| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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描述：Adaphostin (NSC-680410) 是 AG957 的金刚烷酯衍生物，可作为 Bcr/Abl 阳性白血病中 Fas 介导的细胞死亡通路的新型强效激活剂。它还能诱导 T 淋巴母细胞白血病细胞系凋亡（IC50 范围为 17 至 216 nM），并作为 p210bcr/abl 抑制剂（IC50=14 μM）。
| 靶点 |
p210Bcr/abl kinase [4]
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| 体外研究 (In Vitro) |
在慢性粒细胞白血病 (CML) 标本中，低浓度的 Adaphostin 可抑制粒细胞集落形成，且不会增加正常祖细胞的毒性，并可下调 K562 细胞中的 p210bcr/abl[1]。N-乙酰半胱氨酸 (NAC) 可抑制 ML-1 细胞中 adipostin 诱导的 p53 上调、DNA 链断裂和 ROS 生成[4]。在 9 种人白血病细胞系（CEM/0、阿糖胞苷耐药克隆、天冬酰胺酶耐药克隆、Jurkat/E6-1）中，经 48 小时 MTT 检测，Adaphostin 的 IC50 值范围为 17 至 216 nM。其同系物 NSC 682492 的效力较低。相差显微镜显示，在 0.1-1 μM 浓度下，24 小时内即可观察到细胞凋亡形态（核浓缩和凋亡小体）。Western blot 显示 caspase-3 裂解（11 和 21 kDa 片段），ELISA 检测表明，在 1 μM 浓度下处理 24 小时后，caspase-3 活性增加高达 5 倍。24 小时后，蛋白质合成（³H-亮氨酸掺入）被抑制 90-97%。在几种细胞系中，上清液中 VEGF 的分泌呈剂量依赖性抑制（0.1 和 1 μM），而细胞系 3、5 和 9 则不分泌 VEGF。Western blot 显示，处理后 VEGF-R1 蛋白水平降低。用 Flt-1/Fc 嵌合体（VEGF 抑制剂）处理的 U87 MG 胶质母细胞瘤细胞显示出 30-43% 的细胞死亡率；阿达福斯汀与Flt-1/Fc嵌合体联用表现出8倍的协同作用（嵌合体的IC50值降低）。[2]
阿达福斯汀抑制Ph阳性（KBM5、KBM7）和Ph阴性（OCI/AML2、OCI/AML3）细胞系的生长，MTS检测72小时后IC50值为0.5-1 μM。K562细胞的敏感性较低（IC50约为13 μM）。伊马替尼耐药的KBM5-R和KBM7-R对阿达福斯汀表现出交叉耐药性（72小时IC50约为1.3 μM）。阿达福斯汀以剂量和时间依赖的方式诱导细胞凋亡：caspase-3/7活性在18小时和48小时增加（例如AML2和KBM7）。在KBM5细胞中，24小时处理导致线粒体膜电位（CMXRos/MTGreen）呈剂量依赖性下降，caspase-3（PhiPhiLux/PI）激活，以及膜联蛋白V阳性。伊马替尼仅在KBM7细胞中诱导细胞凋亡，而阿达福斯汀则在KBM5和KBM7细胞中均诱导细胞凋亡。阿达福斯汀与伊马替尼（伊马替尼的IC20浓度）联用在KBM5、KBM7、KBM5-R和KBM7-R细胞中表现出叠加效应（而非协同效应）；仅K562细胞显示出显著的协同效应。原发性CML和AML患者细胞（包括伊马替尼耐药的慢性期、急变期和复发性AML）在阿达福斯汀（0.5-2 μM）处理下，集落形成（克隆形成实验）呈剂量依赖性降低。正常骨髓集落生长未受显著影响。在短期MTS试验中，Adaphostin也能杀死AML细胞。抗磷酸酪氨酸抗体的Western blot分析显示，KBM5和OCI/AML3细胞中酪氨酸磷酸化模式呈时间和剂量依赖性变化，且具有细胞系特异性。在KBM5和OCI/AML3细胞中未检测到Crk-L和Cbl蛋白，表明Adaphostin的细胞毒性与这些Bcr/Abl下游效应因子无关。Bcl-2的表达未发生显著变化。Adaphostin可诱导KBM5和OCI/AML3细胞产生超氧化物（呈剂量和时间依赖性），而抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）可显著降低超氧化物的产生。[3] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在原位脑肿瘤模型中，将10⁶个U87 MG胶质母细胞瘤细胞接种到无胸腺小鼠的尾状核壳核中。从第3天开始，小鼠接受腹腔注射Adaphostin（8.33 mg/kg/天），每周3次，持续4周，单独使用或与单次皮下注射Flt-1/Fc嵌合体（5 mg/kg）联合使用。对照组小鼠出现较大的颅内和颅外肿瘤，中位生存期为23天。单独使用Adaphostin可将中位生存期提高至对照组的133%，小鼠仅出现中心坏死的小型颅内肿瘤。联合治疗可将生存期提高至对照组的142%，针道周围仅残留极小的肿瘤。在第29天处死的单独使用Adaphostin治疗的小鼠，其脑肿瘤较小，且未出现颅外肿瘤。然而，两只饲养至第33天（末次给药后6天）的小鼠平均颅外肿瘤复发量为1450毫克。相比之下，接受联合治疗的小鼠肿瘤极少，且在第28天至第33天之间未见生长，表明联合治疗的抑制作用持续时间更长。[2]
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| 酶活实验 |
采用 CaspACE 检测系统进行比色法定量分析 Caspase-3 活性。将细胞提取物（20 μl，相当于 2×10⁶ 个细胞）与提供的底物在 37°C 下孵育 4 小时，并在 405 nm 处根据标准曲线读取吸光度。 [2]
使用荧光底物（罗丹明 110，双-(N-CBZ-L-天冬氨酰-L-谷氨酰-L-缬氨酰-L-天冬氨酸酰胺，Z-DEVD-R110）测定 caspase-3/7 活性。将细胞以 1.5×10⁶/mL 的密度接种，在有或无药物的情况下孵育 18 小时或 48 小时，然后加入均相 caspase-3/7 试剂，在室温下孵育 2 小时，并在激发波长 499 nm 和发射波长 521 nm 处测量荧光强度。结果以相对荧光单位表示。[3] 通过二氢乙锭 (DHE) 染色评估超氧化物生成。将细胞用 adaphostin（2 或 5 μM）处理指定时间，并加入或不加入 24 mM NAC。在收获前 20 分钟加入 10 μM DHE。用缓冲液洗涤细胞。使用不含Ca²⁺的PBS缓冲液，并立即通过流式细胞仪分析乙锭荧光强度。[3] |
| 细胞实验 |
MTT 细胞毒性试验：将细胞以 2×10⁵/mL 的密度接种于 24 孔板中，用多种药物浓度处理 48 小时，然后加入 MTT 并测量 OD₄₉₅ 值。使用药物效应分析计算机程序计算 IC₅₀ 值。[2]
DNA、RNA 和蛋白质合成抑制：用药物处理细胞，然后用 5 μCi ³H-胸苷、³H-尿苷或³H-亮氨酸脉冲标记 30 分钟。离心、洗涤、裂解细胞，提取大分子，并计数放射性。[2] 细胞凋亡显微摄影：使用尼康倒置显微镜和数码相机拍摄相差图像；通过核浓缩和凋亡小体识别凋亡细胞，并计数每个视野中的凋亡细胞数量。 [2] Caspase-3 ELISA：用提供的缓冲液裂解细胞（约 10⁷ 个），离心后收集蛋白提取物，取 20 μl 提取物（相当于 2×10⁶ 个细胞）与底物在 37°C 下孵育 4 小时，测定 OD₄₀₅ 值。[2] VEGF ELISA：使用 Quantikine 人 VEGF ELISA 试剂盒，按照制造商的说明分析细胞培养上清液（含 10% FBS）。 [2] 蛋白质印迹：将蛋白质（50 μg）经SDS-PAGE（10%分离胶）分离后，转移至硝酸纤维素膜，用5% BLOTTO封闭，与一抗（caspase-3小鼠单克隆IgG2a 1:1000；VEGF-R1兔抗体1:100；actin山羊抗体1:1000）在4℃下杂交过夜，然后与二抗（抗小鼠/抗山羊IgG-HRP 1:1000）杂交，最后用ECL显色。[2] MTS法（细胞活力）：将细胞以0.4×10⁶/mL（细胞系）或1.0×10⁶/mL（原代细胞）的密度接种于96孔板中。药物暴露 24、48 或 72 小时后，加入 20 μL MTS 溶液，于 37°C 孵育 3 小时，在 490 nm 处测量吸光度。[3] 克隆形成实验：将单核细胞以 1×10⁵/mL 的浓度接种于含重组细胞因子的甲基纤维素培养基中。加入浓度递增的 Adaphostin。在 37°C、5% CO₂ 条件下培养 8 天后计数集落（>50 个细胞）。IC₅₀ 值相对于对照孔确定。[3] 流式细胞术检测细胞凋亡： - Annexin V/PI：洗涤细胞后，与 FITC 标记的 Annexin V (1:100) 在黑暗中孵育 15 分钟，然后加入 PI 进行分析。 - 线粒体膜电位：细胞用 MitoTracker Red CMXRos 和 MitoTracker Green FM（亚微摩尔浓度）在 37°C 下染色 1 小时，然后进行流式细胞术分析。 - Caspase-3 样活性：细胞用 PhiPhiLux G1D2 底物在 37°C 下孵育 1 小时，然后加入 PI 进行流式细胞术分析。 - 亚二倍体细胞群：仅用 PI 标记的细胞用于 DNA 片段化定量。[3] 超氧化物检测：细胞用 adaphostin（2 或 5 μM）处理指定时间，添加或不添加 24 mM NAC。在收集细胞前 20 分钟，加入 10 μM 二氢乙锭，然后洗涤并通过流式细胞术分析乙锭荧光。 [3] 蛋白质印迹和免疫沉淀：细胞在含蛋白酶抑制剂的TENN缓冲液中裂解。裂解液在4°C下以20,000 g离心50分钟。取200 μg蛋白进行9.5% SDS-PAGE电泳分离，转移至硝酸纤维素膜，用5%脱脂奶粉封闭，分别用小鼠抗磷酸酪氨酸抗体（1:2000）或抗β-肌动蛋白抗体进行孵育，然后用HRP标记的二抗进行孵育，最后用ECL法显色。免疫沉淀实验中，将裂解液与琼脂糖A/G和小鼠抗磷酸酪氨酸抗体（克隆4G）混合，在4°C下孵育16小时，洗涤，洗脱，进行SDS-PAGE电泳分离，最后用兔抗Crk-L抗体（0.5 μg/mL）或抗Cbl抗体进行孵育。[3] |
| 动物实验 |
将10⁶个表达GFP的U87 MG细胞悬浮于10 μL PBS中，原位接种到雌性无胸腺小鼠的尾状核壳核（位于前囟右侧1.8 mm，冠状缝前方0.4 mm，距颅骨3.0 mm处）。治疗从第3天开始。将Adaphostin溶解于50% DMSO中，然后用无菌PBS逐步稀释至1% DMSO。小鼠每天腹腔注射8.33 mg/kg的Adaphostin，每周三次，持续4周（总共治疗4周，于第28天结束）。其中一组小鼠在第3天额外皮下注射一次Flt-1/Fc嵌合体（5 mg/kg）。对照组腹腔注射载体（含1% DMSO的PBS）。每日记录体重。由于肿瘤进展，对照组动物在第17天被处死。在第29至34天之间处死接受治疗的动物。将脑组织和肿瘤用福尔马林固定，石蜡包埋，切片，并用苏木精-伊红染色。[2]
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| 药代性质 (ADME/PK) |
与母体化合物AG957相比，Adaphostin的血清半衰期更长。[4]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在无胸腺小鼠中，Adaphostin 治疗（8.33 mg/kg，腹腔注射，每周三次，持续 4 周）未引起体重变化。[2]
浓度高达 2 μM 的 Adaphostin 对正常人骨髓细胞克隆形成实验中的集落生长无显著影响。[3] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
Adaphostin是AG957的金刚烷酯。它对细胞系的IC₅₀值比AG957低约2倍，但对p210bcr/abl自激酶的Km值低5倍，提示其可能存在其他靶点。它能抑制VEGF分泌和VEGF-R1表达。与Flt-1/Fc嵌合体联合使用，在体外对U87 MG细胞显示出8倍的协同作用，并在原位脑肿瘤模型中提高了生存率。该药物通过激活caspase-3诱导细胞凋亡，并且对p53缺失的耐药白血病克隆有效。[2]
Adaphostin诱导白血病细胞产生超氧化物，这对于其细胞毒性至关重要；这种作用对白血病细胞具有选择性，而对正常祖细胞无选择性。伊马替尼耐药细胞系（KBM5-R，携带T315I突变；KBM7-R，携带BCR/ABL扩增）对阿达福斯汀表现出交叉耐药性。除K562细胞系外，阿达福斯汀与伊马替尼联合用药在大多数细胞系中具有叠加效应。Crk-L和Cbl并非阿达福斯汀活性所必需。其他研究表明，阿达福斯汀可通过ROS依赖性机制与蛋白酶体抑制剂（例如硼替佐米）产生协同作用。因此，阿达福斯汀值得在慢性粒细胞白血病（CML）和急性髓系白血病（AML）（包括伊马替尼耐药性疾病）的治疗中进行临床开发。[3] |
| 分子式 |
C24H27NO4
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|---|---|
| 分子量 |
393.47500
|
| 精确质量 |
393.194
|
| 元素分析 |
C, 73.26; H, 6.92; N, 3.56; O, 16.26
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| CAS号 |
241127-58-2
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| 相关CAS号 |
241127-58-2
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| PubChem CID |
387042
|
| 外观&性状 |
Off-white to light brown solid powder
|
| 密度 |
1.33g/cm3
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| 沸点 |
606.2ºC at 760mmHg
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| 闪点 |
320.4ºC
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| 蒸汽压 |
2.73E-15mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.661
|
| LogP |
4.991
|
| tPSA |
70
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
29
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| 分子复杂度/Complexity |
558
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
OC1=CC=C(O)C(CNC2=CC=C(C(OC34CC5CC(C3)CC(C5)C4)=O)C=C2)=C1
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| InChi Key |
YJZSUCFGHXQWDM-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C24H27NO4/c26-21-5-6-22(27)19(10-21)14-25-20-3-1-18(2-4-20)23(28)29-24-11-15-7-16(12-24)9-17(8-15)13-24/h1-6,10,15-17,25-27H,7-9,11-14H2
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| 化学名 |
1-adamantyl 4-[(2,5-dihydroxyphenyl)methylamino]benzoate
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| 别名 |
Adaphostin
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~50 mg/mL (~127.1 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.35 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.35 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5414 mL | 12.7071 mL | 25.4143 mL | |
| 5 mM | 0.5083 mL | 2.5414 mL | 5.0829 mL | |
| 10 mM | 0.2541 mL | 1.2707 mL | 2.5414 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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AKE-72
BCR-ABL kinase-IN-3 (dihydrocholide)
BCR-ABL kinase-IN-3
HG-7-86-01
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