BTK (IC50 = 3 nM)
Acalabrutinib (ACP-196) targets Bruton's tyrosine kinase (Btk), covalently binding to Cys481 of Btk (no IC50/Ki/EC50 values for Btk inhibition provided) [1]
Acalabrutinib (ACP-196) targets Bruton's tyrosine kinase (Btk) (no IC50/Ki/EC50 values for Btk inhibition provided); it does not inhibit EGFR (no inhibition at 10 μM), Itk or Txk, while ibrutinib inhibits EGFR with EC50 of 47-66 nM [3]

体外活性：在原代人 CLL 细胞的体外信号传导测定中，acalabrutinib 抑制 ERK、IKB 和 AKT 下游靶标的酪氨酸磷酸化。 Acalabrutinib 对 BTK 具有更高的选择性，对 9 种具有与 BTK 相同位置的半胱氨酸残基的激酶进行 IC50 测定。重要的是，与依鲁替尼不同，acalabrutinib 不会抑制 EGFR、ITK 或 TEC。 acalabrutinib 对 EGFR 酪氨酸残基 Y1068 和 Y1173 磷酸化没有影响。与 ibrutinib 相比，acalabrutinib 对 ITK、EGFR、ERBB2、ERBB4、JAK3、BLK、FGR、FYN、HCK、LCK、LYN、SRC 和 YES1 激酶活性具有更高的 IC50（>1000 nM）或几乎没有抑制作用。激酶测定：先前的研究表明，当针对一组 395 个非突变激酶进行测试时，ACP-196 对 Btk 具有高选择性，这与 ACP-196 亲电子试剂的内在反应性降低有关。此外，ACP-196 不能抑制 EGFR、Itk 或 Txk，这与依鲁替尼不同。此外，对 EGFR 表达细胞系的磷流分析进一步证实了依鲁替尼对 EGFR 的抑制作用，而没有观察到 ACP-196 的抑制作用。细胞测定：对 EGFR 表达细胞系的磷流测定进一步证实了依鲁替尼对 EGFR 的抑制作用，而没有观察到 ACP-196 的抑制作用。

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1. Acalabrutinib (ACP-196) 是一种新型不可逆的第二代BTK抑制剂，相较于伊布替尼具有更高的效价和选择性[1]
2. 在两株经免疫表型确认的犬B细胞淋巴瘤细胞系（CLBL-1和17-71）中，Acalabrutinib (ACP-196) 以低至10 nM的浓度处理细胞1小时，可强效抑制Btk及其下游效应分子ERK 1/2和PLCγ2的活化[2]
3. 在针对395种非突变激酶的竞争性结合实验（1 μM浓度）中，Acalabrutinib (ACP-196) 对Btk的选择性高于伊布替尼和CC-292；对9种与Btk具有相同位置半胱氨酸残基的激酶进行IC50测定，证实 Acalabrutinib (ACP-196) 是选择性最高的抑制剂，其高选择性与自身亲电基团的固有反应性降低相关[3]
4. 在人全血实验中，Acalabrutinib (ACP-196) 和伊布替尼在低纳摩尔浓度范围内对B细胞受体（BCR）诱导的应答表现出强劲且等效的抑制活性，而CC-292的效价低10-20倍[3]
5. 在EGFR表达细胞系的磷酸流式细胞术实验中，证实 Acalabrutinib (ACP-196) 在10 μM浓度下无EGFR抑制作用，而伊布替尼对EGFR的抑制EC50为47-66 nM[3]

小鼠口服 ACP-196 会导致 CD19+ 脾细胞中抗 IgM 诱导的 CD86 表达受到剂量依赖性抑制，ED50 为 0.34 mg/kg，而依鲁替尼为 0.91 mg/kg。使用类似的模型来比较单次口服剂量 25 mg/kg 后 Btk 抑制的持续时间。 ACP-196 在给药后 3 小时抑制 CD86 表达 >90%。

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Acalabrutinib (ACP-196)的临床前研究[1]
Acalabrutinib/阿卡拉布替尼在几种B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)动物模型中进行了评估。这些研究为阿卡拉布替尼进入人体试验提供了必要的临床前体内数据。在犬B细胞NHL模型研究中，12只B细胞NHL犬口服阿卡拉布替尼，剂量逐渐递增，每24小时2.5 mg/kg(6只狗)，每24小时5 mg/kg(5只狗)，或每12小时10 mg/kg(1只狗)。结果，3只狗获得部分缓解(PR)， 3只狗病情稳定(SD)，而其余6只狗病情进展(PD)。因此，本研究表明阿卡拉布替尼在自发性NHL大型动物模型中具有单药生物活性。[1]
阿卡拉布替尼对CLL细胞的体内作用在移植人CLL细胞的NSG小鼠模型中得到了证实。阿卡拉布替尼在所有剂量水平下均能显著抑制NSG小鼠脾脏中人CLL细胞的增殖，检测Ki67的表达(P = 0.002)。阿卡拉布替尼治疗后肿瘤负荷呈剂量依赖性下降。阿卡拉布替尼通过降低plc - γ - 2的磷酸化来抑制BCR信号传导。阿卡拉布替尼可瞬间增加外周血CLL细胞计数。因此，新型BTK抑制剂acalabrutinib对移植到NSG小鼠模型的人CLL细胞具有体内抑制作用。 < br > < br > 在另一项体内研究中使用了两只小鼠模型。在TCL1过继性转移模型中，阿卡拉布替尼通过降低BTK的自磷酸化和降低BCR激活标志物CD86和CD69的表面表达来抑制BCR信号传导。最有趣的是，阿卡拉布替尼治疗显著提高了小鼠的生存率(中位81天vs 59天，P = 0.02)。第二种小鼠模型为NSG异种移植模型。阿卡拉布替尼显著降低了plc - γ - 2和ERK的磷酸化水平(P = 0.02)，降低了肿瘤细胞的增殖(P = 0.02)，降低了肿瘤负荷(P = 0.04)。Acalabrutinib在两种小鼠CLL模型中均显示为BTK的有效抑制剂。

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1. 在小鼠模型中，口服给予Acalabrutinib (ACP-196) 可剂量依赖性抑制抗IgM诱导的CD19+脾细胞中CD86的表达，其ED50为0.34 mg/kg，而伊布替尼的ED50为0.91 mg/kg[3]
2. 在单次口服25 mg/kg剂量后评估Btk抑制持续时间的小鼠模型中，Acalabrutinib (ACP-196) 和伊布替尼在给药后3小时可抑制CD86表达>90%，给药后24小时抑制率约50%；相比之下，CC-292在给药后3小时抑制率约50%，24小时仅约20%[3]
3. 在一项针对12只自发性B细胞非霍奇金淋巴瘤（NHL）伴侣犬的正在进行的临床试验中，Acalabrutinib (ACP-196) 经口服给药，剂量方案为：2.5 mg/kg每24小时（6只犬）、5 mg/kg每24小时（5只犬）、10 mg/kg每12小时（1只犬）：
- 采用源自Acalabrutinib (ACP-196) 的生物素标记探针评估外周血和淋巴瘤细胞中的Btk占有率；2.5 mg/kg剂量下，除1例外周血B细胞计数高的犬外，其余所有犬在给药后3小时外周血B细胞中均达到完全的Btk占有率，且所有犬在给药后24小时的Btk靶点占有率为83-99%[2]
- 依据改良RECIST标准评估，2.5 mg/kg组有2只犬、10 mg/kg组有1只犬达到部分缓解；2.5 mg/kg组1只缓解犬复发后，在第42天将剂量升级至10 mg/kg每12小时，重新实现了复发后的部分缓解[2]
- 3只犬获得>28天的疾病稳定，6只犬在给药后28天内出现疾病进展并退出研究[2]
4. 在健康志愿者中，口服100 mg每日一次的Acalabrutinib (ACP-196) 可在24小时内实现>90%的Btk靶点覆盖率；Btk占有率及药效学标志物（CD69和CD86）的调控与暴露量的药代动力学参数相关[3]
5. 在慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者中，每日口服200 mg Acalabrutinib (ACP-196) 给药7天后，Btk靶点占有率达94%（对比伊布替尼420 mg每日一次的约80%）[3]

根据之前的一项研究，当针对一组 395 个非突变激酶进行测试时，ACP-196 的亲电子试剂固有反应性降低与其对 Btk 的高选择性有关。与依鲁替尼相反，ACP-196 无法抑制 EGFR、Itk 或 Txk。通过对表达 EGFR 的细胞系进行磷酸流分析，进一步证实了依鲁替尼在不抑制 ACP-196 的情况下抑制 EGFR 的作用。

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与ibrutinib和CC-292相比，ACP-196在竞争结合实验中对395种非突变激酶(1 μM)进行了分析，显示出更高的Btk选择性。对与Btk相同位置的9个激酶的IC50测定表明，ACP-196的选择性最强。选择性的提高与ACP-196亲电试剂的本征反应性降低有关。重要的是，与依鲁替尼不同，ACP-196不抑制EGFR、Itk或Txk。在表达EGFR的细胞株上进行的磷酸流实验证实了依鲁替尼对EGFR的抑制作用(EC50: 47 ~ 66 nM)，而在10 μM下对ACP-196没有抑制作用。这些数据可以解释依鲁替尼相关的腹泻和皮疹发生率。伊鲁替尼对Itk和Txk的效力可能解释了为什么它会干扰治疗性CD20抗体的细胞介导的抗肿瘤活性和肿瘤微环境中免疫介导的杀伤。 在人全血中，ACP-196和伊鲁替尼在低nM范围内对b细胞受体诱导的反应表现出强大的、同等的抑制活性，而CC-292的抑制作用弱10-20倍。[3]

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1. 开展竞争性结合实验，在1 μM浓度下分析Acalabrutinib (ACP-196) 对395种非突变激酶的结合选择性；该实验对比了Acalabrutinib (ACP-196) 与伊布替尼、CC-292的结合亲和力，以评估对Btk的相对选择性[3]
2. 对9种在与Btk相同位置具有半胱氨酸残基的激酶进行IC50测定；该实验检测Acalabrutinib (ACP-196)、伊布替尼和CC-292抑制各激酶所需的浓度，以验证Acalabrutinib (ACP-196) 的选择性[3]
3. 在EGFR表达细胞系上开展磷酸流式细胞术实验，评估Acalabrutinib (ACP-196) 和伊布替尼对EGFR活性的抑制作用；该实验定量不同浓度下的EGFR抑制水平，其中Acalabrutinib (ACP-196) 测试浓度最高至10 μM，伊布替尼则测定其EC50（47-66 nM）[3]
4. 开发基于ELISA的Btk靶点占有率实验，用于检测临床前和临床研究中Acalabrutinib (ACP-196) 的靶点覆盖率；该实验利用特异性试剂检测生物样本（外周血、淋巴瘤细胞等）中Acalabrutinib (ACP-196) 与Btk的结合情况[3]

磷酸流测试中使用的表达 EGFR 的细胞系进一步验证了依鲁替尼对 EGFR 的抑制作用，未观察到任何 ACP-196 抑制作用。

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最近认识到b细胞受体(BCR)信号是b细胞恶性肿瘤(包括非霍奇金淋巴瘤(NHL))进展的关键因素，导致许多靶向治疗方法的发展，抑制这一信号通路。Ibrutinib是一种布鲁顿酪氨酸激酶(Btk)的小分子抑制剂，Btk是BCR通路中的关键信号分子，已在广泛的b细胞癌中显示出显着的临床活性。ACP-196是第二代Btk抑制剂，与伊鲁替尼相比，具有更高的靶标选择性和更高的体内效价，因此可能比其前身有所改进。在接下来的研究中，我们试图评估ACP-196在犬b细胞NHL模型中的作用，最终目的是为ACP-196进入人体临床试验提供必要的临床前数据。利用两种免疫表型证实的犬b细胞淋巴瘤细胞系CLBL-1和17-71，我们证明了ACP-196在低至10nM的浓度下治疗1小时后，对Btk和下游效应物ERK 1/2和PLCγ2的激活有有效的体外抑制作用。[2]

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1. 选取经免疫表型确认的犬B细胞淋巴瘤细胞系（CLBL-1和17-71），采用低至10 nM浓度的Acalabrutinib (ACP-196) 处理细胞1小时；检测并定量Btk及其下游效应分子ERK 1/2、PLCγ2的活化水平，以评估Acalabrutinib (ACP-196) 对BCR信号通路的抑制作用[2]
2. 利用人全血样本评估Acalabrutinib (ACP-196)、伊布替尼和CC-292对B细胞受体（BCR）诱导应答的抑制活性；该实验检测在不同浓度抑制剂存在下，BCR激动剂刺激后B细胞的功能应答，其中Acalabrutinib (ACP-196) 和伊布替尼在低纳摩尔浓度范围内表现出强效活性[3]

犬B细胞非霍奇金淋巴瘤模型
2.5、5、10 mg/kg。
口服给药

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作为一项正在进行的临床试验的一部分，在伴侣犬中进行了体内研究。12只经免疫表型确诊的自发性B细胞非霍奇金淋巴瘤犬分别口服ACP-196，剂量分别为2.5 mg/kg，每24小时一次（6只犬）、5 mg/kg，每24小时一次（5只犬）或10 mg/kg，每12小时一次（1只犬）。使用源自ACP-196的生物素标记探针评估外周血和淋巴瘤细胞中Btk的占有率。通过该检测方法，我们发现，除一只外周血B细胞计数较高的犬外，所有犬在给药后3小时，2.5 mg/kg剂量组的外周血B细胞均达到完全Btk占有率。给药后24小时，所有犬的Btk靶点占有率均达到83-99%。根据改良的RECIST标准评估，2.5mg/kg组的2只犬和10mg/kg组的1只犬达到部分缓解。2.5mg/kg组的1只缓解犬在第42天复发后，剂量增加至10mg/kg，每12天一次，并再次达到部分缓解。其余9只犬中，3只病情稳定超过28天，6只在开始治疗28天内病情进展后退出研究。截至目前，共有3只犬达到部分缓解，3只犬病情稳定，6只犬病情进展。ACP-196耐受性良好，仅部分犬出现轻度厌食。这些数据表明，ACP-196在人类非霍奇金淋巴瘤（NHL）的自发性大型动物模型中具有单药生物活性。目前正在进行NHL犬的研究，以确定在启动人体I期临床试验之前的治疗方案。计划开展更多队列研究，将 ACP-196 与磷脂酰肌醇 3-激酶 (PI3K) δ 特异性抑制剂联合应用。[2]

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在体内，小鼠口服 ACP-196 可剂量依赖性地抑制 CD19+ 脾细胞中抗 IgM 诱导的 CD86 表达，其 ED50 为 0.34 mg/kg，而伊布替尼的 ED50 为 0.91 mg/kg。采用类似模型比较了单次口服 25 mg/kg 后 Btk 抑制的持续时间。ACP-196 和伊布替尼在给药后 3 小时抑制 CD86 表达 >90%，24 小时抑制约 50%。相比之下，CC-292 在给药后 3 小时抑制约 50%，24 小时抑制约 20%。我们开发了一种基于 ELISA 的 Btk 靶点占有率检测方法，用于测量临床前和临床研究中的靶点覆盖率。在健康志愿者中，每日一次口服 100 mg ACP-196，24 小时内靶点覆盖率超过 90%。Btk 占有率和药效学标志物（CD69 和 CD86）的调控与药物暴露的药代动力学参数相关。在慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 患者中，每日一次口服 200 mg ACP-196 7 天后，观察到 94% 的 Btk 靶点占有率，而每日一次 420 mg 伊布替尼的报道值约为 80% [3]。

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1. Btk 抑制评估的小鼠模型：Acalabrutinib (ACP-196) 以不同剂量（包括单次 25 mg/kg 剂量和用于确定 ED50 的递增剂量）经口服途径给予小鼠；使用抗IgM诱导CD19+脾细胞表达CD86；在不同时间点（给药后3小时和24小时）测量CD86表达水平，以评估Acalabrutinib (ACP-196)抑制Btk的效力和持续时间，并以ibrutinib和CC-292作为对照[3]
2. 自发性B细胞NHL犬模型：12只经免疫表型确诊为B细胞NHL的伴侣犬参与了一项正在进行的临床试验；Acalabrutinib (ACP-196)以三种剂量方案口服给药：2.5 mg/kg每日一次（6只犬），5 mg/kg每日一次（5只犬），10 mg/kg每日两次（1只犬）；使用源自阿卡替尼 (ACP-196) 的生物素标记探针，在给药后 3 小时和 24 小时评估外周血和淋巴瘤细胞中的 Btk 占有率；根据改良的 RECIST 标准评估肿瘤反应随时间的变化，并对反应（部分缓解、疾病稳定、疾病进展）进行随访，对复发患者进行剂量递增（10 mg/kg，每 12 天一次）[2]

吸收、分布和排泄
阿卡替尼的几何平均绝对生物利用度为25%，达峰时间（Tmax）中位数为0.75小时。
健康受试者单次服用100 mg放射性标记的阿卡替尼后，84%的剂量从粪便中回收，12%的剂量从尿液中回收。经放射性标记的阿卡替尼中，34.7%以代谢物ACP-5862的形式回收；8.6%以未代谢的阿卡替尼的形式回收；10.8%以M7、M8、M9、M10和M11代谢物的混合物的形式回收；5.9%为代谢物M25； 2.5% 的药物以 M3 代谢物的形式回收。
平均稳态分布容积约为 34 L。
基于群体药代动力学分析，阿卡替尼的平均表观口服清除率 (CL/F) 为 159 L/hr，患者和健康受试者的药代动力学特征相似。

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代谢/代谢物
阿卡替尼主要通过 CYP3A 酶代谢。ACP-5862 被鉴定为血浆中的主要活性代谢物，其几何平均暴露量 (AUC) 约为阿卡替尼暴露量的 2-3 倍。在抑制 BTK 方面，ACP-5862 的效力比 acalabrutinib 低约 50%。

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生物半衰期
单次口服 100 mg acalabrutinib 后，该药物的中位末端消除半衰期为 0.9 小时（范围 0.6 至 2.8 小时）。活性代谢物 ACP-5862 的半衰期约为 6.9 小时。

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1. 在健康志愿者中，Acalabrutinib (ACP-196)（每日一次口服 100 mg）对 BTK 的占有率和对 PD 标志物（CD69 和 CD86）的调节与暴露的 PK 参数相关[3]

肝毒性
在针对慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 和套细胞淋巴瘤患者的阿卡替尼开放标签临床试验中，19% 至 23% 的患者在治疗期间出现血清转氨酶升高，其中 2% 至 3% 的患者升高至正常值上限 (ULN) 的 5 倍以上。这些升高是短暂的，可自行恢复，但偶尔会导致提前停药。在 610 例接受阿卡替尼治疗的注册前试验患者中，未发现与该药相关的临床明显肝损伤病例，但有一例因乙型肝炎病毒再激活而导致急性肝衰竭和死亡。另一种布鲁顿酪氨酸激酶小分子抑制剂伊布替尼也曾报道过类似的再激活病例。阿卡替尼的临床经验有限，临床明显肝损伤和乙型肝炎病毒再激活的发生率尚不清楚。大多数病例发生在服用多种免疫抑制剂的患者中，而不仅仅是单独服用阿卡替尼的患者。
可能性评分：D（可能是罕见的乙型肝炎病毒再激活原因）。

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妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无阿卡替尼在哺乳期临床应用的信息。由于阿卡替尼与血浆蛋白的结合率超过97%，且药物及其代谢物的半衰期均小于7小时，因此其在乳汁中的含量可能很低。然而，活性代谢物的蛋白结合率尚不清楚，因此生产商建议在接受acalabrutinib治疗期间以及末次给药后至少2周内停止母乳喂养。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对哺乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白结合
acalabrutinib与人血浆蛋白的可逆结合率约为97.5%。体外平均血血浆比约为0.7。体外实验表明，在生理浓度下，acalabrutinib 与人血清白蛋白的结合率为 93.7%，与 α-1-酸性糖蛋白的结合率为 41.1%。

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1. 在 Acalabrutinib (ACP-196) 的犬临床试验中，该药物耐受性良好，仅在部分犬只中观察到轻度厌食[2]
2. Ibrutinib（第一代 BTK 抑制剂）已知的毒性包括心房颤动、腹泻、皮疹、关节痛和出血事件；这些毒性可能与其脱靶效应（例如，EGFR、Itk、Txk 抑制）有关，而 Acalabrutinib (ACP-196) 具有更高的选择性，不抑制 EGFR、Itk 或 Txk，提示其潜在的脱靶毒性更低[3]

[1]. J Hematol Oncol . 2016 Mar 9:9:21.

[2].Cancer Res (2014) 74 (19_Supplement): 1744.

[3]. Cancer Res (2015) 75 (15_Supplement): 2596.

药效学
阿卡替尼是一种布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂，可抑制B细胞的增殖、迁移、趋化和黏附。它每12小时服用一次，并可能引起其他不良反应，例如心房颤动、其他恶性肿瘤、血细胞减少、出血和感染。

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1. 阿卡替尼 (ACP-196)是一种新型不可逆的第二代BTK抑制剂，其效力和选择性均优于伊布替尼（首个获批用于治疗慢性淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤和华氏巨球蛋白血症的BTK抑制剂）[1]
2. B细胞受体 (BCR) 信号传导是B细胞恶性肿瘤进展的关键因素； Acalabrutinib (ACP-196)通过靶向BCR信号通路中的关键分子Btk来抑制BCR信号传导[2]
3. Acalabrutinib (ACP-196)选择性的提高与其亲电试剂固有反应性的降低有关；与伊布替尼不同，它不抑制EGFR、Itk或Txk，这可能避免伊布替尼相关的毒性（腹泻、皮疹）以及对CD20抗体介导的抗肿瘤活性的干扰[3]
4. Acalabrutinib (ACP-196)正在进行B细胞恶性肿瘤的临床试验评估；计划开展更多队列研究，将Acalabrutinib (ACP-196)与磷脂酰肌醇3-激酶 (PI3K)δ特异性抑制剂联合用于犬类非霍奇金淋巴瘤模型[2]
5. 在慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 患者中，Acalabrutinib (ACP-196)每日一次 200 mg 给药 7 天后，其 Btk 靶点占有率 (94%) 高于伊布替尼每日一次 420 mg 给药（约 80%）[3]

C26H23N7O2

465.51

465.191

C, 67.08; H, 4.98; N, 21.06; O, 6.87

1420477-60-6

Acalabrutinib-d4;2699608-18-7;Acalabrutinib-d3; 1420477-60-6; 2058091-99-7 (citrate); 2242394-65-4; 2058091-96-4 (phosphate); 2058091-93-1 (3 hydrate); 2058092-05-8 (sulfate); 2058091-94-2 (fumarate); 2058091-97-5 (tartrate)

71226662

Yellow solid powder

1.4±0.1 g/cm3

1.715

0.77

118.51

2

6

4

35

845

1

O=C(C#CC([H])([H])[H])N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C1=NC(C2C([H])=C([H])C(C(N([H])C3=C([H])C([H])=C([H])C([H])=N3)=O)=C([H])C=2[H])=C2C(N([H])[H])=NC([H])=C([H])N12

WDENQIQQYWYTPO-IBGZPJMESA-N

InChI=1S/C26H23N7O2/c1-2-6-21(34)32-15-5-7-19(32)25-31-22(23-24(27)29-14-16-33(23)25)17-9-11-18(12-10-17)26(35)30-20-8-3-4-13-28-20/h3-4,8-14,16,19H,5,7,15H2,1H3,(H2,27,29)(H,28,30,35)/t19-/m0/s1

4-[8-amino-3-[(2S)-1-but-2-ynoylpyrrolidin-2-yl]imidazo[1,5-a]pyrazin-1-yl]-N-pyridin-2-ylbenzamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 2% DMSO+30% PEG 300+2% Tween 80+ddH2O: 6mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。