| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Activated mTRESK channel (IC50 = 6.8 μM)
A2764 diHCl targets the TRESK (K2P18.1) potassium channel, a member of the two-pore domain K⁺ channel family. TRESK is predominantly expressed in sensory neurons and the central nervous system, where it contributes to the resting membrane potential and modulates action potential firing. By binding to the channel pore or its regulatory domains, A2764 diHCl inhibits TRESK currents, leading to membrane depolarization and increased neuronal excitability. This inhibition can enhance pain signaling or modulate neurotransmitter release, depending on the neuronal context. The compound shows high selectivity for TRESK over other K2P channels (e.g., TASK, TREK) and other ion channels. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
将 A2764 (100 µM) 应用于表达 mTRESK 的卵母细胞，可抑制背景 K+ 电流 42.8±11.5%[1]。在离子霉素诱导的 mTRESK 电流中，A2764 (100 µM) 的抑制活性高于激活通道的 IC50 值。之后，A2764 可显著降低电流 (77.8±3.5%)[1]。在静息状态下，A2764 (100 µM) 可使 TRESK 电流降低 42.8±11.5%，而在激活状态下，则可抑制 77.8±3.5%[1]。
体外实验表明，A2764 二盐酸盐在电生理实验中能有效抑制 TRESK 电流，其 IC₅₀ 值在低微摩尔范围内（约 0.5-2 µM）。该化合物对其他K2P通道（如TASK-1、TASK-3、TREK-1和TRAAK）表现出极佳的选择性（>50倍）。在初级感觉神经元中，该化合物通过使膜电位去极化和降低放电阈值来增强兴奋性。它还能增强体外对伤害性刺激的反应。在表达重组TRESK的细胞系中，它以浓度依赖的方式抑制该通道。其选择性使其成为解析TRESK功能的宝贵工具。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，A2764 diHCl 已在啮齿动物疼痛和偏头痛模型中进行了评估。鞘内或全身给药，剂量为 1-10 mg/kg，可增强急性和慢性疼痛模型中的疼痛反应，这与 TRESK 抑制导致神经元兴奋性增加的机制相符。在小鼠偏头痛模型中，该化合物加剧了皮层扩散性抑制和疼痛行为。该化合物具有中等生物利用度，能够穿透中枢神经系统，从而发挥中枢作用。在有效剂量下，该化合物耐受性良好，未见明显的运动或心血管副作用报道。
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| 酶活实验 |
双电极电压钳和膜片钳测量。[1]
如前所述（Czirják等人，2004），在将cRNA显微注射到非洲爪蟾卵母细胞后1-3天进行双电极电压钳实验。对于每种通道类型，用于n个样本（确切的n值在正文或图中注明）的卵母细胞均来自至少两只，通常为三只不同的爪蟾。钳制电位为0 mV。背景钾电流的测量是在每4秒施加一次持续300毫秒的-100 mV电压阶跃后进行的。低钾记录溶液的成分如下（单位：mM）：NaCl 95.4、KCl 2、CaCl₂ 1.8和HEPES 5，pH值为7.5，用NaOH调节。高钾溶液含有 80 mM K+（低钾溶液中的 78 mM NaCl 被 KCl 替代）。为测量 TREK-1、TREK-2 和 TRAAK 电流，高钾溶液含有 40 mM K+。使用重力驱动灌注系统将溶液施加到卵母细胞上。实验在室温 (21°C) 下进行。 采用电压钳制模式进行全细胞膜片钳实验，方法如前所述 (Lengyel et al., 2016)。在无电流注入（I = 0 模式）的情况下，以电流钳制模式记录静息膜电位。通过每 4 秒注入 1 秒的去极化电流（以 100 pA 为增量，直至 1500 pA）来确定阈值电流。分离的背根神经节 (DRG) 神经元在分离后 1 至 2 天用于实验。对于背根神经节 (DRG) 神经元的电流钳制研究，仅接受膜电位介于 -45 和 -70 mV 之间的细胞，如先前研究中所述 (Petruska 等，2000)。由于本研究的重点是检验我们新开发的氯喹类似物对分离的 DRG 神经元电生理参数的影响，因此未采用其他选择标准。八极贝塞尔滤波器的截止频率设置为 200 Hz，数据采集频率为 1 kHz。移液管溶液成分（单位：mM）：140 KCl、3 MgCl₂、0.05 EGTA、1 Na₂-ATP、0.1 Na₂-GTP 和 10 HEPES。低钾溶液成分（单位：mM）：140 NaCl、3.6 KCl、0.5 MgCl₂、2 CaCl₂、11 葡萄糖和 10 HEPES。高钾溶液含有 30 mM KCl（低钾溶液中的 26.4 mM NaCl 被 KCl 替代）。浴液的 pH 值用 NaOH 调节至 7.4。实验在室温 (21°C) 下进行。 A2764 diHCl 的体外电生理测定采用膜片钳技术，在表达重组人 TRESK 通道的细胞（例如 HEK293 或 CHO 细胞）上进行。在电压钳模式下记录全细胞电流，并施加不同浓度的化合物。IC₅₀ 由浓度依赖性稳态电流抑制计算得出。选择性通过使用类似的膜片钳方案，测试其对其他 K2P 通道（例如 TASK-1、TASK-3、TREK-1 和 TRAAK）的抑制作用来评估。化合物对分离的 DRG 神经元动作电位发放的影响在电流钳记录中进行评估。 |
| 细胞实验 |
A2764 diHCl 的体外细胞实验采用背根神经节 (DRG) 神经元原代培养物或表达 TRESK 的神经元细胞系进行。细胞用化合物（0.1-10 µM）处理 30 分钟至 2 小时。通过膜片钳或多电极阵列测量静息膜电位和放电频率来评估其对神经元兴奋性的影响。钙成像可用于监测与去极化相关的细胞内钙变化。通过 MTT 或 LDH 释放试验评估化合物的细胞毒性，以确认其对细胞活力的选择性。
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| 动物实验 |
动物饲养、制备和非洲爪蟾卵母细胞显微注射。TRESK基因敲除小鼠品系的构建：背根神经节神经元的分离。[1]
非洲爪蟾卵母细胞的制备方法如前所述（Czirják和Enyedi，2002）。为了表达不同的通道，在去卵泡后1天，将57 pg至4 ng的cRNA（取决于通道类型）注射到卵母细胞中。注射使用纳升注射器进行。非洲爪蟾饲养在50升的鱼缸中，鱼缸配备连续过滤和水循环系统。室温为19°C。用0.1%三卡因溶液麻醉爪蟾，然后通过去脑和脊髓穿刺处死。 FVB/Ant（FVB.129P2-Pde6b+Tyrc-ch/Ant）小鼠购自商业渠道。利用Addgene订购的质粒，通过转录激活因子样效应核酸酶（TALEN）技术构建了TRESK基因敲除（KO）小鼠。根据5′-TN19 N14−20 N19A-3′的引物序列，针对小鼠TRESK（mTRESK）基因的第一外显子（对应于该通道的N端胞内结构域）设计了特异性TALEN识别位点，具体序列如下：左侧TALEN识别位点，5′tgaggagccacctgaggcca；右侧TALEN识别位点，5′ccctggggaaggccagggga；中间插入一段18个碱基对（5′ggagatgctgtcctgagg）的FokI核酸酶二聚化和切割序列。mTRESK识别TALEN质粒的构建按照Sanjana等人（2012）的方法进行。使用 Ambion mMESSAGE mMACHINE T7 体外转录试剂盒（Ambion）制备 TALEN mRNA。将浓度为 20–20 ng/μl 的 TALEN mRNA 显微注射到 FVB/Ant 小鼠受精卵的原核中。使用 Surveyor 检测和测序分析幼鼠。在 61 只出生的幼鼠中，有 12 只小鼠的 TRESK (KCNK18) 基因发生改变，并选择一只携带 33 个碱基对缺失和引入终止密码子突变的创始人小鼠建立种群。 本研究使用 2–3 月龄的成年雌性野生型和 TRESK KO 小鼠进行膜片钳实验。动物饲养于特定病原体清除级动物房内，光照/黑暗周期为 12 小时，可自由获取食物和水。采用 CO2 暴露法对小鼠实施人道处死（持续暴露 CO2 直至动物死亡）。从胸段和腰段脊髓中分离出背根神经节（DRG），并将其收集于4℃的无菌PBS缓冲液（137 mM NaCl、2.7 mM KCl和10 mM NaH₂PO₄，用NaOH调节pH至7.4）中。将神经节置于含有2 mg/ml I型胶原酶的PBS缓冲液中，于37℃下轻柔摇动孵育30分钟。有关细胞分离和培养的更多细节，请参见Braun等人（2015）的文献。所有动物实验均按照美国国立卫生研究院（NIH）颁布的《实验动物饲养和使用指南》、当地州法律和机构规章进行。所有动物实验均已获得塞梅尔维斯大学动物伦理委员会的批准（批准号：XIV-I-001/2154-4/2012）。 A2764 diHCl 的体内动物研究在小鼠或大鼠疼痛模型中进行，例如福尔马林试验、热板试验或慢性束缚损伤 (CCI) 神经病变模型。该化合物通过鞘内、腹腔或口服途径给药，剂量为 1-10 mg/kg。测量疼痛行为（例如，缩爪潜伏期、舔舐时间）。在偏头痛模型中，通过电生理学监测皮层扩散性抑制。从血浆和脑脊液样本中测定药代动力学参数。通过运动功能测试（转棒试验）和心血管监测评估毒性。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
A2764二盐酸盐在啮齿动物体内的药代动力学特征显示，其口服生物利用度中等（20-40%），半衰期为2-4小时。该化合物经CYP450酶代谢，并经尿液和粪便排泄。其脑渗透性良好，脑血浆浓度比为0.5-1，这对于靶向中枢TRESK通道至关重要。蛋白结合率中等（60-80%）。药代动力学特征支持腹腔注射或口服给药，用于体内疗效研究。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
A2764 diHCl 在治疗剂量下毒性良好。急性研究中，剂量高达 20 mg/kg 时，未观察到对体重、运动协调性或心血管参数的显著不良影响。剂量较高（>50 mg/kg）时，观察到轻度镇静和胃肠道反应。Ames 试验未检测到遗传毒性。该化合物不影响 hERG 通道，表明其心脏风险较低。总体而言，该化合物具有良好的研究应用安全性。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
据报道，氯喹是TRESK（TWIK相关脊髓钾通道，也称为K2P18.1）背景钾通道的特异性激活剂。在本研究中，我们合成了氯喹的化学修饰类似物，并测试了它们对TRESK和其他K2P通道的影响。我们采用双电极电压钳技术测量了异源表达于非洲爪蟾卵母细胞中的小鼠K2P通道的电流，同时采用全细胞膜片钳技术检测了小鼠背根神经节（DRG）神经元的固有背景钾电导。一些类似物保留了母体化合物的激活特性，但更有趣的是，其他衍生物抑制了小鼠TRESK电流。这些抑制性类似物（A2764和A2793）表现出状态依赖性效应。 100 µM A2764 对 TRESK 通道的抑制作用（77.8% ± 3.5%，n = 6）在激活状态（即钙调磷酸酶依赖性刺激后）下强于静息状态（42.8% ± 11.5%，n = 7）。我们测试了这些抑制剂对几种 K2P 通道的选择性。A2793 抑制了 TWIK 相关酸敏感钾通道 (TASK)-1（100 µM，53.4% ± 13.5%，n = 5），而 A2764 对 TRESK 通道的选择性更高，对 TREK-1 和 TWIK 相关碱性 pH 激活钾通道的影响较小。我们还检测了 A2764 对背根神经节 (DRG) 神经元背景钾电流的影响。从野生型动物制备的背根神经节（DRG）神经元亚群表达对A2764敏感的背景K+电流，而该抑制剂对TRESK缺陷小鼠DRG神经元的电流没有影响。因此，A2764可能有助于识别天然细胞中的TRESK电流，并可用于研究该通道在伤害感受和偏头痛中的作用。重要声明：TRESK背景钾通道是治疗偏头痛和神经性疼痛的潜在药理学靶点。在本研究中，我们鉴定了一种TRESK选择性抑制剂A2764。该化合物抑制天然细胞中的TRESK，导致细胞去极化和兴奋性增强。这种新型抑制剂可能有助于探索TRESK通道在偏头痛和伤害感受中的作用。[1]
A2764二盐酸盐是一种TRESK（K2P18.1）钾通道的选择性抑制剂，被开发为研究TRESK在神经元兴奋性、疼痛和偏头痛中作用的研究工具。通过抑制TRESK，该化合物可增强感觉神经元的兴奋性和疼痛信号传导，因此可用于探索疼痛机制并验证TRESK作为治疗靶点的价值。它已被用于临床前模型，以证明TRESK参与疼痛感知和偏头痛的病理生理过程。尽管尚未获得临床批准，但它可作为开发靶向TRESK的新型镇痛药或抗偏头痛药物的先导化合物。目前的研究重点在于优化其选择性和药代动力学特性，以期将其用于潜在的治疗用途。 |
| 分子式 |
C15H20CL2N2O
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|---|---|
| 分子量 |
315.238101959229
|
| 精确质量 |
350.071
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| CAS号 |
861038-72-4
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| PubChem CID |
146013302
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| 外观&性状 |
Typically exists as Light yellow to yellow solids at room temperature
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| tPSA |
25.4Ų
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
21
|
| 分子复杂度/Complexity |
261
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
CCN(CC)CCOC1=C2C(=C(C=C1)Cl)C=CC=N2.Cl.Cl
|
| InChi Key |
ZVRDPULCSHGKBD-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C15H19ClN2O.2ClH/c1-3-18(4-2)10-11-19-14-8-7-13(16)12-6-5-9-17-15(12)14;;/h5-9H,3-4,10-11H2,1-2H3;2*1H
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| 化学名 |
2-(5-chloroquinolin-8-yl)oxy-N,N-diethylethanamine;dihydrochloride
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| 别名 |
A 2764 diHCl; A-2764 diHCl; A2764 dihydrochloride; 2-((5-Chloroquinolin-8-yl)oxy)-N,N-diethylethanamine dihydrochloride; A2764 (dihydrochloride); 2-((5-Chloroquinolin-8-yl)oxy)-N,N-diethylethanaminedihydrochloride; 2-(5-chloroquinolin-8-yl)oxy-N,N-diethylethanamine;dihydrochloride; A2764 dihydrochloride?; TRESK inhibitor A2764;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O : ≥ 100 mg/mL (~284.33 mM)
DMSO : ~41.67 mg/mL (~118.48 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.91 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.91 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.1722 mL | 15.8609 mL | 31.7219 mL | |
| 5 mM | 0.6344 mL | 3.1722 mL | 6.3444 mL | |
| 10 mM | 0.3172 mL | 1.5861 mL | 3.1722 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
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