| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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描述：A-366 (A366) 是一种新型、高效的肽竞争性组蛋白甲基转移酶 G9a 抑制剂，具有抗癌活性。它对 G9a 的抑制 IC50 为 3 nM，对其他甲基转移酶和非表观遗传靶点的选择性超过 100 倍。A-366 已被证明能以 100 nM 的 IC50 抑制细胞中的 H3K9 甲基化，并且与以往的喹唑啉类探针相比，其细胞毒性极低。A-366 选择性地抑制 G9a 及其密切相关的 GLP (EHMT1)，但不抑制其他组蛋白甲基转移酶。尽管对 H3K9me2 甲基化的细胞活性与其他已知的 G9a/GLP 小分子抑制剂相当，但 A-366 对肿瘤细胞系生长的细胞毒性作用显著降低。
| 靶点 |
G9a (histone H3 lysine-9 methyltransferase) – potently diminishes H3K9 dimethylation
Histamine H3 receptor (H3R) – functional antagonist: KB = 15 nM [2-150 nM] at human H3R (hH3R) determined from Schild analysis; also active at rat H3R (rH3R) with EC50 = 2.3 nM [0.4-14.9 nM] for shifting histamine activation in CRE-Luc assay Spindlin1 (epigenetic reader protein) – inhibitory activity[1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
A-366（0.01-10 μM；14 天）影响 MV4;11 细胞的活力并诱导其分化 [4]。在 PC-3 前列腺癌细胞中，A-366（0.3-3 μM；72 小时）以浓度和时间依赖的方式降低 H3K9me2 的总体水平，其细胞 EC50 值约为 300 nM。A-366（0.01-10 μM；4 天；HL-60 细胞）以剂量依赖的方式降低细胞分化和增殖。经 A-366 处理的 HL-60 细胞的 DNA 含量分析显示 G1 期细胞增加，这与细胞阻滞一致 [4]。
1 μM 的 A-366 能有效置换人 H3R 上的 [3H]N-甲基组胺，其抑制作用与匹托利桑相当（根据图 1，抑制率约为 90%，具体百分比未说明）[1]。 在利用稳定表达大鼠 H3R 的 HEK-293T 细胞进行的 CRE-Luc 报告基因检测中，A-366 浓度依赖性地改变了组胺诱导的 cAMP 减少，显示出拮抗剂特性。通过 Schild 回归计算得出，A-366 对人 H3R 的亲和力 (KB) 为 15 nM [2-150 nM]（斜率为 0.79±0.45，与 1 无显著差异）。 [1] A-366抑制了G9a酶活性，AlphaLISA检测显示H3K9二甲基化水平降低（未提供确切的IC50值）。[1] A-366也显示出对Spindlin1的抑制活性（未提供确切的IC50值）。[1] 在1 μM浓度下的选择性筛选显示，A-366对放射性配体与多巴胺D1、D2、D3、D5受体和组胺H4受体的结合抑制作用显著低于其对H3R的抑制作用（P<0.02），表明其具有亚型选择性。在 H3R、H4R、D1R 和 D2R 位点，A-366 和 UNC-0642 之间的差异不显著 (P>0.22)，但 UNC-0642 在 D2R 和 D3R 位点对 [3H]螺哌隆的置换作用高于 A-366 (P<0.01)。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
当用 A-366（30 mg/kg；渗透泵；每日一次，持续 14 天）治疗 MV4;11 异种移植瘤时，可观察到生长抑制 [4]。
在 MV4;11 AML 侧腹异种移植瘤模型中，通过渗透泵以 30 mg/kg/天的剂量连续 14 天给予 A-366，可观察到轻微的肿瘤生长抑制（45% TGI）[4]。 |
| 酶活实验 |
采用基于 AlphaLISA 的方法检测 G9a 抑制作用。将化合物与 5 mM G9a 酶、100 mM 组蛋白 H3 (1-21) 片段和 15 μM S-腺苷甲硫氨酸 (SAM) 在 384 孔白色微孔板中于检测缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 9.0、50 mM NaCl、1 mM 二硫苏糖醇、0.01% Tween-20）中孵育 30 分钟。加入抗 H3K9me2 受体磁珠终止反应。孵育 60 分钟后，加入链霉亲和素包被的供体磁珠，继续孵育 30 分钟。使用积分时间为 1000 ms 的 AlphaLISA 发光滤光片测量发光值。[1]
Spindlin1 抑制作用采用荧光偏振位移法测定。对十二个浓度进行三次重复测定以获得IC50值（未提供A-366的确切值）。[1] GPCR的放射性配体置换试验：将表达人H3R的转染HEK-293T细胞的膜制备物与A-366（滴定范围0.003-1000 nM，重复两次）和2 nM [3H]N-甲基组胺孵育90分钟。使用10 μM匹托利桑测定非特异性结合。为了筛选脱靶选择性，将1 μM A-366与相应的受体在表2所述的条件下孵育（D1/D5使用[3H]SCH23390，D2/D3使用[3H]螺哌隆，H4R使用[3H]组胺）。孵育结束后，将样品过滤到预先用0.3%聚乙烯亚胺浸泡过的GF/B滤膜上，用4℃水洗涤三次，干燥后进行闪烁计数。[1] |
| 细胞实验 |
细胞活力检测 [4]
细胞类型： MV4；11 个细胞 测试浓度： 0.01-10 μM 孵育时间： 14 天 实验结果： 导致细胞增殖抑制和活力降低，与 CD11b 染色观察到的剂量反应相符。 在稳定转染大鼠 H3R cDNA 和含有 cAMP 反应元件的荧光素酶载体的 HEK-293T 细胞中进行 CRE-Luc 报告基因检测。将细胞以每孔 2×10⁵ 个细胞/200 μL 的密度接种于聚乙烯亚胺包被的 96 孔板中，培养基为不含酚红的 DMEM，含 1% FBS，并使其贴壁 24-48 小时。然后，使用液体处理机器人，在有或无A-366（10至100,000 nM）的情况下，加入福斯克林（终浓度3 μM）和系列稀释的Nα-甲基组胺（10,000至0.01 mM）。将混合物在培养条件下（37.0°C，5.0% CO₂，95%湿度）孵育5小时。移除培养基后，用80 μL裂解缓冲液（25 μM三羟甲基氨基甲烷、10%甘油、2 μM乙二醇单乙二胺四乙酸、1% Triton X-100、5 μM MgSO₄·7H₂O、1 μM二硫苏糖醇）在300 rpm下振荡30分钟裂解细胞。将裂解液转移至白色微孔板中，注入40 μL检测缓冲液（25 mM甘氨酰甘氨酸、15 mM MgSO₄·7H₂O、15 mM KH₂PO₄、4 mM EGTA酸、2 mM二硫苏糖醇、1 mM ATP、50 μM辅酶A、0.02 mg/mL D-荧光素钾盐）后立即记录发光值，使用进样模块，积分时间为3000 ms。数据以仅含福斯克林的对照组（100%）和福斯克林加10 μM Nα-甲基组胺组（0%）进行标准化。[1] |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 6-8周龄SCID米色雌性小鼠（MV4;11异种移植瘤）[4]
剂量： 30 mg/kg 给药途径： 通过微型渗透泵；每日一次，持续14天 实验结果： 在该模型中，A-366治疗产生了45%的肿瘤生长抑制率。 MV4;11侧腹异种移植瘤疗效研究：将MV4;11细胞（5×10^6）与Matrigel混合，皮下注射到雌性SCID米色小鼠的侧腹。当肿瘤体积达到约200 mm³时，将小鼠分组（每组n=10）。 A-366 由 98% 的 PEG-400 和 2% 的 Tween-80 配制而成，并通过渗透泵以 30 mg/kg/天的剂量给药，持续 14 天。每周使用数字游标卡尺测量两次肿瘤体积。计算肿瘤生长抑制率 (TGI) [4]。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在荷瘤小鼠中，通过渗透泵给药后，A-366 在肿瘤组织和其他组织中均显示出显著的积累[4]。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
初步的最大耐受剂量 (MTD) 研究显示，腹腔注射 A-366 后，动物在 10 mg/kg 剂量下出现毒性 [4]。
- 在人外周血单核细胞 (PBMC，非转化细胞) 中，A-366 在浓度高达 10 μM 时对细胞活力没有影响 [4]。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
A-366 是一种基于螺环 2-氨基-3H-吲哚的 G9a 抑制剂，由于其固有的脒基或芳香胍基官能团，在生理 pH 值下可能被质子化。它含有一个 3-吡咯烷基丙氧基部分，该部分模拟组蛋白 H3K9 的赖氨酸残基，并阻断 G9a 活性位点中的赖氨酸结合通道。A-366 被鉴定为一种强效的 H3R 拮抗剂，具有高亲和力（对人 H3R 的 KB = 15 nM）以及对多巴胺 D1、D2、D3、D5 受体和组胺 H4 受体的选择性。该化合物对 G9a 和 Spindlin1 均有抑制作用，使其成为一种多靶点配体。该研究提出，A-366 可能通过拮抗 H3R 受体，为普拉德-威利综合征 (PWS) 提供症状缓解，并通过 G9a 介导的印记基因恢复，实现病因干预。作者指出，A-366 已进入临床前开发后期阶段，并且在小鼠或大鼠模型中具有良好的耐受性，表明其适合未来在 PWS 中进行体内研究。[1]
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| 分子式 |
C19H27N3O2
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|---|---|
| 分子量 |
329.4366
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| 精确质量 |
329.21
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| CAS号 |
1527503-11-2
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| PubChem CID |
76285486
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| LogP |
3.057
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| tPSA |
60.08
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
24
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| 分子复杂度/Complexity |
471
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
BKCDJTRMYWSXMC-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C19H27N3O2/c1-23-16-12-14-15(21-18(20)19(14)6-4-7-19)13-17(16)24-11-5-10-22-8-2-3-9-22/h12-13H,2-11H2,1H3,(H2,20,21)
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| 化学名 |
5'-methoxy-6'-(3-(pyrrolidin-1-yl)propoxy)spiro[cyclobutane-1,3'-indol]-2'-amine
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| 别名 |
A 366A-366 A366
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~151.77 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.0355 mL | 15.1773 mL | 30.3545 mL | |
| 5 mM | 0.6071 mL | 3.0355 mL | 6.0709 mL | |
| 10 mM | 0.3035 mL | 1.5177 mL | 3.0355 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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BI-9466
MRK-740-NC
SKLB-03220
(Rac)-NSD2-PWWP1-IN-4
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COA
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