| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
ANXA2 (Kd = 1.4 µM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
PY-60 通过靶向 ANXA2[1] 激活 YAP。 PY-60 是一种噻唑取代凝胶，可在一定剂量下激活 293A-TEAD-LUC 细胞的荧光素酶活性。当以高密度注射细胞时（EC50 分别为 1.5 和 1.6 μM），不存在血清。此外，PY-60 处理导致 YAP 响应于细胞密度的增加而定位于核，并促进细胞中 TEAD 和 YAP 蛋白的结合。 PY-60在动物体内激活增殖性YAP来调节细胞收缩程序，并可以通过增殖诱导细胞凋亡[1]。 PY-60 还显着增加 293A 细胞和其他人类细胞中 YAP 控制的校准物（即 ANRKD1、CYR61 和 CTGF）的水平（即 MCF10A、HEK293T、H69 水平和 HaCaT）。 PY-60 通过从膜上释放 ANXA2-YAP 复合物来与 ANXA2 竞争磷酸肌醇的结合 [1]。
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| 体内研究 (In Vivo) |
苏木精和曙红以及抗 K14 组织学染色表明，当 PY-60 (10 μM) 局部应用于野生型 puncta C57BL/6 小鼠的皮肤表面 10 天时，导管细胞和 K14 前体细胞显着生长。由于 PY-60 的产生增加了皮肤单位长度的表皮细胞数量，因此尖端厚度大约增加了一倍 [1]。
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| 酶活实验 |
体外结合实验[1]
重组ANXA2是通过首先将编码C-末端六组氨酸标记的ANXA2（NM_001002858）的密码子优化的gBlock（IDT）亚克隆到pET-22b表达载体中而产生的。在转化为BL21细菌后，允许蛋白质表达24 30时的h °C，并摇动。重组ANXA2首先根据供应商的建议（Qiagen）通过基于标准分批镍次氮基三乙酸的纯化进行纯化，然后使用标准技术通过施胶柱分离到储存缓冲液中（20 mM Tris，137 mM NaCl和10%甘油pH 8.0）。交联反应通过加入1 µg重组ANXA2至100 µl，共1× PBS（250 nM ANXA2）和PY-PAP，使得其最终浓度如所示并且DMSO的最终浓度为1%（vol/vol）。样品在37 °C 1 h，然后进行基于UV-B的交联（365 nm），使用Stratalinker UV仪器进行10 最小下一个，10 如上所述添加µl浓缩点击反应主混合物和若丹明叠氮化物，并将反应孵育1 h。然后使用SDS–PAGE（100 ng重组蛋白/孔、15孔凝胶、4-12%Bis-tris BOLT凝胶，并使用ChemiDoc仪器进行可视化。使用Pierce银染试剂盒对上述反应的平行SDS–PAGE凝胶进行银染，以确认相同的重组蛋白负载量。 |
| 细胞实验 |
从C57BL/6新生动物中分离出原代小鼠角质形成细胞 日龄，然后在FAD完全培养基中的有丝分裂mycin-C处理的3T3饲养层上培养。DMSO载体对照或化合物PY-60（10 µM）在初始电镀期间添加到介质中。对于二次复制测定，将原代角质形成细胞传代到新的3T3细胞饲养层上。9点之后 生长几天后，角质形成细胞用多聚甲醛固定，然后用1%罗丹明染色 B[1]。
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| 动物实验 |
C57BL/6 WT mice (8 weeks of age) were treated once per day (topically, on the skin) for ten consecutive days with either vehicle only (acetone) or PY-60 (10 mg ml–1). The epidermis was assessed for thickness using H&E staining. Anti-K14 and anti-K167 immunofluorescent staining were used to assess cell expansion. In all models, animals were randomly assorted into groups of equal mean body weight before topical dosing. No animals were excluded from the analysis. The investigators were not blinded during group allocation or dosing. All animal studies were perfomed in compliance with protocols approved by the Boston Children’s Hospital Institutional Animal Care and Use Committee [1].
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
The transcriptional coactivator Yes-associated protein 1 (YAP) orchestrates a proproliferative transcriptional program that controls the fate of somatic stem cells and the regenerative responses of certain tissues. As such, agents that activate YAP may hold therapeutic potential in disease states exacerbated by insufficient proliferative repair. Here we report the discovery of a small molecule, termed PY-60, which robustly activates YAP transcriptional activity in vitro and promotes YAP-dependent expansion of epidermal keratinocytes in mouse following topical drug administration. Chemical proteomics revealed the relevant target of PY-60 to be annexin A2 (ANXA2), a protein that directly associates with YAP at the cell membrane in response to increased cell density. PY-60 treatment liberates ANXA2 from the membrane, ultimately promoting a phosphatase-bound, nonphosphorylated and transcriptionally active form of YAP. This work reveals ANXA2 as a previously undescribed, druggable component of the Hippo pathway and suggests a mechanistic rationale to promote regenerative repair in disease.[1]
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| 分子式 |
C16H15N3O2S
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|---|---|
| 分子量 |
313.37
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| 精确质量 |
313.09
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| 元素分析 |
C, 61.32; H, 4.82; N, 13.41; O, 10.21; S, 10.23
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| CAS号 |
2765218-56-0
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| PubChem CID |
155387479
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| 外观&性状 |
White to off-white solid
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| LogP |
3
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| tPSA |
96.3Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
22
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| 分子复杂度/Complexity |
363
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
UFASECSYKSMYET-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H15N3O2S/c20-16(18-8-4-7-15-17-9-10-22-15)13-11-14(21-19-13)12-5-2-1-3-6-12/h1-3,5-6,9-11H,4,7-8H2,(H,18,20)
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| 化学名 |
5-phenyl-N-(3-(thiazol-2-yl)propyl)isoxazole-3-carboxamide
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| 别名 |
PY-60; PY 60; YAP activator PY-60; PY60; SV956D8WK8; PY-60?; PY60;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~319.11 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.98 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.1911 mL | 15.9556 mL | 31.9112 mL | |
| 5 mM | 0.6382 mL | 3.1911 mL | 6.3822 mL | |
| 10 mM | 0.3191 mL | 1.5956 mL | 3.1911 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
ikB
2-PMDQ
GW590735
4-PPBP maleate
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COA
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