| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Nav1.8 sodium channel (IC50 = 8 nM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
A-803467 以选择性且显着的方式逆转 ABCG2 介导的多药耐药性。在用 ABCG2 转染的细胞系中，A-803467 (7.5 μM) 显着增强了米托蒽醌和拓扑替康的细胞毒性。 ABCG2 转染细胞中 MX 的积累。在不同的时间间隔，A-803467（7.5 μM；0~120 分钟）显着抑制 ABCG2 转染细胞的细胞内 [3H]-MX 流出。 A-803467 增加 ABCG2 的 ATP 酶活性[1]。
在这项研究中，研究人员研究了河豚毒素抗性钠通道阻断剂A-803467对ABCG2过表达药物选择和转染细胞系的影响。我们发现，在无毒浓度下，A-803467可以显著增加过表达野生型或突变型ABCG2的耐药细胞对ABCG2底物的细胞敏感性。机制研究表明，A-803467（7.5μM）通过抑制ABCG2的转运活性显著增加了[（3）H]-米托蒽醌的细胞内积累，而不改变其表达水平。此外，A-803467刺激了ABCG2过表达的膜中的ATP酶活性。[1] 在这项研究中，研究人员在这里报告了A-803467的发现，这是一种钠通道阻滞剂，可以有效地阻断河豚毒素抗性电流（IC（50）=140 nM），并在体外阻断大鼠背根神经节神经元自发和电诱发动作电位的产生。在重组细胞系中，A-803467有效地阻断了人Na（v）1.8（IC（50）=8 nM），并且与人Na（v）1.2、Na（v”1.3、Na（W）1.5和Na（v“1.7相比具有>100倍的选择性（IC（50中）值>或=1微M）。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在雄性 NCR 裸鼠中，A-803467（35 mg/kg；口服）没有表现出明显的毒性[1]。当 A-803467 和拓扑替康联合使用时，植入过表达 ABCG2 的 H460/MX20 细胞的小鼠体内肿瘤的生长大大减少。 -803467 可以恢复过度表达 ABCG2 转运蛋白的癌症对托泊替康的敏感性，但缺乏 ABCG2 表达的肿瘤不会受到显着影响[1]。
在小鼠模型系统中，a-803467（35mg/kg）和拓扑替康（3mg/kg）的联合治疗显著抑制了移植有过表达ABCG2-的癌症细胞的小鼠的肿瘤生长。我们的研究结果表明，a-803467和ABCG2底物的组合可能是ABCG2阳性耐药性癌症的一种新的治疗方法。[1] A-803467（20mg/kg，静脉注射）阻断了大鼠脊髓背角中宽动态范围神经元的机械诱发放电。A-803467在多种大鼠疼痛模型中也剂量依赖性地减少了机械性异常性疼痛，包括：脊髓神经结扎（ED（50）=47mg/kg，i.p.）、坐骨神经损伤（ED（50中）=85mg/kg，i.p.，辣椒素诱导的继发性机械性异常疼痛（ED（50%）约为100mg/kg，i.p。A-803467对福尔马林诱导的伤害性疼痛和急性热痛和术后疼痛无效。这些数据表明，在神经性和炎性疼痛的动物模型中，体内对Na（v）1.8钠通道的急性和选择性药理学阻断会产生显著的镇痛作用[2]。 |
| 酶活实验 |
BCG2 ATP酶测定[1]
如前所述，测量了High Five昆虫细胞膜囊泡中ABCG2的Vi敏感性ATP酶活性。将膜囊泡（100μg蛋白质/ml）在37°C下在含或不含0.3 mM钒酸盐的ATP酶测定缓冲液中孵育5分钟，然后在37°℃下与不同浓度的0至80μM的A-803467、拓扑替康和MX（0-30μM）孵育3分钟。通过添加5 mM Mg ATP诱导ATP酶反应，总体积为0.1 ml。在37°C下孵育20分钟后，通过装载0.1 ml 5%SDS溶液停止反应。如前所述测量释放的无机磷酸盐（Pi）。 药物选择性测定。[2] 在测定中评估了A-803467（10μM）的活性，以评估其相对于其他细胞表面受体、离子通道、转运位点和酶（包括阿片受体和环氧化酶1和2）的药理学选择性，使用所述的标准化测定方案（CEREP和内部测定）。 |
| 细胞实验 |
细胞活力测定[1]
如前所述，使用MTT比色法进行细胞毒性试验和逆转实验。对于HEK293/pcDNA3.1、HEK/ABCB1、HEK/AABCC10、HEK293/R482、HEK293/L482G和HEK293/R482T细胞，收获细胞并以6×103个细胞/孔的终浓度重新悬浮，对于H460和H460/MX20细胞，以4×103个电池/孔的最终浓度重新悬浮。将细胞均匀接种到96孔板中。为了测定A-803467的细胞毒性，在孵育24小时后，将不同浓度的药物加入每个孔中。为了确定A-803467的逆转能力，在与A-803467、FTC、维拉帕米或头孢菌素预孵育2小时后，将不同浓度的化疗药物加入指定孔中。药物孵育68小时后，加入MTT试剂（4mg/mL）。将平板再孵育4小时，丢弃上清液，加入100μl DMSO以溶解甲氮晶体。在570nm波长下测量细胞活力。所有实验重复至少3次，并计算平均值和标准偏差（SD）值。 [3H]-MX积聚和流出试验[1] 如前所述，研究人员研究了A-803467对ABCG2过表达细胞中[3H]-MX的细胞内积累和外排的影响。简而言之，在37°C下，在有或没有A-803467（7.5μM）或FTC（5μM）的情况下，将细胞（5×106/细胞）重新悬浮并在RPMI 1640培养基中孵育2小时。然后将细胞与含有0.01μM[3H]-MX的培养基在37°℃下再孵育2个小时，有或没有A-503467（7.5µM）或FCC（5μM），随后用冰冷的PBS洗涤两次。对于累积试验，用10 mM裂解缓冲液（pH 7.4，含有1%Triton X-100和0.2%SDS）裂解细胞。然后放入闪烁液中。对于外排试验，然后将悬浮细胞在37°C的无[3H]-MX培养基中培养，培养基中有或没有A-803467（7.5μM）或FTC（5.0μM）。在指定时间（0、30、60和120分钟）收获细胞的等分试样，然后用冰冷的PBS洗涤并转移到相应的闪烁瓶中。使用Packard TRI-CARB1 190`A液体闪烁分析仪测量放射性。 蛋白质印迹分析[1] 细胞裂解物如前所述制备。通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离等量的总细胞裂解物（30μg蛋白质），并将其电泳转移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上。在室温下在封闭溶液（5%牛奶）中孵育1小时后，用1:1000稀释的抗肌动蛋白一级单克隆抗体或1:500稀释的ABCG2在4°C下对膜进行免疫印迹过夜，然后在室温下用辣根过氧化物酶（HRP）偶联的二级抗体（1:1000稀释）进一步孵育2小时。通过增强化学发光检测系统检测蛋白质-抗体复合物。 免疫荧光分析[1] 为了进行免疫荧光分析，将H460和H460/MX20细胞接种在24孔板中。细胞与或不与A-803467（7.5μM）一起孵育72小时。此后，用PBS洗涤细胞，在室温下用4%多聚甲醛固定15分钟，然后用PBS冲洗三次，然后在4°C下用1%曲拉通X-100渗透10分钟。再次用PBS洗涤细胞三次，然后在37°C下用2mg/ml BSA封闭1小时。将固定细胞与抗ABCG2单克隆抗体（BXP 21）（1:50）在4°C下孵育16小时，然后用PBS洗涤三次。然后将细胞与Alexa面粉488山羊抗小鼠IgG（1:60）在37°C下进一步孵育1小时。DAPI用于核复染。免疫荧光图像用尼康荧光显微镜拍摄。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：裸鼠[1]
剂量：35 mg/kg 给药途径：口服 实验结果：在雄性NCR裸鼠中未观察到明显的毒性。\n \n\n裸鼠MDR异种移植模型[1] \n如前所述[41]，建立了ABCG2过表达的非小细胞肺癌细胞H460/MX20异种移植小鼠模型。将H460/MX20细胞（6 × 10⁶）和H460细胞（4 × 10⁶）分别皮下注射到裸鼠左右腋窝。我们进行了一项试点研究，使用了三种不同剂量的A-803467（17.5、35 和 70 mg/kg），我们发现 35 mg/kg 剂量可以有效提高肿瘤对拓扑替康的敏感性，而不会显著增加毒性，因此在接下来的研究中一直使用 35 mg/kg 剂量。 [1] \n\n当肿瘤平均直径达到0.5 cm（第0天）时，将小鼠随机分为4组（n = 6），然后分别接受以下治疗：（a）载体（10% N-甲基吡咯烷酮 (NMP) 的 PEG-300 溶液，口服，每2、3天一次；共12次），（b）A-803467（溶于10% NMP 的 PEG-300 溶液中，35 mg/kg，口服，每2、3天一次；共12次），（c）拓扑替康（3.0 mg/kg，腹腔注射，每3天一次；共6次），以及（d）A-803467（35 mg/kg，每2、3天一次；共12次，在拓扑替康给药前1小时给药）+拓扑替康（3.0 mg/kg，腹腔注射，每3天一次；共6次）。每隔3天腹腔注射一次（共6次）。监测小鼠体重，每隔4天记录肿瘤的两个垂直直径（A和B），并根据先前描述的以下公式计算肿瘤体积（V）。\n \n\nA-803467溶解于5% DMSO/95%聚乙二醇（PEG 400）溶液中，以2 ml/kg的注射体积进行腹腔注射。在行为学测试前30分钟注射该化合物。\n \n脊髓背角神经元电生理学。[2] \n脊髓背角神经元的电生理记录按所述方法进行。简而言之，用戊巴比妥钠（50 mg/kg，腹腔注射）麻醉神经病理性疼痛大鼠（L5-L6脊神经结扎），并在左右颈外静脉置入导管。进行椎板切除术以切除T12-L3椎体节段。随后将动物固定于立体定位仪上。实验期间，通过持续静脉输注丙泊酚（8-12 mg/kg/hr）维持麻醉。将动物置于循环水毯上，以维持体温在37°C。使用镀铂不锈钢微电极记录脊髓宽动态范围（WDR）神经元的活动。监测并数字化（32个点）神经元的尖峰波形，并存储以供离线分析。刺激前记录5分钟的基线自发活动。给药前，用von Frey毛发（10 g）刺激大鼠同侧后爪的神经元感受野15秒，共刺激三次（每次间隔5分钟）。三次刺激的平均值代表基线诱发活动。将 A-803467（20 mg/kg，静脉注射）或载体在 5 至 7 分钟内输注完毕，并在输注后 35 分钟重新贴上 von Frey 毛发。为了与基线放电水平进行比较，采用 Wilcoxon 配对检验确定统计学显著性。\n[2] \n药理选择性测定。[2] \n使用标准化的测定方案（CEREP 和内部测定），评估了 A-803467（10 μM）相对于其他细胞表面受体、离子通道、转运位点和酶（包括阿片受体和环氧合酶 1 和 2）的药理选择性。如前所述。 \n\n\n镇痛和副作用测定。 [2] 在特征明确的体内模型中对 A-803467 进行了评估，以评价其对急性疼痛、炎症性疼痛和神经性疼痛的疗效。这些伤害性感受测定、术后疼痛和内脏疼痛模型以及运动功能模型的具体方法详见补充信息 (SI)。除非另有说明，所有实验组和对照组每组至少包含六只动物，数据以平均值 ± 标准误 (SEM) 表示。数据分析采用方差分析和适当的事后比较 (P < 0.05)。ED50 值采用最小二乘线性回归法估算。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
为了进一步了解A-803467与ABCG2的相互作用，我们使用ABCG2过表达的膜进行了ATPase活性测定。大多数与ABC药物转运蛋白相互作用的酪氨酸激酶抑制剂（TKI）都能刺激ATP水解，而A-803467以浓度依赖的方式刺激ABCG2的ATP水解（图3A），表明其行为与其他已知的ABCG2转运蛋白底物（图3B和3C）相似，例如MX和拓扑替康。这些结果进一步证明A-803467不仅与ABCG2转运蛋白直接相互作用，而且可能还是该转运蛋白的竞争性抑制剂。
为了确定A-803467与ABCG2转运蛋白的分子相互作用，我们对人ABCG2同源模型的不同位点进行了分子对接模拟。人ABCG2转运蛋白的晶体结构尚未完全解析。比较表4所示的对接评分，确定最佳结合位点为位点1。对拓扑替康（一种已知的ABCG2底物）在ABCG2的同一位点进行了分子对接。拓扑替康的对接评分（-5.57 kcal/mol）远高于A-803467（-8.07 kcal/mol）。较低的对接评分表明A-803467与ABCG2之间的相互作用更强（图4）。此外，A-803467的分子结构也展现出一些药效团特征，例如疏水基团、芳香环中心（苯环和呋喃环）以及氢键受体，这些特征已被报道为ABCG2抑制所必需的。总而言之，该分子模拟将为进一步优化ABCG2抑制剂衍生物提供线索。 [1] 尽管A-803467对正常大鼠的急性热痛没有镇痛作用，但它能显著降低急性机械性伤害感受。这一结果与之前的基因敲除和反义数据一致，这些数据表明Nav1.8的敲低与急性机械性伤害感受的降低相关。超过50%的C纤维和10%的A纤维表达Nav1.8通道。Nav1.8阳性的C纤维对NGF或GDNF有反应，并且其中许多纤维也表达TRPV1，这支持了Nav1.8在急性热痛觉中的作用。然而，A纤维上Nav1.8通道的表达以及Nav1.8功能破坏可降低急性机械性伤害感受的数据表明，Nav1.8通道的激活有助于维持对有害机械刺激的正常敏感性。 总之，目前的数据表明，A-803467是一种强效且高选择性的Nav1.8通道阻滞剂，并且该化合物在体外和体内均能有效阻断感觉神经元的兴奋性。在多种动物疼痛模型中对A-803467的评估表明，体内选择性阻断Nav1.8通道可显著降低神经损伤和炎症后的伤害感受敏感性。[2] |
| 分子式 |
C19H16CLNO4
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|---|---|---|
| 分子量 |
357.79
|
|
| 精确质量 |
357.076
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| 元素分析 |
C, 63.78; H, 4.51; Cl, 9.91; N, 3.91; O, 17.89
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| CAS号 |
944261-79-4
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
16038374
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
450.6±45.0 °C at 760 mmHg
|
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| 熔点 |
128-130?C
|
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| 闪点 |
226.3±28.7 °C
|
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.1 mmHg at 25°C
|
|
| 折射率 |
1.611
|
|
| LogP |
4.93
|
|
| tPSA |
60.7
|
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
25
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| 分子复杂度/Complexity |
429
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C(C1=CC=C(C2=CC=C(Cl)C=C2)O1)NC3=CC(OC)=CC(OC)=C3
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| InChi Key |
VHKBTPQDHDSBSP-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C19H16ClNO4/c1-23-15-9-14(10-16(11-15)24-2)21-19(22)18-8-7-17(25-18)12-3-5-13(20)6-4-12/h3-11H,1-2H3,(H,21,22)
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| 化学名 |
5-(4-chlorophenyl)-N-(3,5-dimethoxyphenyl)furan-2-carboxamide
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.99 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.99 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 View More
配方 3 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% Propylene glycol : 30 mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7949 mL | 13.9747 mL | 27.9494 mL | |
| 5 mM | 0.5590 mL | 2.7949 mL | 5.5899 mL | |
| 10 mM | 0.2795 mL | 1.3975 mL | 2.7949 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
JNJ63955918
Zocainone
NVP-QBE170
B-GYKI-38233 hydrochloride
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