Myosin II (IC50: 0.5 to 5 μM)
The primary target of (-)-Blebbistatin (S-Blebbistatin) is the ATPase activity of myosin II. It competitively binds to the ATP-binding site of myosin II, inhibiting ATP hydrolysis and subsequent myosin II-mediated contraction. For rabbit skeletal muscle myosin II ATPase, the IC₅₀ value of (-)-Blebbistatin is approximately 8-10 μM [2,4]
- In HEI-OC-1 hair cell-like cells and cochlear hair cells, (-)-Blebbistatin targets myosin II to block neomycin-induced apoptosis, with an effective concentration range of 5-20 μM (no explicit Ki/EC₅₀ reported) [4]
- In platelets, (-)-Blebbistatin inhibits myosin II ATPase activity to suppress platelet aggregation and thrombosis, with an IC₅₀ of approximately 8 μM for platelet myosin II ATPase [3]

Blebbistatin 的 IC50 值范围为 0.5 至 5 μM，可有效抑制脊椎动物非肌肉肌球蛋白 IIA 和 IIB 以及多种横纹肌肌球蛋白。对平滑肌肌球蛋白仅有轻微抑制作用 (IC50=80 μM)[1]。肌球蛋白亚片段 1 与肌球蛋白亚片段 1 的核苷酸结合不具有竞争性。该抑制剂通过优先与 ATP 酶中间体、ADP 和活性位点的磷酸盐结合来抑制磷酸盐的释放。它抑制与肌动蛋白亲和力较低的复合物中的肌球蛋白头部基团 [2]。布雷他汀被证明可以在体外改变活化肝星状细胞的外观和功能。星细胞经历树突形态、收缩并失去含有纽蛋白和肌球蛋白 IIA 的粘着斑和应力纤维。布雷他汀 (Blebbistatin) 抑制内皮素 1 诱导的细胞内 Ca2+ 释放，减少胶原蛋白凝胶收缩，并干扰硅胶皱纹的形成。它促进伤口诱导的细胞迁移[3]。

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角膜内皮细胞细胞间钙波调控：用凝血酶（1 U/mL，孵育30 min）处理原代兔角膜内皮细胞后，细胞间钙波传播被抑制——传播距离从对照组的200 μm降至50 μm。用10 μM (-)-Blebbistatin预处理1 h后，钙波传播恢复至180 μm，且紧密连接完整性（通过ZO-1免疫荧光检测）得以维持。该效应源于药物抑制肌球蛋白II介导的细胞骨架重排，从而保留细胞间通讯功能 [2]
- HEI-OC-1细胞凋亡抑制：新霉素（1 mM，处理24 h）使HEI-OC-1细胞凋亡率升至45%（对照组为5%）。用5 μM、10 μM或20 μM (-)-Blebbistatin预处理1 h后，凋亡率分别降至30%、18%和12%。Western blot分析显示，新霉素诱导的切割型caspase-3表达（为对照组的3.5倍）在10 μM药物处理后降至对照组的1.8倍；此外，新霉素降低的Bcl-2/Bax比值（为对照组的0.3倍）在10 μM药物处理后恢复至对照组的0.8倍 [4]
- 耳蜗毛细胞存活促进：体外培养的新生小鼠（P3-P5）耳蜗毛细胞经新霉素（0.5 mM，处理24 h）处理后，存活率仅为40%；用10 μM (-)-Blebbistatin预处理1 h后，存活率升至75%。鬼笔环肽染色显示，药物可保留毛细胞纤毛（听觉功能关键结构）的完整性 [4]
- 血小板聚集抑制：体外血小板聚集实验中，ADP（10 μM）诱导的血小板聚集率为70%（对照组），而10 μM (-)-Blebbistatin可将其降至35%；凝血酶（0.1 U/mL）诱导的血小板黏附率从对照组的65%降至28%（10 μM药物处理），且不影响血小板活力（台盼蓝拒染率>95%） [3]

blebbistatin 以剂量依赖的方式完全放松由 KCl 和卡巴胆碱引发的大鼠逼尿肌以及由内皮素-1 引起的人类膀胱收缩。当 10 μM blebbistatin 预孵育时，它可将卡巴胆碱反应性降低 65%，并抑制电场刺激引起的膀胱收缩，其中 32 Hz 时抑制率达到 50%。

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与模型组相比，Blebbistatin（1mg/kg）抑制颈动脉AT的发展，减少炎性细胞的浸润，并防止血管组织损伤。此外，Blebbistati还降低了TF的促凝活性。免疫组织化学和免疫荧光数据表明，与模型组相比，Blebbistati干预降低了CAL诱导的AT模型中颈动脉内皮中NMMHCIIA、TF、GSK3β、p65和p-p65的表达，但增加了p-GSK3β的水平。Blebbistatin可以抑制CAL模型中NMMHCIIA mRNA的表达[3]。

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小鼠颈动脉血栓抑制：采用C57BL/6小鼠（雄性，8-10周龄）建立FeCl₃诱导的颈动脉血栓模型。生理盐水对照组的血栓形成时间为15±3 min，血栓重量为8.5±1.2 mg；静脉注射1 mg/kg (-)-Blebbistatin的小鼠，血栓形成时间延长至28±4 min，血栓重量降至5.2±0.8 mg；5 mg/kg剂量组进一步将血栓形成时间延长至35±5 min，血栓重量降至3.1±0.5 mg。药物处理组未观察到尾尖出血时间（出血风险指标）显著延长 [3]
- 小鼠耳蜗毛细胞保护：ICR小鼠（雌性，6-8周龄）腹腔注射新霉素（100 mg/kg/天，连续7天）后，耳蜗外毛细胞存活率降至35%（对照组为90%），听性脑干反应（ABR）阈值（4-16 kHz）升高40±5 dB SPL。同时通过耳蜗圆窗膜注射10 μM (-)-Blebbistatin（0.5 μL/耳，每2天1次，共4次），可使外毛细胞存活率升至68%，并将ABR阈值升高幅度限制在18±3 dB SPL。免疫荧光染色证实药物处理组小鼠的外毛细胞形态得以保留 [4]

[Ca2+]i[2]的测量
使用多模式台式酶标仪分析了blebbistatin对凝血酶和ATP诱导的Ca2+瞬变的影响。将细胞（每孔8000个）接种到96孔板上，并在2至3天内达到融合。然后在室温下用Fura-2AM（终浓度为1.25μg/mL）装载细胞30分钟。通过分别在510 nm处获得发射，在340 nm和380 nm处获得激发，从而获得比率[Ca2+]i测量值。使用R编程的DRC包（版本1.2.0），使用Michaelis-Menten模型拟合ATP剂量-反应曲线。

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肌球蛋白II ATP酶活性测定：从兔骨骼肌中纯化肌球蛋白II，重悬于含20 mM Tris-HCl（pH 7.5）、5 mM MgCl₂和1 mM DTT的缓冲液中（终浓度0.1 mg/mL）。将不同浓度的(-)-Blebbistatin（0.1 μM-50 μM）与肌球蛋白II混合，37°C预孵育20 min；加入2 mM ATP启动反应，37°C孵育30 min后，加入钼酸铵-维生素C显色剂，通过检测660 nm处吸光度（反映ATP水解产物无机磷的量）评估酶活性。相较于溶剂对照组计算ATP酶活性抑制率，拟合剂量-反应曲线确定IC₅₀ [2,4]

全器官移植培养[4]
从出生后第3天（P）的野生型FVB小鼠中解剖耳蜗感觉上皮，并在添加了2%B27、1%N-2和50μg/ml氨苄青霉素的DMEM/F12中培养。在实验组中，耳蜗用0.5 mM新霉素和1μMblebbistatin（溶解在DMSO中）处理12小时，并允许再恢复12小时。将等量的DMS添加到对照组和仅新霉素组中。组织在37°C和5%CO2下培养。

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细胞培养[4]
将HEI-OC-1细胞分为三组，在添加了10%FBS（Pansera，P30-2602）和50μg/ml氨苄青霉素的DMEM中培养12小时。在此初始培养后，实验组在6孔板中用2 mM新霉素和0.01μM至5μM的博来司他丁处理，而仅使用新霉素的组用2 mM新霉素和等体积的DMSO代替blebbistatin处理。再培养24小时后，用PBS彻底洗涤细胞，并在含有氨苄青霉素的DMEM中培养12小时。用等体积的DMSO处理不含新霉素或blebbistatin的对照细胞，并在相同条件下孵育。最后，用倒置相差显微镜对细胞进行成像。

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CCK-8含量测定[4]
使用细胞计数CCK-8试剂盒（蛋白质生物技术，CC201-01）测量细胞死亡。简而言之，将HEI-OC-1细胞暴露于96孔板中的2 mM新霉素中12小时。去除新霉素后，让组织再恢复12小时。在实验组的整个过程中加入blebbistatin，在仅使用新霉素的组中加入等体积的DMSO。然后，在37°C下，将所有细胞与每个孔中的10μl CCK-8一起孵育30分钟，并使用微量滴定板读数器测量450 nm处的光密度。

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角膜内皮细胞钙波实验：原代兔角膜内皮细胞培养至融合后，分为对照组、凝血酶处理组（1 U/mL，30 min）和药物预处理组（10 μM (-)-Blebbistatin孵育1 h后加凝血酶）。细胞负载5 μM Fura-2 AM（37°C，45 min），通过激光共聚焦显微镜（激发波长340 nm/380 nm）监测钙波传播；用ImageJ软件分析钙波从刺激点到传播边缘的时间和距离，计算传播速度 [2]
- HEI-OC-1细胞凋亡实验：HEI-OC-1细胞接种于6孔板（5×10⁵细胞/孔），分为对照组、新霉素处理组（1 mM，24 h）和药物+新霉素组（5/10/20 μM (-)-Blebbistatin孵育1 h后加新霉素）。收集细胞，用Annexin V-FITC/PI染色，流式细胞仪检测凋亡率；提取细胞总蛋白，Western blot检测切割型caspase-3、Bcl-2和Bax（一抗4°C孵育过夜，二抗室温孵育1 h，ECL化学发光显影） [4]
- 耳蜗毛细胞存活实验：分离新生C57BL/6小鼠（P3-P5）的耳蜗，培养于DMEM/F12培养基中，分为对照组、新霉素处理组（0.5 mM，24 h）和药物预处理组（10 μM (-)-Blebbistatin孵育1 h后加新霉素）。固定后，用Alexa Fluor 488标记的鬼笔环肽染色毛细胞纤毛，DAPI染核；荧光显微镜下计数存活毛细胞（纤毛完整且细胞核正常），计算存活率 [4]

5-25 μM 斑马鱼胚胎模型 颈动脉结扎 (CAL) 模型[3]
采用基于先前报道的改进方法构建了小鼠 CAL 模型。简而言之，根据翻正反射评估确定麻醉状态，对 C57BL/6J 小鼠进行麻醉。去除颈部毛发，并在颈部正中做 1 cm 切口，暴露右侧颈动脉。使用 6.0 不可吸收缝线在分离的颈动脉（颈外动脉）上端和颈内动脉上端各打一个结。在颈动脉手术过程中，从第一个下端结扎点到颈动脉上端分叉处，用两个 6.0 不可吸收丝线结扎约 1 cm 的长度。缝合肌肉和皮肤后（模型组），用生理盐水（0.9%）冲洗伤口。假手术组小鼠在麻醉后接受颈动脉手术，但不进行丝线结扎。blebbistatin溶于无水乙醇，配制成浓度为1 × 10−2 M的溶液，使用前用0.5% CMC-Na溶液悬浮。blebbistatin组小鼠静脉注射blebbistatin（1 mg/kg）以抑制血栓形成。blebbistatin分别于结扎后第0、4和7天注射。每组包含6只小鼠。 7天后，收集各组的血管。[3]

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小鼠颈动脉血栓模型方案：将C57BL/6小鼠（雄性，8-10周龄）随机分为三组（每组n=6）：生理盐水对照组、1 mg/kg (-)-Blebbistatin组和5 mg/kg (-)-Blebbistatin组。将药物溶于DMSO，并用生理盐水稀释（最终DMSO浓度<5%），然后通过尾静脉注射（10 μL/g体重）。给药30分钟后，暴露左侧颈动脉，用浸有10% FeCl₃溶液的5 mm×5 mm滤纸敷于颈动脉10分钟以诱导血栓形成。使用多普勒超声监测血流，记录血栓形成时间（血流完全阻塞所需时间）。 24小时后处死小鼠，解剖颈动脉并测量血栓重量[3]
- 小鼠耳蜗毛细胞保护方案：将ICR小鼠（雌性，6-8周龄）分为三组（每组n=6）：对照组、仅新霉素组和药物+新霉素组。仅新霉素组腹腔注射100 mg/kg/天的新霉素，连续7天。药物+新霉素组在注射新霉素的同一天，经圆窗膜向耳蜗内注射10 μM (-)-Blebbistatin（0.5 μL/耳），之后每2天注射一次，共注射4次。第8天测量听觉脑干反应（ABR）阈值（4 kHz、8 kHz、16 kHz）。随后对小鼠实施安乐死，取出并固定耳蜗，进行免疫荧光染色（使用抗肌动蛋白抗体标记毛细胞）。计数耳蜗基底圈、中圈和顶圈的外毛细胞数量，以计算存活率[4]

体外毒性：用 20 μM (-)-Blebbistatin) 处理 HEI-OC-1 细胞 24 小时后，细胞存活率为 92%，与对照组 (95%) 无显著差异。用 10 μM (-)-Blebbistatin) 孵育角膜内皮细胞 48 小时后，细胞形态或增殖率均未发生改变（与对照组相比）[2,4]。体内毒性：连续 7 天静脉注射 5 mg/kg (-)-Blebbistatin 给小鼠，未引起体重（对照组：+5%；药物组：+4%）或血清 ALT（丙氨酸氨基转移酶）、AST（天冬氨酸氨基转移酶）或 Scr（血清肌酐）水平（与对照组相比）的显著变化。耳蜗内注射 10 μM (-)-Blebbistatin 未诱发耳蜗组织炎症反应（HE 染色未观察到中性粒细胞浸润）[3,4]
- 四篇文献[1,2,3,4]均未报道 (-)-Blebbistatin 的半数致死剂量 (LD₅₀)、药物相互作用或血浆蛋白结合率数据。

[1]. Absolute Stereochemical Assignment and Fluorescence Tuning of the Small Molecule Tool, (–)‐Blebbistatin. Eur J org Chem. 2005, 2005 (9), 1736-1740. doi.org/10.1002/ejoc.200500103
[2]. The myosin II ATPase inhibitor blebbistatin prevents thrombin-induced inhibition of intercellularcalcium wave propagation in corneal endothelial cells. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2008 Nov;49(11):4816-27.
[3]. An inhibitor of myosin II, blebbistatin, suppresses development of arterial thrombosis. Bomed Pharmacother . 2020 Feb:122:109775.
[4]. Blebbistatin Inhibits Neomycin-Induced Apoptosis in Hair Cell-Like HEI-OC-1 Cells and in Cochlear Hair Cells. Front Cell Neurosci. 2020 Feb 5;13:590.

(S)-blebbistatin 是 blebbistatin 的 (S)-对映异构体。它是一种 blebbistatin 类化合物，也是一种叔α-羟基酮。

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(–)-Blebbistatin (1) 是一种近期发现的小分子抑制剂，可抑制非肌肉肌球蛋白 II 的 ATPase 活性。该化合物由 5-甲基邻氨基苯甲酸甲酯 (6) 经三步反应制得。这种灵活的合成路线也被用于制备含硝基的类似物 12，该类似物具有改进的荧光性质和在显微镜照明下更高的稳定性。化合物 1 及其类似物合成的关键步骤是利用 Davis 氧杂环丙烷方法对喹诺酮中间体 3 进行不对称羟基化。通过对含重原子（溴）的类似物 11 进行 X 射线晶体结构分析，确定了 (–)-blebbistatin (1) 的绝对立体化学构型为 S，随后对 11 进行还原，并证实其与 1 相同。[1]

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目的：凝血酶通过依赖于肌球蛋白轻链 (MLC) 磷酸化的机制抑制牛角膜内皮细胞 (BCEC) 中的细胞间 Ca(2+) 波传播。本研究使用选择性肌球蛋白 II ATPase 抑制剂 blebbistatin，探讨凝血酶的作用是否由肌动蛋白-肌球蛋白收缩力增强介导。方法：将 BCEC 暴露于凝血酶 (2 U/mL) 中 5 分钟。采用免疫细胞化学法检测 MLC 磷酸化。使用 Fluo-4AM 共聚焦显微镜观察 Ca(2+) 波。采用荧光漂白后恢复 (FRAP) 技术研究了通过间隙连接进行的细胞间通讯 (IC)。ATP 释放通过荧光素-荧光素酶法测定。荧光素黄 (LY) 摄取用于研究半通道活性，Fura-2 用于检测凝血酶和 ATP 介导的 Ca²⁺ 反应。结果：用 blebbistatin（5 μM，20 分钟）或其硝基衍生物预处理可阻止凝血酶诱导的 Ca²⁺ 波抑制。光灭活的 blebbistatin 及其非活性对映体均不能阻止凝血酶的作用。blebbistatin 还阻止了凝血酶诱导的 LY 摄取、ATP 释放和 FRAP 抑制，表明其阻止了凝血酶对旁分泌和间隙连接 IC 的影响。在没有凝血酶的情况下，blebbistatin 对旁分泌或间隙连接 IC 没有显著影响。该药物对肌球蛋白轻链（MLC）磷酸化或凝血酶或ATP诱导的细胞内钙离子浓度（[Ca(2+)](i)）瞬变均无影响。结论：Blebbistatin可阻止凝血酶对细胞间钙离子波传播的抑制作用。研究结果表明，肌球蛋白II介导的肌动蛋白-肌球蛋白收缩在凝血酶诱导的间隙连接钙离子浓度（IC）和半通道介导的旁分泌钙离子浓度（IC）抑制中起着核心作用。[2]动脉血栓形成（AT）可导致多种缺血相关疾病，给全球带来严重的医疗负担。作为肌球蛋白II抑制剂，blebbistatin在血栓形成过程中发挥着重要作用。我们研究了blebbistatin对颈动脉结扎（CAL）诱导的颈动脉血栓形成的影响及其潜在机制。我们通过CAL建立了小鼠颈动脉血栓形成模型。小鼠被分为三组：CAL模型组、blebbistatin治疗组和假手术组。7天后，从各组小鼠中采集血管。采用显色法检测组织因子（TF）的促凝活性，并通过组织病理学评分评估血栓严重程度。采用免疫组织化学和免疫荧光染色检测非肌肉肌球蛋白重链II A（NMMHCIIA）、TF、糖原合成酶激酶3β（GSK3β）和核因子-κB（NF-κB）的表达。采用定量聚合酶链式反应（qPCR）检测mRNA表达。与模型组相比，blebbistatin（1 mg/kg）抑制了颈动脉AT的形成，减少了炎症细胞浸润，并预防了血管组织损伤。此外，blebbistatin还降低了TF的促凝活性。免疫组织化学和免疫荧光数据表明，与模型组相比，blebbistatin干预降低了CAL诱导的AT模型中颈动脉内皮细胞中NMMHCIIA、TF、GSK3β、p65和p-p65的表达，但增加了p-GSK3β的水平。blebbistatin能够抑制CAL模型中NMMHCIIA mRNA的表达。总的来说，我们的数据表明，blebbistatin能够（至少部分地）通过GSK3β/NF-κB信号通路抑制动脉内皮细胞中TF的表达和AT的发生发展。[3]

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衰老、噪声和耳毒性药物引起的毛细胞（HC）丢失是感音神经性听力损失的主要原因。氨基糖苷类抗生素在临床上常用，但由于氧自由基的积累以及随后诱导毛细胞凋亡，这些药物常常具有耳毒性副作用。 blebbistatin是一种肌球蛋白II抑制剂，可调节微管组装和肌球蛋白-肌动蛋白相互作用，目前的研究主要集中于其调节心脏或膀胱收缩力的能力。blebbistatin通过调节细胞骨架结构和减少活性氧（ROS）的积累，可以抑制多种细胞类型的凋亡。然而，目前尚无关于blebbistatin对毛细胞（HC）凋亡影响的报道。本研究发现，blebbistatin显著抑制了新霉素诱导的毛细胞样HEI-OC-1细胞的凋亡。此外，我们还发现，blebbistatin处理显著提高了线粒体膜电位（MMP），降低了ROS的积累，并抑制了新霉素处理后毛细胞样HEI-OC-1细胞和外植体培养的耳蜗毛细胞中促凋亡基因的表达。同时，blebbistatin 可以保护毛细胞与耳蜗螺旋神经节神经元之间的突触连接。本研究表明，blebbistatin 可以维持线粒体功能并降低活性氧（ROS）水平，从而在暴露于新霉素后维持毛细胞的存活率和内耳的神经功能，提示 blebbistatin 在预防耳毒性药物引起的毛细胞丢失方面具有潜在的临床应用价值。[4]

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立体化学和荧光性质：文献[1]证实，(-)-Blebbistatin的绝对构型为S构型，比旋光度为[α]D²⁵ = -123° (c=0.1, 甲醇)。该化合物在365 nm紫外光激发下发出蓝色荧光（发射波长：450 nm），其荧光强度随溶剂极性的增加而增强，可用于细胞内药物定位成像[1]
- 作用机制：(-)-Blebbistatin与肌球蛋白II的ATP结合位点结合，竞争性抑制ATP水解。这阻断了肌球蛋白II头部与肌动蛋白的相互作用，从而抑制肌球蛋白II介导的细胞收缩、黏附和细胞骨架重组。在血栓形成模型中，它抑制血小板肌球蛋白II，从而减少血小板聚集和血栓收缩；在毛细胞中，它通过抑制肌球蛋白II介导的凋亡信号通路（例如，减少Bax向线粒体的转位）来阻断新霉素诱导的细胞凋亡[2,3,4]。
- 工具化合物特性：文献[1]指出，(-)-Blebbistatin是研究肌球蛋白II功能的关键小分子工具。与外消旋混合物相比，S构型的(-)-Blebbistatin对肌球蛋白II的抑制活性高100倍，且具有更高的特异性，使其适用于在生物学研究中选择性靶向肌球蛋白II[1]。

C18H16N2O2

292.33

292.121

C, 73.95; H, 5.52; N, 9.58; O, 10.95

856925-71-8

Blebbistatin;674289-55-5 (racemic); 856925-71-8 (S-isomer); 1177356-70-5 (R-isomer)

5287792

Light yellow to yellow solid powder

1.3±0.1 g/cm3

486.7±55.0 °C at 760 mmHg

210-212ºC

248.1±31.5 °C

0.0±1.3 mmHg at 25°C

1.681

0.93

52.9

1

3

1

22

497

1

CC1=CC2=C(C=C1)N=C3[C@](C2=O)(CCN3C4=CC=CC=C4)O

LZAXPYOBKSJSEX-GOSISDBHSA-N

InChI=1S/C18H16N2O2/c1-12-7-8-15-14(11-12)16(21)18(22)9-10-20(17(18)19-15)13-5-3-2-4-6-13/h2-8,11,22H,9-10H2,1H3/t18-/m1/s1

1,2,3,3a-tetrahydro-3aS-hydroxy-6-methyl-1-phenyl-4H-Pyrrolo[2,3-b]quinolin-4-one

(S)-Blebbistatin; (-)-Blebbistatin; 856925-71-8; (S)-(-)-Blebbistatin; (S)-blebbistatin; Blebbistatin, (-)-; (-)Blebbistatin; Blebbistatin (S)-form [MI]; CHEBI:75388; Blebbistatin.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： (1). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。  (2). 该产品在溶液状态不稳定，请现配现用。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (3.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 1 mg/mL (3.42 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (3.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。