板层足突持久性，肌球蛋白运动的直接抑制剂 blebbistatin 可刺激 CEC 的迁移和定向持久性，并加速体外伤口愈合 [1]。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在兔角膜内皮划痕模型中，blebbistatin（0.05 mL，20 μM；前房注射；每天一次；持续 6 天；新西兰白兔）治疗可改善伤口愈合[1]。
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| 酶活实验 |
BCEC单层蛋白质渗透性测定[1]
BCEC在对照培养基或含有10μM Y27632或10μMblebbistatin>的培养基中培养，直至细胞在Transwell过滤器（0.4 lm孔径聚碳酸酯过滤器）上融合。在新鲜培养基中洗涤和平衡30分钟后，将浓度为3mg/mL的FITC偶联的4K、40K和500K葡聚糖加入上部隔室。在进一步孵育4小时后，通过荧光法（激发，492nm；发射，520nm）评估来自下部隔室的培养基中的扩散FITC-葡聚糖。 |
| 细胞实验 |
免疫荧光共聚焦显微镜[1]
BCEC在盖玻片上培养，在室温下在指定时间点用4%多聚甲醛（pH 7.4）固定30分钟，用0.5%Triton X-100渗透5分钟，用10%牛血清白蛋白封闭30分钟。然后将细胞与指定的一抗在4°C下孵育过夜。用PBS洗涤两次15分钟后，将样品与Alexa Fluor偶联的二抗在室温下孵育1小时。对于肌动蛋白标记，样品在室温下用Alexa 546鬼笔环肽染色10分钟。几次洗涤后，所有样品都安装在荧光安装溶液中。使用激光扫描共聚焦显微镜获得免疫荧光图像，并使用Zen软件进行分析。对于Y27632或blebbistatin洗脱实验，在开始时将细胞与10μM Y27632和10μMblebbistatin同时接种和孵育。随后，在收获细胞并进行共聚焦显微镜检查之前，如图5f所示，从充满的培养基中取出Y27632或博来司他丁。 活细胞成像[1] 对于单细胞迁移研究，将BCEC铺在12孔板上，与对照培养基或含有10μM Y27632、10μMblebbistatin和10μM ML-7的培养基一起孵育2天。然后将该板放置在配备蔡司Axiovert 200 M倒置显微镜和电动载物台的加湿、CO2平衡室中。使用10×/0.3 EC Plan Neofluar物镜每30分钟捕获5个场，持续16小时。MetaMorph软件跟踪每个场10个随机选择的细胞（每个条件50个细胞）的核位置。使用Gorelik等人慷慨提供的DiPer程序分析迁移速度、方向性比和均方位移。对于体外伤口愈合研究，将细胞接种在6孔板中，与对照培养基一起孵育直至融合。成像前，用200μl移液管尖端在每个孔中刮擦伤口，并将培养基分别换成含有载体对照、10μM Y27632、10μMblebbistatin或10μM ML-7的无血清培养基。使用10×/0.3 EC Plan Neofluar物镜每30分钟拍摄一次图像，持续16小时。通过ImageJ软件分析伤口区域的变化。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：新西兰白兔（16-20周龄；3-3.5 kg）[1]
剂量：0.05 mL；20 μM 给药途径：前房内注射；每日一次；持续6天 实验结果：显著改善了角膜透明度并消退了角膜水肿，表明完整的角膜内皮单层得以恢复。 兔角膜内皮损伤模型[1] 兔角膜内皮损伤模型的操作方法参照先前描述的方法并稍作修改。16至20周龄、体重3至3.5 kg的新西兰白兔，采用肌内注射盐酸赛拉嗪5 mg/kg和氯胺酮40 mg/kg进行麻醉。为进一步减轻眼部疼痛，滴入0.5%的阿卡因眼用溶液。用8.0 mm标记器标出需要去除的内皮细胞区域。使用2.75 mm刀片切开角膜后，用后囊膜抛光器轻轻去除8.0 mm标记范围内的角膜内皮细胞（CEC），并用0.06%台盼蓝染色确认后弹力层裸露区域。对遗漏区域进行再次清创，以彻底清除细胞。损伤后，立即向不同组别的动物进行前房内注射0.05 mL的溶剂对照、20 μM Y27632或20 μM的blebbistatin，之后每日一次。术后滴用0.3%硫酸庆大霉素滴眼液以控制感染。在随访评估期间，使用手术显微镜观察并拍摄角膜。采用超声生物显微镜测量角膜厚度。简而言之，在肌内和局部麻醉后，将超声凝胶涂抹于角膜上。使用垂直于角膜表面的50 MHz换能器探头采集前房图像。仅采集中央角膜图像，该区域在未散瞳的情况下可清晰观察到晶状体。采集图像后，通过绘制一条垂直于角膜顶点的直线来测量角膜厚度。整个操作由一位事先不知晓实验条件的独立技术人员完成，并由作者（WTH）对图像中得到的角膜厚度进行进一步分析。在指定时间点处死动物，并取出角膜。为了量化损伤程度，用0.2%台盼蓝染色1分钟，以显示裸露的后弹力层。在手术显微镜下采集图像后，使用ImageJ软件量化损伤程度。对于免疫荧光染色，将角膜在室温下用 4% 多聚甲醛（pH 7.4）固定 5 分钟，进行放射状切开以便平铺，然后按照上述方法进行免疫染色和观察。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
布比司他汀是一种吡咯喹啉类化合物，其化学名称为1,2,3,3a-四氢-H-吡咯并[2,3-b]喹啉-4-酮，在3a位被羟基取代，6位被甲基取代，1位被苯基取代。它作为非肌肉肌球蛋白II的ATPase活性抑制剂发挥作用。它是一种吡咯喹啉类化合物，也是一种环状酮、叔醇和叔α-羟基酮。
角膜内皮细胞（CEC）功能障碍会导致角膜水肿，进而可能导致失明。除了角膜移植外，对于周边细胞储备充足的中央型病变，人们提出了单纯的后弹力层撕除术，但促进CEC向中心迁移是该策略的关键。本研究表明，使用 ROCK 抑制剂 Y27632 或选择性 NMII 抑制剂 blebbistatin 靶向非肌肉肌球蛋白 II (NMII) 的活性，可促进角膜内皮细胞 (CEC) 的定向迁移并加速体外伤口愈合。NMII 抑制后，伪足突起的持续性增加，肌动蛋白逆行流动减少。使用肌动蛋白相关蛋白 2/3 (ARP2/3) 抑制剂拮抗伪足突起可消除这种促进迁移的作用。虽然 Y27632 和 blebbistatin 均能加速伤口愈合，但 blebbistatin 处理后细胞连接的完整性和屏障功能得到更好的维持，从而在兔角膜内皮损伤模型中更快地消退角膜肿胀。我们的研究结果表明，NMII 是治疗 CEC 功能障碍的一个有前景的治疗靶点。关键信息：NMII 抑制可促进体外 CEC 的定向迁移和伤口愈合。抑制 NMII 后，片状伪足的持续存在增加。选择性 NMII 抑制剂比 ROCK 抑制剂更能保持连接完整性。选择性 NMII 抑制剂可加速体内损伤后角膜的脱水。[1] |
| 分子式 |
C18H16N2O2
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|---|---|
| 分子量 |
292.33
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| 精确质量 |
292.121
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| 元素分析 |
C, 73.95; H, 5.52; N, 9.58; O, 10.95
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| CAS号 |
674289-55-5
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| 相关CAS号 |
(-)-Blebbistatin;856925-71-8
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| PubChem CID |
3476986
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
507.3±60.0 °C at 760 mmHg
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| 熔点 |
210-212ºC
|
| 闪点 |
260.6±32.9 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.4 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.681
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| LogP |
1.62
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| tPSA |
52.9
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
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| 可旋转键数目(RBC) |
1
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| 重原子数目 |
22
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| 分子复杂度/Complexity |
497
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
LZAXPYOBKSJSEX-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C18H16N2O2/c1-12-7-8-15-14(11-12)16(21)18(22)9-10-20(17(18)19-15)13-5-3-2-4-6-13/h2-8,11,22H,9-10H2,1H3
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| 化学名 |
3a-hydroxy-6-methyl-1-phenyl-2,3-dihydropyrrolo[2,3-b]quinolin-4-one
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| 别名 |
Blebbistatin; (+/-)-Blebbistatin; 674289-55-5; (+-)-Blebbistatin; CHEBI:75379; UNII-20WC4J7CQ6; 3a-hydroxy-6-methyl-1-phenyl-2,3-dihydropyrrolo[2,3-b]quinolin-4-one; 20WC4J7CQ6;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : 25 mg/mL (85.52 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (8.55 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.4208 mL | 17.1040 mL | 34.2079 mL | |
| 5 mM | 0.6842 mL | 3.4208 mL | 6.8416 mL | |
| 10 mM | 0.3421 mL | 1.7104 mL | 3.4208 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Myosin-IN-2
Myosin-5-IN-2
Chrysosplenol C
ZJS178
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