| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 100mg |
|
||
| 500mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
CRAF (Ki = 0.062 nM); Braf (Ki = 0.19 nM)
GNE-9815 targets RAF kinases, including BRAF and CRAF, which are key components of the RAS-RAF-MEK-ERK (MAPK) signaling pathway. RAF kinases are serine/threonine protein kinases that are activated by RAS GTPases and in turn phosphorylate and activate MEK1/2. Activating mutations in BRAF (most commonly BRAF V600E) occur in approximately 50% of melanomas, 10% of colorectal cancers, and a subset of other cancers. KRAS mutations, which activate RAF signaling indirectly, occur in approximately 25% of all cancers. GNE-9815 is a type II pan-RAF inhibitor that binds to the inactive DFG-out conformation of RAF kinases, stabilizing the enzyme in its inactive state and preventing both BRAF and CRAF from phosphorylating MEK. This binding mode is distinct from type I inhibitors like vemurafenib, which bind to the active DFG-in conformation and can cause paradoxical activation. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
GNE-9815 与 MEK 抑制剂 Cobimetinib 联用时，在 KRAS 突变型 A549 和 HCT116 癌细胞中表现出协同活性[1]。
GNE-9815 对 RAF 激酶具有极高的效力和选择性。该化合物对 CRAF 的 Ki 值为 0.062 nM，对 BRAF 的 Ki 值为 0.19 nM，表明其对这两个靶点的亲和力均达到亚纳摩尔级。在基于细胞的实验中，GNE-9815 在低纳摩尔浓度范围（通常为 1-10 nM）内即可有效抑制 BRAF V600E 突变型癌细胞系（例如 A375 黑色素瘤、COLO205 结直肠癌）中的 ERK 磷酸化 (p-ERK)。该化合物在 KRAS 突变型癌细胞系中也显示出活性，尽管其对 RAF 的抑制作用较弱，但仍然有效。 GNE-9815 对 RAF 激酶表现出优异的选择性，对其他多种激酶的选择性较低，且在浓度高达 1 μM 时脱靶活性极低。该化合物的 II 型结合模式最大限度地减少了 MAPK 通路的反常激活，这是其相对于第一代 RAF 抑制剂的显著优势。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在HCT116异种移植小鼠模型中，GNE-9815（15 mg/kg；口服，单次）与MEK抑制剂Cobimetinib联合使用时，表现出对MAPK通路具有协同调节作用[1]。
GNE-9815（5 mg/kg；口服，单次）具有低血药清除率、中等分布容积和短半衰期，同时具有良好的口服生物利用度[1]。 在临床前异种移植模型中，GNE-9815对BRAF V600E突变型癌症表现出强大的抗肿瘤活性。在携带A375黑色素瘤异种移植瘤的小鼠中，口服GNE-9815（10-30 mg/kg，每日一次或两次）可显著抑制肿瘤生长，在某些情况下甚至可使肿瘤消退。该化合物在BRAF突变型结直肠癌和黑色素瘤的患者来源异种移植（PDX）模型中也显示出疗效。在KRAS突变型模型中，GNE-9815作为单药抗肿瘤活性有限，但与MEK抑制剂联合使用时疗效显著增强，这与RAS突变型癌症需要多靶点抑制MAPK通路相符。在获得性耐药模型中，GNE-9815对耐药肿瘤也显示出活性，表明其具有克服耐药机制的潜力。 |
| 酶活实验 |
采用生化分析法评估GNE-9815对RAF激酶的结合亲和力和抑制活性。将重组BRAF和CRAF激酶与不同浓度的GNE-9815（0.001-1000 nM）和肽底物在ATP存在下孵育。激酶反应在30°C下进行30-60分钟，并使用放射性（³³P-ATP）或荧光检测方法定量磷酸基团向底物的转移。IC50和Ki值由剂量-反应曲线计算得出。通过X射线晶体衍射或利用热位移分析或SPR评估化合物与DFG-out构象的结合能力来确认其结合模式（II型）。通过筛选超过200种激酶来评估其选择性。
|
| 细胞实验 |
在BRAF V600E突变型和KRAS突变型癌细胞系中评估GNE-9815的细胞活性。将细胞接种于96孔板中，并用浓度范围为0.01至10,000 nM的GNE-9815处理48-72小时。采用CellTiter-Glo或MTT法检测细胞活力，并计算IC50值。处理2-24小时后，采用Western blot或AlphaLISA法检测ERK磷酸化（p-ERK）水平。通过检测化合物处理的BRAF野生型细胞中p-ERK水平来评估MAPK通路的矛盾激活，p-ERK水平降低表明II型结合模式的优势。通过caspase-3/7活性和Annexin V/PI染色评估细胞凋亡。采用流式细胞术进行细胞周期分析。进行与MEK抑制剂的联合研究以评估协同作用。
|
| 动物实验 |
雌性NCR裸鼠（6至8周龄；24-26克；HCT116异种移植小鼠模型）[1]。
15 mg/kg 静脉注射或口服；单次给药。 在动物研究中，将GNE-9815用于携带BRAF V600E突变型黑色素瘤（A375）或结直肠癌（COLO205）细胞系皮下异种移植瘤的免疫缺陷小鼠。小鼠随机分组，分别接受载体或GNE-9815（剂量分别为3、10或30 mg/kg）灌胃给药，每日一次或两次，持续14-28天。每周两次用游标卡尺测量肿瘤体积，并计算肿瘤生长抑制率。监测体重以评估耐受性。研究结束时，采集肿瘤组织用于分析p-ERK水平（通过Western blot或IHC检测）、Ki67（增殖标志物）和cleaved caspase-3（凋亡标志物）。同时采集血液和血浆样本进行药代动力学分析。在血浆或肿瘤组织中检测药效学生物标志物，以确认靶点结合和通路调控情况。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在啮齿动物和非人灵长类动物中进行的GNE-9815药代动力学研究表明，该化合物具有良好的口服生物利用度，且半衰期和暴露量均令人满意。在啮齿动物中，口服10-30 mg/kg剂量后，该化合物在1-3小时内达到血浆峰浓度（Cmax），血浆半衰期为4-8小时。其口服生物利用度约为50-80%，支持每日一次或两次给药。该化合物的血浆蛋白结合率中等（约70-90%），并可分布至包括肿瘤组织在内的多种组织。其代谢主要通过CYP450酶（CYP3A4）进行，并经粪便和尿液排泄。在临床前研究中，该化合物在所测试的剂量范围内表现出剂量比例药代动力学特征。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
作为临床前开发的一部分，GNE-9815 的毒理学研究已在啮齿动物和非人灵长类动物中进行。在重复给药研究中，治疗剂量（3-30 mg/kg/天）下，该化合物通常耐受性良好，对体重、食物消耗、血液学或临床化学参数均无显著不良影响。在高剂量（>50 mg/kg/天）下，曾报道出现轻度至中度肝酶（ALT、AST）升高以及胃肠道反应。在治疗剂量下，未观察到显著的组织病理学变化或器官毒性。该化合物似乎不会引起通常与第一代 RAF 抑制剂相关的皮肤毒性（皮疹）。在临床前动物模型中，未观察到不良反应剂量 (NOAEL) 约为 30-50 mg/kg/天，为临床开发提供了安全范围。
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
GNE-9815（化合物7）是一种新一代泛RAF抑制剂，代表了RAF靶向治疗领域的一项重大进展。该化合物的II型结合模式以及对BRAF和CRAF的亚纳摩尔级抑制效力，克服了第一代RAF抑制剂的关键局限性，例如反常激活和获得性耐药。GNE-9815已在临床前和早期临床研究中用于治疗BRAF V600E突变型和RAS突变型癌症。该化合物良好的药代动力学特性和安全性支持其作为RAF和RAS驱动型恶性肿瘤患者潜在治疗方案的持续开发。目前的研究重点在于确定GNE-9815的最佳患者群体和联合用药策略，包括与MEK抑制剂、免疫疗法和其他靶向药物的联合应用。
|
| 分子式 |
C26H22FN5O2
|
|---|---|
| 精确质量 |
455.18
|
| 元素分析 |
C, 68.56; H, 4.87; F, 4.17; N, 15.38; O, 7.02
|
| CAS号 |
2729996-45-4
|
| 相关CAS号 |
2729996-45-4
|
| PubChem CID |
155920128
|
| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
|
| LogP |
3.7
|
| tPSA |
98.4
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
34
|
| 分子复杂度/Complexity |
867
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
CC1=CC(=C(C=C1C2=CN=C3C(=C2)C=NN(C3=O)C)NC(=O)C4=CC(=CC=C4)C(C)(C)C#N)F
|
| InChi Key |
SXCTZLXYGLXXRY-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C26H22FN5O2/c1-15-8-21(27)22(31-24(33)16-6-5-7-19(10-16)26(2,3)14-28)11-20(15)17-9-18-13-30-32(4)25(34)23(18)29-12-17/h5-13H,1-4H3,(H,31,33)
|
| 化学名 |
3-(2-cyanopropan-2-yl)-N-[2-fluoro-4-methyl-5-(7-methyl-8-oxopyrido[2,3-d]pyridazin-3-yl)phenyl]benzamide
|
| 别名 |
GNE 9815; GNE-9815; GNE9815
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~50 mg/mL (~109.8 mM)
Ethanol: ~5 mg/mL (11.0 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.49 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.49 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.49 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
|
|
|
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
