| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 100mg |
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| 500mg |
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| 靶点 |
ASK120067 (Limertinib) is an irreversible third-generation epidermal growth factor receptor (EGFR) tyrosine kinase inhibitor that selectively targets EGFR mutants, including the T790M resistance mutation and sensitizing mutations (exon19del, L858R). In enzyme assays, it inhibits EGFRL858R/T790M with an IC50 of 0.3 nM, EGFRT790M with an IC50 of 0.5 nM, EGFRexon19del with an IC50 of 0.5 nM, and wild-type EGFR (EGFRWT) with an IC50 of 6 nM [1].
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| 体外研究 (In Vitro) |
在体外激酶实验中，EGFR L858R/T790M 和 EGFR T790M 耐药突变体（IC50 值分别为 0.3 nM 和 0.5 nM）以及 EGFRexon19del 敏化突变体（IC50= 0.5 nM）均被 Limertinib 成功抑制。 EGFR 野生型 (EGFRWT) 是 50 nM ligertinib 的靶标 [1]。当应用于突变型 EGFR NSCLC 细胞时，incadratinib 对 NCI-H1975（T790M 突变）、PC-9 和 HCC827 细胞（致敏突变）显示出强大的抗增殖作用，IC50 值为 12 nM、6 nM 和 HCC827。它还选择性地抑制 EGFR 突变细胞系的发育。尽管如此，在 A431、LoVo 和 A549 细胞 (EGFRWT) 中，它表现出轻度至中度的抗生长作用，IC50 值范围为 338 nM 至 1541 nM [1]。即使在低剂量 (0.1-1 nM) 下，mirtertinib (0.1-100 nM) 也会抑制 NCI-H1975 细胞 (EGFRL858R/T790M) 中 EGFR 酪氨酸残基 1068 及其下游信号蛋白 AKT 和 ERK 的磷酸化。此外，在 10 至 100 nM 剂量下，limertinib 可抑制 EGFR WT A431 细胞中的 p-EGFR 以及 p-Akt 和 p-erk [1]。
- ASK120067可有效抑制携带EGFR突变的NSCLC细胞株增殖：NCI-H1975（EGFRL858R/T790M）IC50 = 12 ± 4 nM，PC-9（EGFRexon19del）IC50 = 6 ± 3 nM，HCC827（EGFRexon19del）IC50 = 2 ± 2 nM [1]。 对表达野生型EGFR的细胞作用较弱：A431 IC50 = 388 ± 158 nM，LoVo IC50 = 1916 ± 1126 nM，A549 IC50 = 1541 ± 359 nM [1]。 - 在NCI-H1975细胞中，ASK120067在0.1 nM即开始剂量依赖性抑制EGFR（Tyr1068）、AKT（Ser473）和ERK（T202/Y204）的磷酸化，1–10 nM时几乎完全抑制，效果与奥希替尼相当或更优 [1]。 在A431细胞（EGFRWT）中，即使10–100 nM也只能部分抑制p-EGFR [1]。 - ASK120067在NCI-H1975和PC-9细胞中以剂量和时间依赖性方式诱导凋亡，通过Annexin V/PI染色及cleaved PARP和cleaved caspase-3水平升高证实 [1]。 - 在PC-9细胞中，ASK120067同样抑制p-EGFR及下游信号，并诱导凋亡 [1]。 - 对ASK120067获得性耐药的NCI-H1975细胞（67R细胞）表现为Ack1（Tyr284）过度磷酸化，而总Ack1蛋白无增加 [1]。 该现象在培养细胞和移植瘤中均得到证实 [1]。 - 在亲本NCI-H1975细胞中外源表达Ack1可降低其对ASK120067的敏感性，而在67R细胞中敲低Ack1可部分恢复敏感性 [1]。 ASK120067与Ack1抑制剂（AIM-100、达沙替尼、博舒替尼）联用在耐药细胞中协同抑制增殖（联合指数<0.5）并恢复凋亡 [1]。 - 机制上，耐药细胞表现为p-AKT持续激活和促凋亡蛋白BIM的mRNA及蛋白水平下调 [1]。 联合ASK120067与Ack1抑制剂可抑制p-AKT并上调BIM，从而增强凋亡 [1]。 - ASK120067在奥希替尼耐药细胞（AZDR）中也观察到Ack1过度磷酸化，与Ack1抑制剂联用同样产生协同生长抑制 [1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
Limertinib（口服灌胃；5-20 mg/kg；每天一次；21天）强烈抑制肿瘤发展，肿瘤生长抑制（TGI）率为85.7%，给予10 mg/kg Limertinib可导致肿瘤急剧缩小TGI率为99.3%，与奥希替尼疗效相似[1]。
- 在NCI-H1975（EGFRL858R/T790M）异种移植瘤模型中，口服ASK120067每日一次，连续21天，1、5、10 mg/kg剂量组肿瘤生长抑制率（TGI）分别为85.7%和99.3%（10 mg/kg），与奥希替尼（10 mg/kg，TGI 99.3%）相当 [1]。 未观察到体重下降 [1]。 - 免疫组化分析显示，ASK120067治疗后NCI-H1975肿瘤组织中p-EGFR和p-AKT显著降低 [1]。 - 在PC-9（EGFRexon19del）移植瘤模型中，ASK120067（5、10 mg/kg，每日一次，28天）的TGI分别为86.0%和93.0% [1]。 - 在A431（EGFRWT）移植瘤模型中，ASK120067（5、10 mg/kg）疗效较弱（TGI分别<40%和61.8%），低于奥希替尼（10 mg/kg时TGI 82.9%）[1]。 - 在携带EGFRL858R/T790M的患者来源异种移植（PDX）模型（LU1868）中，ASK120067（3、10、20 mg/kg，每日一次，21天）的TGI分别为56.8%、76.7%和85.2% [1]。 免疫组化显示肿瘤中p-EGFR和Ki-67降低 [1]。 - 概念验证临床病例：一名74岁女性IV期EGFRexon19del NSCLC患者，在伊柯替尼治疗后进展（T790M阳性），在I期试验中接受ASK120067 40 mg每日一次治疗 [1]。 6周后CT扫描显示肺部肿瘤几乎完全消失，疗效持续超过1年 [1]。 - 在ASK120067耐药移植瘤模型（67R细胞）中，联合治疗（ASK120067 5 mg/kg + 达沙替尼25 mg/kg，每日一次，21天）显著抑制肿瘤生长，优于单药治疗，伴随p-AKT降低和TUNEL阳性凋亡细胞增加 [1]。 |
| 酶活实验 |
- 采用ELISA-based激酶活性测定法评估ASK120067的激酶抑制活性 [1]。
将重组EGFR蛋白（EGFRexon19del、EGFRL858R/T790M、EGFRT790M和EGFRWT）与系列稀释的ASK120067孵育，按先前描述的方案测量激酶活性 [1]。 IC50值来自至少三次独立实验 [1]。 - 使用商业激酶谱平台在100 nM浓度下对258种激酶进行选择性分析，结果显示ASK120067具有良好的选择性，主要强效抑制突变型EGFR [1]。 |
| 细胞实验 |
- 细胞增殖实验（SRB法）：细胞接种于96孔板，培养过夜后，用不同浓度ASK120067处理72小时 [1]。
采用磺酰罗丹明B（SRB）比色法测定细胞活力 [1]。 通过剂量反应曲线计算IC50值 [1]。 - 免疫印迹分析：细胞用SDS裂解缓冲液裂解，加热后经SDS-PAGE分离蛋白，转移至硝酸纤维素膜 [1]。 膜用5%脱脂牛奶-TBST封闭，与一抗（p-EGFR Tyr1068、EGFR、p-ERK、ERK、p-AKT Ser473、AKT、caspase-3、cleaved caspase-3、PARP、BIM、p-Ack1 Tyr284、Ack1及内参β-tubulin、β-actin、GAPDH）孵育 [1]。 洗膜后加HRP标记二抗，检测信号 [1]。 - 凋亡检测（流式细胞术）：细胞经ASK120067处理指定时间后，用Annexin V-FITC和碘化丙啶（PI）染色，流式细胞仪分析 [1]。 - 凋亡检测（TUNEL法）：肿瘤组织凋亡使用原位细胞死亡检测试剂盒（POD）检测 [1]。 石蜡切片脱蜡、蛋白酶K处理，与TUNEL反应液孵育，DAB显色，苏木素复染 [1]。 - 耐药细胞建立：NCI-H1975细胞持续暴露于递增浓度的ASK120067或奥希替尼，从5 nM开始，每2-3代逐步增加至1 μM [1]。 所得耐药细胞（67R对应ASK120067，AZDR对应奥希替尼）维持在含1 μM相应化合物的培养基中 [1]。 - 基因组分析：对亲本、67R和AZDR细胞进行全基因组测序 [1]。 通过qPCR评估DNA质量，分析测序数据 [1]。 - 定量RT-PCR：用Cell to cDNA试剂盒提取细胞总RNA，采用SYBR Green实时定量PCR检测BIM和GAPDH的mRNA表达 [1]。 引物序列：BIM正向5'-TGGGTATGCCTGCCACATTTC-3'，反向5'-CCACGTTTTTGACGATGGAGA-3'；GAPDH正向5'-CCACCCATGGCAAATTCCATGGCA-3'，反向5'-TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC-3' [1]。 - Ack1敲低：使用靶向Ack1的短发夹RNA（shRNA）在67R细胞中敲低Ack1表达 [1]。 评估对增殖和信号通路的影响 [1]。 - 联合指数分析：药物联合的协同效应通过联合指数（CI）评估；CI < 0.5表示强协同作用 [1]。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： BALB/cA 裸鼠[1]
剂量： 5-20 mg/kg 给药途径： 口服（po）；5-20 mg/kg；每日一次；21 天 实验结果： 动物耐受性良好，未观察到体重减轻。表现出显著且选择性的抗肿瘤疗效，并降低了肿瘤生长抑制率（TGI）。显著抑制肿瘤组织中 EGFR L858R/T790M 和 AKT 的磷酸化。 - NCI-H1975、PC-9 和 A431 异种移植瘤：将肿瘤细胞 (5×106) 皮下注射到 BALB/cA 裸鼠右侧腹部 [1]。 经过一次传代后，将发育良好的肿瘤切成 1.5 mm3 的小块，并使用套管针移植到裸鼠体内 [1]。 当肿瘤体积达到 100–200 mm3 时，将小鼠随机分为载体组和治疗组 [1]。 ASK120067 每日口服一次，剂量为 1、5 或 10 mg/kg，持续 21–28 天 [1]。 奥希替尼 (10 mg/kg) 用作阳性对照 [1]。 每周测量两次肿瘤生长情况。 [1]. - PDX模型（LU1868）：将携带EGFRL858R/T790M突变的患者来源异种移植瘤组织皮下植入裸鼠体内[1]。 当肿瘤体积达到150–200 mm3时，小鼠每日口服ASK120067，剂量分别为3、10或20 mg/kg，持续21天[1]。 - ASK120067耐药异种移植瘤模型：将67R细胞（ASK120067耐药）皮下注射到裸鼠体内[1]。 当肿瘤体积达到约100 mm3时，小鼠分别口服载体、ASK120067（5 mg/kg）或达沙替尼治疗。 （25 mg/kg），或每日一次联合用药，持续 21 天 [1]。 - 所有动物实验程序均已获得机构动物护理和使用委员会的批准，并遵循 AAALAC 指南 [1]。 |
| 参考文献 |
| 分子式 |
C29H32CLN7O2
|
|---|---|
| 分子量 |
546.063084602356
|
| 精确质量 |
545.23
|
| 元素分析 |
C, 63.79; H, 5.91; Cl, 6.49; N, 17.96; O, 5.86
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| CAS号 |
1934259-00-3
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| PubChem CID |
121371196
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| 外观&性状 |
White to yellow solid powder
|
| LogP |
5.7
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| tPSA |
94.6
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
11
|
| 重原子数目 |
39
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| 分子复杂度/Complexity |
789
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
N(C1C=C(OC)C(NC2=NC=C(Cl)C(NC3C=CC4C=CC=CC=4C=3)=N2)=CC=1NC(=O)C=C)(C)CCN(C)C
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| InChi Key |
QHPVTCLSVVUPOF-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C29H32ClN7O2/c1-6-27(38)33-23-16-24(26(39-5)17-25(23)37(4)14-13-36(2)3)34-29-31-18-22(30)28(35-29)32-21-12-11-19-9-7-8-10-20(19)15-21/h6-12,15-18H,1,13-14H2,2-5H3,(H,33,38)(H2,31,32,34,35)
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| 化学名 |
N-[5-[[5-chloro-4-(naphthalen-2-ylamino)pyrimidin-2-yl]amino]-2-[2-(dimethylamino)ethyl-methylamino]-4-methoxyphenyl]prop-2-enamide
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| 别名 |
1934259-00-3; ASK-120067; PRJ2UA27T7; RefChem:1077285; ASK120067;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~41.67 mg/mL (~76.31 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.58 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.81 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.8313 mL | 9.1565 mL | 18.3130 mL | |
| 5 mM | 0.3663 mL | 1.8313 mL | 3.6626 mL | |
| 10 mM | 0.1831 mL | 0.9157 mL | 1.8313 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
EGFR Ligand-Linker Conjugates 1
PROTAC Her3-binding moiety 2
EGFR ligand-14
EGFR ligand-14-PEG3-Boc
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