ITF 3756

HDAC6

ITF3756是一种有效的选择性HDAC6抑制剂，可在体外降低人单核细胞和CD8 T细胞上PD-L1的表达，对抗CD8 T细胞的免疫衰竭，但对一组小鼠肿瘤细胞系没有直接的细胞毒性作用。[1]

在同基因肿瘤模型中，ITF3756显示出与抗PD1抗体相当的抗肿瘤活性，并伴随着免疫细胞浸润的增加和肿瘤反应性CD8和CD4细胞的产生。ITF3756在免疫缺陷动物中无活性，CD8或CD4细胞的选择性消耗严重削弱了ITF3756的抗肿瘤活性。与抗CTLA-4抗体联合使用，ITF3756可使50%的动物完全根除肿瘤。这些动物的再次攻击没有导致肿瘤生长，这表明联合治疗引发了肿瘤免疫。在NOD小鼠中，单独或联合抑制CTLA4阻断PD-1/PD-L1轴可显著加速自身免疫性糖尿病的发展，在某些治疗组中是致命的。相比之下，尽管ITF3756在PD-1/PD-L1轴上具有活性，但单独使用ITF3756或与抗CTLA4联合使用都不会导致任何显著的糖尿病诱导。我们得出结论，当ITF3756与抗CTLA-4抗体联合使用时，可诱导体内抗肿瘤免疫反应和持久的抗肿瘤活性。ITF3756单药治疗或与抗CTLA4联合治疗均未加速NOD小鼠自身免疫性糖尿病的诱导，这表明其具有良好的安全性，在GLP临床前毒理学研究中得到证实。ITF3756的I期临床试验将于今年启动。[2]

研究人员使用HDAC6抑制剂ITF3756、siRNA或CRISPR/Cas9基因编辑在不同的表观基因组背景下灭活HDAC6。这种失活不断导致染色质可及性的显著变化，特别是组蛋白H3赖氨酸9、14和27的乙酰化增加（ATAC-seq和H3K27Ac ChIP-seq分析）。转录组学、蛋白质组学和基因本体分析揭示了细胞增殖、粘附、迁移和凋亡过程中基因的变化。值得注意的是，HDAC6失活改变了P300泛素化，稳定了P300，导致了对癌细胞存活至关重要的基因的下调。[3]

[1]. Abstract 1358: The selective HDAC6 inhibitor ITF3756 stimulates an antitumor immune response and leads to tumor regression in combination with anti CTLA-4 antibody in a colon carcinoma murine model. Cancer Res (2022) 82 (12_Supplement): 1358.

[2]. Role of Fluorination in the Histone Deacetylase 6 (HDAC6) Selectivity of Benzohydroxamate-Based Inhibitors. ACS Med Chem Lett . 2021 Oct 11;12(11):1810-1817.

[3]. HDAC6 inhibition disrupts HDAC6-P300 interaction reshaping the cancer chromatin landscape. Clin Epigenetics . 2024 Aug 18;16(1):109.

利用抗体阻断免疫检查点的抑制活性来刺激肿瘤免疫反应，可以取得显著疗效，实现持久的肿瘤消退，但遗憾的是，这种疗效仅在少数患者中得以实现。为了克服疗效欠佳的问题，目前非临床和临床研究正致力于探索不同的靶点和联合疗法。值得注意的是，联合疗法的临床试验表明，其疗效有所提高，但不良反应也随之增加。HDAC6 是锌依赖性组蛋白去乙酰化酶家族的成员，具有独特的结构和功能。与许多其他 HDAC 家族成员不同，HDAC6 敲除小鼠能够存活，且没有表现出任何特殊的表型，这表明选择性 HDAC6 抑制剂应该具有良好的耐受性。由于 HDAC6 是细胞因子诱导的 PD-L1 表达的必要调节因子，因此 HDAC6 抑制剂可能在调节肿瘤免疫反应中发挥作用。本文报道了强效且选择性的HDAC6抑制剂ITF3756的体内疗效。ITF3756在体外可降低人单核细胞和CD8 T细胞上PD-L1的表达，并能对抗CD8 T细胞的免疫耗竭，但对多种小鼠肿瘤细胞系无直接细胞毒性作用。在同源肿瘤模型中，ITF3756的抗肿瘤活性与抗PD-1抗体的疗效相当，并伴有免疫细胞浸润增加以及肿瘤反应性CD8和CD4细胞的生成。ITF3756在免疫缺陷动物中无效，选择性清除CD8或CD4细胞会显著减弱ITF3756的抗肿瘤活性。与抗CTLA-4抗体联合使用时，ITF3756可使50%的动物肿瘤完全清除。对这些动物进行再次肿瘤攻击后，未观察到肿瘤生长，表明联合治疗已诱导了肿瘤免疫。在NOD小鼠中，单独阻断PD-1/PD-L1通路或与CTLA4抑制剂联合使用，均显著加速了自身免疫性糖尿病的发生发展，部分治疗组甚至出现死亡。相比之下，尽管ITF3756对PD-1/PD-L1通路具有活性，但单独使用ITF3756或与抗CTLA4抗体联合使用均未显著诱发糖尿病。我们得出结论，ITF3756可诱导体内抗肿瘤免疫反应，且与抗CTLA-4抗体联合使用时具有持久的抗肿瘤活性。ITF3756单药治疗或与抗CTLA4抗体联合使用均未加速NOD小鼠自身免疫性糖尿病的发生发展，提示其具有良好的安全性，这一结论已在临床前GLP毒理学研究中得到证实。ITF3756的I期临床试验将于今年启动。 [1]

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非选择性组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 抑制剂由于抑制多种必需的 HDAC 亚型而表现出剂量限制性副作用，而限制其选择性可以减轻或预防这些副作用。本文报道了斑马鱼 HDAC6 催化结构域 2 (zHDAC6-CD2) 与选择性 HDAC6 抑制剂 ITF3756 和 ITF3985 复合物的晶体结构，并阐明了氟化在苯并羟肟酸酯类化合物对 I 类同工酶的选择性中所起的作用。苯并羟肟酸酯类化合物选择性增强的原因在于氟化连接基团与 zHDAC6 的关键残基 Gly582、Ser531 和 His614 之间存在特异性相互作用，而 I 类 HDAC 同工酶中由于 Ser531 被天冬氨酸取代，这些相互作用受到阻碍。这些结果可用于设计和开发新型高选择性 HDAC6 抑制剂。[2]

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背景：组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 是基因表达、DNA 合成和细胞过程的关键调控因子，使其成为癌症研究的重要靶点。HDAC6 尤其影响蛋白质稳定性和染色质动力学。尽管 HDAC6 具有潜在的治疗价值，但其在基因调控和染色质重塑中的确切作用仍需进一步阐明。本研究探讨了 HDAC6 失活如何影响赖氨酸乙酰转移酶 P300 的稳定性，以及随后对癌细胞染色质结构和功能的影响。方法和结果：我们采用 HDAC6 抑制剂 ITF3756、siRNA 或 CRISPR/Cas9 基因编辑技术，在不同的表观基因组背景下使 HDAC6 失活。这种持续的失活导致染色质可及性发生显著变化，特别是组蛋白H3赖氨酸9、14和27的乙酰化水平升高（ATAC-seq和H3K27Ac ChIP-seq分析）。转录组学、蛋白质组学和基因本体论分析揭示了细胞增殖、黏附、迁移和凋亡相关基因的改变。值得注意的是，HDAC6失活改变了P300的泛素化，使其稳定，并导致对癌细胞存活至关重要的基因表达下调。结论：我们的研究强调了HDAC6失活对癌细胞染色质图谱的显著影响，并提示P300在抗癌效应中发挥作用。HDAC6抑制导致P300稳定，这提示治疗重点可能从HDAC6本身转移到其与P300的相互作用。这一发现为开发靶向癌症疗法开辟了新的途径，加深了我们对癌细胞表观遗传机制的理解。[3]

C13H11N5O2S

301.323740243912

301.063

C, 51.82; H, 3.68; N, 23.24; O, 10.62; S, 10.64

2247608-27-9

2247608-27-9;

135357843

Off-white to light yellow solid powder

1.3

121

2

6

4

21

365

0

UFUGFWWXDWPEQE-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C13H11N5O2S/c19-13(15-20)10-5-3-9(4-6-10)8-18-12(14-16-17-18)11-2-1-7-21-11/h1-7,20H,8H2,(H,15,19)

N-hydroxy-4-[(5-thiophen-2-yltetrazol-1-yl)methyl]benzamide

ITF 3756; 2247608-27-9; CHEMBL4448410; SCHEMBL20535199; TQR0243; EX-A7849; BDBM50531020; N-hydroxy-4-((5-(thiophen-2-yl)-1H-tetrazol-1-yl)methyl)benzamide;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : 125 mg/mL (414.84 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.90 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.90 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.90 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。