| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
ANXA2 (Kd = 1.4 µM)
PY-60 specifically targets membrane-associated protein annexin A2 (ANXA2) with a dissociation constant (Kd) of 1.4 μM. It binds directly to ANXA2 and antagonizes its normal cellular function of inhibiting YAP activity. By disrupting the ANXA2-YAP interaction, PY-60 activates YAP transcriptional activity. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
PY-60 通过靶向 ANXA2 激活 YAP[1]。PY-60 是一种噻唑取代的凝胶，在一定剂量下可激活 293A-TEAD-LUC 细胞的荧光素酶活性。当以高密度注射细胞时（EC50 分别为 1.5 和 1.6 μM），无需血清。此外，PY-60 处理可导致 YAP 定位到细胞核内，且随着细胞密度的增加，PY-60 还促进了细胞内 TEAD 和 YAP 蛋白的结合。PY-60 可激活动物体内的增殖性 YAP，从而调节细胞收缩程序，并可通过增殖诱导细胞凋亡[1]。PY-60 还显著提高了 293A 细胞和其他人类细胞（如 MCF10A、HEK293T、H69 和 HaCaT）中 YAP 调控的校准因子（如 ANRKD1、CYR61 和 CTGF）的水平。 PY-60 通过将 ANXA2-YAP 复合物从细胞膜上释放出来，与 ANXA2 竞争磷脂酰肌醇的结合位点 [1]。体外实验表明，PY-60 激活 YAP 转录活性的 EC50 值为 1.5 μM。它与 ANXA2 的解离常数 Kd 为 1.4 μM。该化合物促进 ANXA2 从细胞膜上释放，减弱其与 YAP 的结合限制，从而增强 YAP 的去磷酸化，并促进其转位至细胞核，在细胞核内激活 YAP 的转录共激活因子功能。
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| 体内研究 (In Vivo) |
苏木精-伊红染色和抗K14组织学染色显示，在野生型C57BL/6小鼠皮肤表面局部涂抹PY-60（10 μM）10天后，导管细胞和K14前体细胞显著增多。由于PY-60的产生增加了单位长度皮肤表皮细胞的数量，尖端厚度大约增加了一倍[1]。体内实验表明，PY-60激活成年动物体内一种促增殖的、YAP依赖的转录程序，该程序能够通过增殖重塑表皮。这表明该化合物可以调节活体生物体内的YAP活性并诱导组织重塑反应。
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| 酶活实验 |
体外结合实验[1]
首先将编码C端带有六组氨酸标签的ANXA2（NM_001002858）的密码子优化gBlock（IDT）亚克隆到pET-22b表达载体中，构建重组ANXA2。转化BL21细菌后，在30℃下振荡培养24小时以表达蛋白。重组ANXA2首先按照供应商（Qiagen）的建议，采用标准的分批镍-次氮基三乙酸（Ni-NTA）纯化方法进行纯化，然后使用标准方法通过分子筛柱分离，并储存于储存缓冲液（20 mM Tris，137 mM NaCl和10%甘油，pH 8.0）中。将1 µg重组ANXA2加入100 µl 1× PBS（250 nM ANXA2）和PY-PAP中，使其最终浓度如所示，DMSO的最终浓度为1% (v/v)。将样品在PCR条带中于37 °C孵育1小时，然后使用Stratalinker UV仪器进行UV-B交联（365 nm），持续10分钟。之后，如上所述加入10 µl浓缩的含罗丹明叠氮化物的点击反应预混液，并在室温下孵育1小时。随后，使用SDS-PAGE（每孔100 ng重组蛋白，15孔凝胶，4-12% Bis-tris BOLT凝胶）分离反应产物，并使用ChemiDoc成像系统进行显影。为确认重组蛋白上样量一致，对上述反应的平行SDS-PAGE凝胶进行Pierce银染试剂盒染色。 PY-60与ANXA2的结合通常使用表面等离子共振（SPR）或等温滴定量热法（ITC）测定解离常数（Kd）进行评估。也可使用荧光标记的PY-60类似物进行荧光偏振分析来评估竞争性结合。 |
| 细胞实验 |
从出生2天的C57BL/6新生小鼠中分离出原代角质形成细胞，然后在经丝裂霉素C处理的3T3饲养层上，用FAD完全培养基进行培养。在初始接种时，向培养基中添加DMSO溶剂对照或化合物PY-60（10 µM）。对于二次传代培养实验，将原代角质形成细胞传代至新的3T3细胞饲养层上。培养9天后，用多聚甲醛固定角质形成细胞，然后用1%罗丹明B染色[1]。
PY-60的细胞活性检测需要使用报告基因细胞系，例如293A-TEAD-LUC细胞，该细胞系在YAP反应性TEAD启动子元件的控制下表达荧光素酶报告基因。用化合物处理细胞后，测量荧光素酶活性以评估YAP转录激活情况。通过蛋白质印迹法和免疫荧光法评估 YAP 磷酸化和核转位。 |
| 动物实验 |
8周龄的C57BL/6野生型小鼠连续10天，每天一次（局部涂抹于皮肤）分别接受赋形剂（丙酮）或PY-60（10 mg/ml）治疗。采用苏木精-伊红（H&E）染色评估表皮厚度。使用抗K14和抗K167免疫荧光染色评估细胞增殖。在所有模型中，局部给药前，动物均按平均体重随机分组。所有动物均纳入分析。分组和给药过程中，研究人员未采用盲法。所有动物实验均按照波士顿儿童医院机构动物护理和使用委员会批准的方案进行[1]。
PY-60的体内研究在动物模型中进行，以评估YAP依赖性组织重塑。该化合物通常通过局部涂抹或注射给药。收集组织样本进行组织学分析，并通过qRT-PCR评估YAP靶基因的表达。通过 Ki67 染色评估表皮增殖情况。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在啮齿动物给药后，评估了 PY-60 的药代动力学特性。该化合物被配制成合适的载体（例如，DMSO/PEG 基溶液）。采用液相色谱-串联质谱法 (LC-MS/MS) 测定血浆和组织浓度。鉴于 PY-60 在某些研究中采用局部给药，局部组织渗透和滞留是重要的药代动力学考量因素。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
PY-60 仅供研究用途，未获准用于临床。标准的毒理学评估包括啮齿动物的急性毒性和重复给药毒性研究。目前尚无该化合物的公开毒性数据。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
转录共激活因子Yes相关蛋白1 (YAP) 调控增殖性转录程序，该程序控制体细胞干细胞的命运和某些组织的再生反应。因此，激活YAP的药物可能具有治疗因增殖修复不足而加剧的疾病的潜力。本文报道了一种名为PY-60的小分子化合物的发现，该化合物在体外显著激活YAP的转录活性，并在局部给药后促进小鼠表皮角质形成细胞的YAP依赖性增殖。化学蛋白质组学分析表明，PY-60的相关靶点是膜联蛋白A2 (ANXA2)，当细胞密度增加时，ANXA2直接与细胞膜上的YAP结合。PY-60处理可使ANXA2从细胞膜上释放，最终促进YAP以非磷酸化转录活性形式存在，并与磷酸酶结合。本研究揭示了ANXA2是Hippo通路中一个此前未被描述的药物靶向组分，并提出了一种促进疾病再生和修复的机制。[1] PY-60是一种用于研究YAP/TAZ信号通路及其在癌症和组织再生中作用的研究工具。YAP是Hippo通路的关键转录共激活因子，调控器官大小、组织稳态和肿瘤发生。PY-60通过靶向ANXA2，为激活YAP及其下游效应的研究提供了一种独特的机制。它是首个YAP转录活性的小分子激活剂。
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| 分子式 |
C16H15N3O2S
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|---|---|
| 分子量 |
313.37
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| 精确质量 |
313.09
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| 元素分析 |
C, 61.32; H, 4.82; N, 13.41; O, 10.21; S, 10.23
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| CAS号 |
2765218-56-0
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| PubChem CID |
155387479
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| 外观&性状 |
White to off-white solid
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| LogP |
3
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| tPSA |
96.3Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
22
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| 分子复杂度/Complexity |
363
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
UFASECSYKSMYET-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H15N3O2S/c20-16(18-8-4-7-15-17-9-10-22-15)13-11-14(21-19-13)12-5-2-1-3-6-12/h1-3,5-6,9-11H,4,7-8H2,(H,18,20)
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| 化学名 |
5-phenyl-N-(3-(thiazol-2-yl)propyl)isoxazole-3-carboxamide
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| 别名 |
PY-60; PY 60; YAP activator PY-60; PY60; SV956D8WK8; PY-60?; PY60;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~319.11 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.98 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.1911 mL | 15.9556 mL | 31.9112 mL | |
| 5 mM | 0.6382 mL | 3.1911 mL | 6.3822 mL | |
| 10 mM | 0.3191 mL | 1.5956 mL | 3.1911 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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