ACA

别名: ACE; N-(p-amylcinnamoyl) Anthranilic Acid
目录号: V3849 纯度: ≥98%
ACA [也称为 N-(p-amylcinnamoyl) Anthranlilic Acid] 是一种广谱磷脂酶 A2 (PLA2) 抑制剂和 TRP 通道阻滞剂。
ACA CAS号: 110683-10-8
产品类别: Phospholipase
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
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纯度: ≥98%

产品描述
ACA [也称为 N-(p-amylcinnamoyl) Anthranlilic Acid] 是一种广谱磷脂酶 A2 (PLA2) 抑制剂和 TRP 通道阻滞剂。它在结构上与芬那酯类非甾体抗炎药 (NSAID) 相关,并且还可能调节各种离子通道。在转染人 TRPM2 的 HEK293 细胞中,ACA (20 µM) 完全阻断 H2O2 诱导的 Ca2+ 信号和 ADPR 诱导的全细胞电流,IC50 值为 1.7 µM。 ACA 对 I(Cl(Ca)) 的抑制作用与 PLA(2) 无关,并且该药物可以作为了解心脏阴离子通道的性质和功能的有用工具。
生物活性&实验参考方法
靶点
N-(p-amylcinnamoyl) Anthranlilic Acid (ACA; 20 μM) totally inhibits H2O2-induced Ca2+ signals and ADPR-induced whole-cell currents in HEK293 cells transfected with human TRPM2 (IC50=1.7 μM) [1]. Additionally, N-(p-amylcinnamoyl) Anhranilic Acid (ACA; 20 μM) burns current through human TRPM8 and TRPC6[1], which are expressed in HEK293 cells. Several TRP channels are regulated by N-(p-amylcinnamoyl) Anthranlilic Acid (ACA) separately from PLA22 inhibition [1].
体外研究 (In Vitro)
在转染人 TRPM2 的 HEK293 细胞中,N-(p-amylcinnamoyl) Anthranlilic Acid (ACA;20 μM) 完全抑制 H2O2 诱导的 Ca2+ 信号和 ADPR 诱导的全细胞电流 (IC50=1.7 μM) [1]。此外,N-(p-amylcinnamoyl) Anhranilic Acid (ACA;20 μM) 通过在 HEK293 细胞中表达的人 TRPM8 和 TRPC6[1] 燃烧电流。多个 TRP 通道受 N-(对戊基肉桂酰) 邻氨基苯甲酸 (ACA) 的调节,与 PLA22 的抑制作用不同 [1]。
胞外施用 20 µM 的 ACA 能完全阻断转染了人源 TRPM2 的 HEK293 细胞中由 ADP-核糖 (ADPR) 诱导的全细胞电流和由过氧化氢 (H2O2) 诱导的 Ca2+ 信号。该抑制作用是浓度依赖性的,对 H2O2 诱发的 Ca2+ 信号的 IC50 为 1.7 µM。该阻断作用不具有电压依赖性,在降低胞外 pH 值 (pH 6.0) 时加速,并且在胞内施用时无效。单通道记录表明,ACA 降低了 TRPM2 的开放概率,但未改变单通道电导。20 µM 的 ACA 同样完全阻断了在 HEK293 细胞中表达的人源 TRPM8 的薄荷醇激活电流以及人源 TRPC6 的 AlF4- 激活电流,IC50 值分别为 3.9 µM 和 2.3 µM。此外,20 µM 的 ACA 完全抑制了内源性表达 TRPM2 蛋白的人单核细胞系 U937 中 ADPR 诱导的电流。相比之下,另外两种磷脂酶 A2 抑制剂,花生四烯酸三氟甲基酮 (20 µM) 和对溴苯甲酰甲基溴 (100 µM),对 TRPM2、TRPM8 或 TRPC6 的活性没有显著影响,这表明 ACA 的作用不依赖于其对磷脂酶 A2 的抑制。[1]
细胞实验
全细胞膜片钳记录: 使用膜片钳技术的全细胞配置测量膜电流。将细胞置于灌流有浴液的记录槽中。微电极内充满细胞内液。对于 TRPM2 激活,电极内液含有 1 mM ADPR。对于 TRPC6 激活,电极内液含有 30 µM AlF4-。通过每2秒施加一次从 -100 mV 到 +100 mV 的电压斜坡来诱发电流。为了测试药物效应,通过浴液灌流胞外施用 ACA 或其他化合物。记录电流,进行滤波、数字化和分析。[1]
钙成像(单细胞):使用荧光指示剂 fura-2 测量转染了 TRPM2 的单个 HEK293 细胞的细胞内钙浓度 ([Ca2+]i)。用 fura-2-AM 负载细胞。用 340 nm 和 380 nm 的光激发荧光。背景扣除后计算荧光比值 F340/F380,以监测 [Ca2+]i 的变化。使用 H2O2 作为 TRPM2 的胞外激活剂,并测试预加 ACA 的效果。[1]
钙成像(板式读数仪): 使用荧光指示剂 fluo-4 对在 96 孔板中培养的转染了 TRPM8 的 HEK293 细胞进行 [Ca2+]i 测量。用 fluo-4 负载细胞。负载后,将溶液更换为含有 EGTA 的无钙溶液。将板放入荧光成像板读数仪中。用 485 nm 的光激发荧光,在 535 nm 测量发射光。依次向孔中加入薄荷醇、ACA 和 CaCl2,并监测荧光变化。[1]
蛋白质印迹: 将来自不同细胞系的膜蛋白在 6% 聚丙烯酰胺凝胶上进行 SDS-PAGE 分离,并转印至硝酸纤维素膜上。膜与针对 TRPM2 的一抗在 4°C 孵育过夜。洗涤后,使用化学发光检测试剂盒检测结合的一抗,以确认 TRPM2 蛋白的表达。[1]
参考文献

[1]. Inhibition of TRPM2 cation channels by N-(p-amylcinnamoyl)anthranilic acid. Br J Pharmacol. 2006 Jun;148(3):264-73.

[2]. N-(p-amylcinnamoyl)anthranilic acid (ACA): a phospholipase A(2) inhibitor and TRP channel blocker. Cardiovasc Drug Rev. 2007 Spring;25(1):61-75.

[3]. Inhibition of the calcium-activated chloride current in cardiac ventricular myocytes by N-(p-amylcinnamoyl)anthranilic acid (ACA). Biochem Biophys Res Commun. 2010 Nov 19;402(3):531-6.

其他信息
N-(p-amylcinnamoyl)anthranilic acid is an amidobenzoic acid that is anthranilic acid in which one of the anilino hydrogens is replaced by a 4-pentylcinnamoyl group. It is a transient receptor potential (TRP) channel blocker and phospholipase A2 (PLA2) inhibitor. It has a role as an EC 3.1.1.4 (phospholipase A2) inhibitor and a TRP channel blocker. It is an amidobenzoic acid, a member of cinnamamides and a secondary carboxamide.
ACA (N-(p-amylcinnamoyl)anthranilic acid) is structurally an N-cinnamoylanthranilic acid derivative. It was previously known as a phospholipase A2 inhibitor. This study identifies it as a direct modulator of several TRP channels (TRPM2, TRPM8, TRPC6). The inhibition of TRPM2 by ACA is proposed to occur via an extracellular site, modulating channel gating. The block is pH-dependent, being faster at lower pH, which is consistent with ACA being a weak acid. Due to its potency, ACA can serve as a useful pharmacological tool, in combination with other blockers, to study the function of TRPM2 and related channels in native cells. [1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C21H23NO3
分子量
337.41
精确质量
337.167
CAS号
110683-10-8
相关CAS号
110683-10-8
PubChem CID
5353376
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.2±0.1 g/cm3
沸点
563.1±50.0 °C at 760 mmHg
闪点
294.4±30.1 °C
蒸汽压
0.0±1.6 mmHg at 25°C
折射率
1.629
LogP
7.11
tPSA
66.4
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
3
可旋转键数目(RBC)
8
重原子数目
25
分子复杂度/Complexity
452
定义原子立体中心数目
0
SMILES
CCCCCC1=CC=C(C=C1)/C=C/C(=O)NC2=CC=CC=C2C(=O)O
InChi Key
GAMRBCZMOOMBSQ-CCEZHUSRSA-N
InChi Code
InChI=1S/C21H23NO3/c1-2-3-4-7-16-10-12-17(13-11-16)14-15-20(23)22-19-9-6-5-8-18(19)21(24)25/h5-6,8-15H,2-4,7H2,1H3,(H,22,23)(H,24,25)/b15-14+
化学名
2-((Z)-((E)-1-hydroxy-3-(4-pentylphenyl)allylidene)amino)benzoic acid
别名
ACE; N-(p-amylcinnamoyl) Anthranilic Acid
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO:>30 mg/mL
Water:<1 mg/mL
Ethanol:<1 mg/mL
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.9638 mL 14.8188 mL 29.6375 mL
5 mM 0.5928 mL 2.9638 mL 5.9275 mL
10 mM 0.2964 mL 1.4819 mL 2.9638 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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