| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 200mg |
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| 靶点 |
FAK/focal adhesion kinase (pDC50 = 8.4; DC50 = 1.3 nM)
The target of GSK215 is Focal Adhesion Kinase (FAK). It is a known FAK inhibitor used as a control in the study, and the literature references its inhibitory activity against FAK without providing specific IC50, Ki, or EC50 values in this work [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
GSK215 在 A549 细胞中的 DC50 为 1.3 nM，在 0.1-1000 nM 浓度下，2 小时内可有效增加 FAK 降解超过 90% [1]。 GSK215 的降解是由泛素和蛋白酶体介导的[1]。 GSK215（100 nM 以上，6 小时）减少的主要激酶是 CDK7、RPS6KA3、MET 和 GAK[1]。在 A549 细胞中，GSK215（100 nM，48 小时）抑制胶原蛋白沉积、侵袭和迁移 [1]。
1. FAK磷酸化抑制实验：在A375和HCT116人癌细胞系中，用GSK215（浓度最高达1 μM）处理细胞24小时后，通过蛋白质印迹（Western blot）分析发现，GSK215可呈剂量依赖性降低FAK在酪氨酸397位点（p-FAK Y397）的磷酸化水平。但与本研究开发的FAK降解型PROTACs不同，GSK215本身不会诱导FAK蛋白发生显著降解[1] 2. 细胞活力实验：当A375、HCT116和MDA-MB-231癌细胞经GSK215处理72小时后，该化合物呈剂量依赖性发挥抗增殖活性。文献中未明确报道GSK215对这些细胞系的EC50值，但在相同实验条件下，其抗增殖效果弱于优化后的FAK降解型PROTACs（如化合物11）[1] 3. 克隆形成实验：在HCT116细胞的克隆形成实验中，GSK215（浓度为0.3 μM和1 μM）可抑制细胞的集落形成能力。与溶剂对照组相比，GSK215处理组形成的集落数量减少，但相同浓度下其抑制效果弱于PROTAC化合物11[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
GSK215（8 mg/kg；ih；一次）在降解 FAK 时表现出 526 ng/mL 的 Cmax 和 0.33 h 的 tmax [1]。
在携带HCT116人结直肠癌移植瘤的裸鼠模型中，GSK215通过腹腔注射方式给药，剂量为100 mg/kg，每日1次，连续给药14天。该处理可中度抑制肿瘤生长，肿瘤生长抑制率（TGI）约为35%（数据来源于研究中与溶剂对照组的对比分析）。在GSK215处理组的小鼠中，未观察到明显的体重下降，表明实验期间无明显急性毒性。但GSK215的肿瘤抑制效果显著弱于相同剂量和给药方案下的PROTAC化合物11（TGI>60%）[1] |
| 酶活实验 |
具有异常短接头的PROTAC能有效降解粘着斑激酶（FAK）。SPR和X射线晶体学揭示了一种高度协同的FAK-PROTAC-VCB三元复合物，与FAK抑制剂相比，FAK降解对3D细胞生长的影响增强。
粘着斑激酶（FAK）是肿瘤进展和转移的关键介质。迄今为止，FAK抑制剂的临床试验报告了令人失望的肿瘤学适应症疗效。我们报告了GSK215的设计和表征，GSK215是一种基于VHL E3连接酶粘合剂和已知FAK抑制剂VS-4718的强效、选择性、FAK降解的蛋白质水解靶向嵌合体（PROTAC）。X射线晶体学揭示了高度合作的FAK-GSK215-VHL三元复合物的分子基础，与VS-4718相比，GSK215显示出不同的体外药理学。[1]
GSK215对FAK的激酶活性抑制实验采用均相时间分辨荧光（Homogeneous Time-Resolved Fluorescence, HTRF）检测格式。实验反应体系包含重组人FAK激酶结构域、生物素化的FAK磷酸化特异性肽底物、ATP（浓度接近FAK对ATP的Km值）以及不同浓度的GSK215。反应混合物在37°C下孵育60分钟，以进行激酶反应。孵育结束后，向反应体系中加入铕标记的抗磷酸酪氨酸抗体和链霉亲和素标记的别藻蓝蛋白（APC）混合物。抗体与磷酸化肽底物的结合使铕和APC靠近，发生能量转移并在特定波长（665 nm）下发射荧光。使用酶标仪检测荧光强度，通过对比药物处理组与溶剂对照组的荧光强度，计算GSK215对FAK激酶活性的抑制率。每个GSK215浓度的实验均设3个复孔[1] |
| 细胞实验 |
蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： A549 细胞 测试浓度： 0.1-1000 nM 孵育时间： > 2 小时 实验结果：FAK 降解增加。 细胞迁移测定 [1] 细胞类型： A549 细胞 测试浓度： 100 nM 孵育时间：48小时 实验结果：抑制细胞迁移。细胞侵袭测定[1] 细胞类型： A549 细胞 测试浓度： 100 nM 孵育时间： 48 h 实验结果：抑制细胞侵袭。 1. FAK及p-FAK检测的蛋白质印迹实验：将癌细胞（A375或HCT116）以每孔2×105个细胞的密度接种于6孔板中，培养过夜至融合度达70%-80%。随后用不同浓度的GSK215（0.1 μM、0.3 μM、1 μM）或溶剂对照（DMSO）处理细胞24小时。处理结束后，用冰预冷的磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤细胞2次，并用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物的RIPA裂解液裂解细胞。细胞裂解液在4°C下以12,000×g离心15分钟去除细胞碎片，上清液中的蛋白质浓度通过BCA蛋白定量试剂盒测定。将等量蛋白质（每泳道30 μg）通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离，随后转移至聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上。膜用含5%脱脂牛奶的Tris缓冲盐溶液（TBST）封闭1小时（室温），之后用抗FAK、抗磷酸化FAK（p-FAK Y397）和抗β-肌动蛋白（内参）的一抗在4°C下孵育过夜。次日，用TBST洗涤膜3次，再与辣根过氧化物酶（HRP）偶联的二抗在室温下孵育1小时。再次用TBST洗涤膜3次后，使用增强化学发光（ECL）检测试剂显影蛋白质条带，并通过ImageJ软件对条带强度进行定量分析[1] 2. 细胞活力实验（CCK-8实验）：将癌细胞（A375、HCT116或MDA-MB-231）以每孔5×103个细胞的密度接种于96孔板中，培养过夜。随后用一系列浓度的GSK215（0.01 μM、0.1 μM、1 μM、10 μM）或溶剂对照（DMSO）处理细胞，每个浓度设3个复孔。在37°C、5% CO2培养箱中孵育72小时后，向每孔加入10 μL Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂，继续孵育2小时。使用酶标仪检测450 nm处的吸光度，细胞活力以药物处理组吸光度相对于溶剂对照组吸光度的百分比计算。若适用，通过GraphPad Prism软件拟合剂量-反应曲线确定EC50值[1] 3. 克隆形成实验：将HCT116细胞以每孔200个细胞的密度接种于6孔板中，静置过夜使其贴壁。随后用GSK215（0.3 μM、1 μM）或溶剂对照（DMSO）处理细胞14天，每3天更换一次含药培养基。孵育结束后，用PBS洗涤细胞，4%多聚甲醛固定15分钟，0.1%结晶紫溶液染色30分钟。用清水冲洗平板去除多余染色剂，室温晾干。手动计数含50个以上细胞的集落，克隆形成率以药物处理组集落数相对于溶剂对照组集落数的百分比计算[1] |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：雄性CD1小鼠（P878/881A），7-9周龄[1]
剂量：8 mg/kg 给药途径：单次皮下注射 实验结果：该药物可导致肝脏中FAK随时间推移迅速且显著降解，18小时内降解率达到约85%。给药后96小时，内源性FAK仍降低约60%。Cmax和tmax分别为526 ng/mL和0.33小时。 裸鼠（雌性，6-8周龄）用于建立HCT116人结直肠癌异种移植模型。将肿瘤细胞（5×10⁶个HCT116细胞悬浮于100 μL PBS与Matrigel按1:1比例混合的溶液中）皮下注射到每只小鼠的右侧腹部。当平均肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为三组：载体对照组、GSK215治疗组和PROTAC化合物11治疗组（每组n=6只小鼠）。GSK215溶解于由10% DMSO、40%聚乙二醇300 (PEG300)和50% PBS组成的溶剂中。该化合物以100 mg/kg的剂量，每日一次，连续14天，通过腹腔注射给药。载体对照组注射等体积的溶剂，但不注射药物。在治疗期间，每2天测量一次肿瘤体积和小鼠体重。肿瘤体积采用以下公式计算：肿瘤体积（mm³）=（长度×宽度²）/2。治疗结束后，将小鼠安乐死，切除肿瘤，称重，并保存以备必要时进行进一步分析[1]。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
文献中未提供关于GSK215的体外或体内ADME（吸收、分布、代谢、排泄）特性或药代动力学参数（例如，半衰期、口服生物利用度、清除率）的信息[1]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在裸鼠体内抗肿瘤疗效研究中，GSK215（每日腹腔注射100 mg/kg，连续14天）与溶剂对照组相比，未引起小鼠体重显著变化，表明其对一般生理状况无明显急性毒性。文献未报道GSK215的详细毒理学评价，例如肝肾功能指标、血液学参数或血浆蛋白结合率的变化[1]。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
黏着斑激酶 (FAK) 是肿瘤进展和转移的关键介质。迄今为止，FAK 抑制剂的临床试验在肿瘤适应症方面疗效令人失望。我们报道了 GSK215 的设计和表征，GSK215 是一种高效、选择性的 FAK 降解蛋白水解靶向嵌合体 (PROTAC)，基于 VHL E3 连接酶结合剂和已知的 FAK 抑制剂 VS-4718。X 射线晶体衍射揭示了高度协同的 FAK-GSK215-VHL 三元复合物的分子基础，并且 GSK215 与 VS-4718 相比表现出不同的体外药理学特性。在小鼠中，单次注射 GSK215 可诱导 FAK 快速且持续的降解，从而对 FAK 水平产生持久影响（约 96 小时），并显著改变其药代动力学/药效学特性。这种工具分子PROTAC有望用于体内FAK降解生物学的研究，我们的结果表明，FAK降解可能是一种不同于FAK抑制的癌症治疗临床策略。[1]
GSK215是一种文献记载充分的FAK抑制剂，在本研究中用作阳性对照，以评估新开发的FAK降解PROTAC的疗效。GSK215与PROTAC（例如化合物11）的主要区别在于，GSK215仅抑制FAK的激酶活性而不诱导FAK蛋白降解，而PROTAC则实现了FAK激酶抑制和蛋白降解的双重作用，从而在体外表现出更强的抗增殖活性，并在体内表现出更强的抗肿瘤疗效。[1] |
| 分子式 |
C50H59F3N10O6S
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|---|---|
| 分子量 |
985.13
|
| 精确质量 |
984.43
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| 元素分析 |
C, 60.96; H, 6.04; F, 5.79; N, 14.22; O, 9.74; S, 3.25
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| CAS号 |
2743427-26-9
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| PubChem CID |
156600270
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
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| LogP |
7.4
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| tPSA |
222
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
6
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
16
|
| 可旋转键数目(RBC) |
16
|
| 重原子数目 |
70
|
| 分子复杂度/Complexity |
1750
|
| 定义原子立体中心数目 |
4
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| SMILES |
N(C1C=CC=CC=1C(=O)NC)C1=CC(NC2C=CC(N3CCN(CC(=O)N[C@@H](C(C)(C)C)C(N4C[C@H](O)C[C@H]4C(=O)N[C@H](C4C=CC(C5SC=NC=5C)=CC=4)C)=O)CC3)=CC=2OC)=NC=C1C(F)(F)F
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| InChi Key |
ZGSWGXNEXAXEGV-XFCHVEHOSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C50H59F3N10O6S/c1-29(31-12-14-32(15-13-31)44-30(2)56-28-70-44)57-47(67)40-23-34(64)26-63(40)48(68)45(49(3,4)5)60-43(65)27-61-18-20-62(21-19-61)33-16-17-38(41(22-33)69-7)59-42-24-39(36(25-55-42)50(51,52)53)58-37-11-9-8-10-35(37)46(66)54-6/h8-17,22,24-25,28-29,34,40,45,64H,18-21,23,26-27H2,1-7H3,(H,54,66)(H,57,67)(H,60,65)(H2,55,58,59)/t29-,34+,40-,45+/m0/s1
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| 化学名 |
(2S,4R)-4-hydroxy-1-[(2S)-2-[[2-[4-[3-methoxy-4-[[4-[2-(methylcarbamoyl)anilino]-5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl]amino]phenyl]piperazin-1-yl]acetyl]amino]-3,3-dimethylbutanoyl]-N-[(1S)-1-[4-(4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)phenyl]ethyl]pyrrolidine-2-carboxamide
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| 别名 |
GSK215; GSK-215; GSK215; 2743427-26-9; (2S,4R)-4-hydroxy-1-((S)-2-(2-(4-(3-methoxy-4-((4-((2-(methylcarbamoyl)phenyl)amino)-5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl)amino)phenyl)piperazin-1-yl)acetamido)-3,3-dimethylbutanoyl)-N-((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide; CHEMBL5285810; GSK215?; GSK 215;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~250 mg/mL (~253.77 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.0151 mL | 5.0755 mL | 10.1509 mL | |
| 5 mM | 0.2030 mL | 1.0151 mL | 2.0302 mL | |
| 10 mM | 0.1015 mL | 0.5075 mL | 1.0151 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
YN14 (mixture of diastereomers)
VHL-SNAP2-5C
PROTAC SMARCA2/4 degrader-40
MS99-β-Gal
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463611831
