| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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描述： AEG-3482 是一种新型强效抗凋亡剂，它通过诱导热休克蛋白 70 (HSP70) 的表达来抑制 c-Jun 激酶 (JNK) 的活性。
| 靶点 |
JNK
AEG3482 directly binds HSP90 (as shown by affinity pull‑down; no IC50/Ki reported) and, through this interaction, promotes HSF1‑dependent transcription of HSP70 and HSP25. The resulting accumulation of HSP70 then binds and inhibits JNK activity. [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
AEG3482 (0.3-30 μM；2 天) 可抑制神经生长因子 (NGF) 撤离诱导的 SCG 神经元死亡，EC50 约为 20 μM[1]。
AEG3482 (1-80 μM；40 小时) 以剂量依赖的方式抑制 PC12 细胞中 p75NTR 和 NRAGE 介导的细胞凋亡[1]。 AEG3482 (10-40 μM；30 小时) 可抑制 PC12 细胞中 p75NTR 和 NRAGE 介导的 JNK 激活[1]。 AEG3482 可抑制 NGF 撤离诱导的大鼠颈上神经节 (SCG) 交感神经元死亡，EC50 约为 20 μM（2 天后通过 MTS 法测定细胞活力）。 [1] 在过表达 p75NTR 或 NRAGE（可诱导 JNK 依赖性细胞凋亡）的 PC12TTA 细胞中，AEG3482 以剂量依赖的方式降低细胞死亡（LDH 释放实验）。在 40 μM 浓度下，AEG3482 可使 p75NTR 或 NRAGE 诱导的细胞死亡减少 90% 以上；在最高测试浓度 (80 μM) 下，AEG3482 略微增加了 LacZ 对照细胞的死亡。[1] AEG3482 可减弱 NRAGE 或 p75NTR 诱导的 JNK 激活：免疫印迹显示 JNK 靶标 c-Jun 的磷酸化水平降低，caspase-3 的裂解减少。在 10 μM 浓度下即可检测到该效应，在 40 μM 浓度下几乎完全抑制。 [1] - AEG3482抑制了紫杉醇（10和50 μM）诱导的细胞凋亡以及低剂量顺铂（10 μM）诱导的细胞凋亡，但不能抵抗高剂量顺铂（50 μM）或阿霉素（JNK非依赖性）诱导的细胞死亡。[1] - 用AEG3482处理18小时后，PC12细胞中HSP70和HSP25蛋白水平显著升高（免疫印迹）。半定量实时PCR显示HSP25和HSP70 mRNA水平升高，但对HSP90或肌动蛋白mRNA水平无影响。 [1] 在感染 LacZ 或 p75NTR 的 PC12TTA 细胞中，AEG3482 呈剂量依赖性地增加 HSP70 和 HSP25 的表达，但不增加 HSP40 的表达。NRAGE 感染本身即可提高 HSP70 的表达，而 AEG3482 可进一步提高其表达。[1] 在野生型小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 中，AEG3482 可诱导 HSP70 启动子活性（荧光素酶报告基因），并增加内源性 HSP70 和 HSP25 蛋白的表达；这些作用在 HSF1 敲除的 MEF 中消失。[1] AEG3482 偶联的 Sepharose 珠可结合纯化的 HSP90；过量的游离 AEG3482 可竞争性抑制其结合（免疫印迹）。 [1] - 类似物：AEG19940（结构相似）可诱导 HSP70 的产生，阻断 p75NTR/NRAGE 诱导的细胞死亡，并降低 c-Jun 的磷酸化水平。AEG33691 和 AEG33733 不诱导 HSP70 的产生，且在这些实验中没有观察到任何作用。[1] - 在 PC12TTA 细胞中，通过 RNAi 敲低 HSP70 可部分减弱 AEG3482（或 AEG19940）阻断 c-Jun 磷酸化的能力。使用 GST-c-Jun 报告基因特异性地检测转染细胞中的 JNK 活性，结果显示 HSP70 siRNA 几乎完全消除了 AEG19940 介导的对 NRAGE 诱导的 GST-c-Jun 磷酸化的抑制作用。 [1] 与格尔德霉素不同，AEG3482 不阻断 HSP90 与 γ-ATP-琼脂糖的结合，反而增强了这种结合。AEG3482 提高了 PC12 细胞中磷酸化 Akt 的水平，而格尔德霉素则降低了总 Akt 和磷酸化 Akt 的水平。[1] |
| 酶活实验 |
HSP90下拉实验：将AEG3482化学交联到Sepharose珠上，生成亲和树脂。纯化的HSP90蛋白与该树脂珠孵育2小时，然后充分洗涤树脂珠。洗脱结合的蛋白，并用抗HSP90抗体进行SDS-PAGE和免疫印迹分析。实验设置了对照（不含AEG3482）和过量游离AEG3482（80 μM）的竞争组。结果表明，AEG3482标记的树脂珠能够结合HSP90，而对照树脂珠则不能，且游离化合物能够降低结合率。 [1]
- γ-ATP-琼脂糖结合实验：将纯化的HSP90（1 μg）与ATP、格尔德霉素（1 μM）或不同浓度的AEG3482在孵育缓冲液（10 mM Tris pH 7.5、50 mM KCl、5 mM MgCl2、2 mM DTT、20 mM Na2MoO4、0.01% NP-40）中于室温预孵育10分钟。然后加入25 μl γ-ATP-琼脂糖珠，于30 °C孵育30分钟。用冰冷的缓冲液洗涤珠子，洗脱结合的蛋白，并通过免疫印迹法测定HSP90的含量。格尔德霉素阻断了HSP90与γ-ATP-琼脂糖的结合，而AEG3482不仅没有降低结合，反而增加了结合。 [1] - 体外 JNK 活性测定（提及但未详细说明）：AEG3482 对体外 JNK 活性无影响（数据未显示）。[1] |
| 细胞实验 |
交感神经元存活率测定 (MTS)：将大鼠上颈神经节 (SCG) 神经元最初培养于 10 ng/ml NGF 中，然后从 NGF 中取出，并在含有指定浓度 AEG3482 的培养基中培养。2 天后，根据制造商的说明，使用 MTS 法测定细胞活力。结果以 10 ng/ml NGF 中的存活率进行标准化。[1] - PC12 细胞死亡测定 (LDH)：将 PC12TTA 细胞感染重组腺病毒（AdLacZ、Adp75 或 AdNRAGE），并同时用递增浓度的 AEG3482 或载体处理 40 小时。根据制造商的方案，使用乳酸脱氢酶 (LDH) 释放测定法评估细胞死亡。使用未经处理的细胞和用 1% Triton X-100 处理的细胞来确定测定范围。 [1]
- 免疫印迹：裂解细胞，根据蛋白质含量进行标准化，然后通过 SDS-PAGE 和免疫印迹分析，所用抗体包括磷酸化 c-Jun、总 c-Jun、裂解型 caspase-3、JNK、IκBα、NRAGE、p75NTR、HSP70、HSP25、HSP40、Akt、磷酸化 Akt 和肌动蛋白。[1] - RT-PCR：将 PC12 细胞用递增浓度的 AEG3482 处理 18 小时。提取 mRNA，用随机六聚体引物合成 cDNA，并使用大鼠 HSP70、HSP25 和肌动蛋白特异性引物进行 PCR。 [1] - 转录报告基因检测：将 MEF 细胞（野生型或 HSF1 缺失型）转染 pGL3B-HSP70（HSP70 启动子-荧光素酶）或空载体。次日，加入 AEG3482 (40 μM)，并在转染 48 小时后收集细胞。使用商业检测系统测定荧光素酶活性。[1] - GST-c-Jun 报告基因检测：将编码人 c-Jun 氨基酸 2-79 的 cDNA 克隆到哺乳动物 GST 表达载体中。将该构建体与对照 siRNA 或 HSP70 特异性 siRNA 一起转染到 PC12TTA 细胞中。24 小时后，用 AdNRAGE 或 AdLacZ 感染细胞，并用 AEG19940 或载体处理。 30 小时后，裂解细胞，使用谷胱甘肽偶联磁珠（4℃，1 小时）回收 GST-c-Jun，并用抗磷酸化 c-Jun (Ser63) 抗体进行免疫印迹分析以评估磷酸化水平。使用抗 c-Jun 和抗 GST 抗体验证了相同的下拉结果。[1] - RNAi 转染：使用 Lipofectamine 2000 将 HSP70 特异性小干扰 RNA 的“SmartPool”或对照 RNA 转染至 PC12TTA 细胞。24 小时后，感染细胞并按指示进行处理。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在测试的最高浓度（80 μM）下，AEG3482 对感染对照 LacZ 腺病毒的 PC12TTA 细胞表现出轻微的毒性作用（通过 LDH 释放试验测定）。[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
6-苯基乙酰基-2-咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑磺酰胺属于咪唑类化合物。
背景和机制：AEG3482是首个被证实可通过诱导HSP70的产生来抑制JNK活化的化合物。它与HSP90结合，导致HSF1的释放，进而激活HSP70和HSP25基因的转录。积累的HSP70直接与JNK结合（可能位于或靠近其结合槽），抑制其活性，从而阻断细胞凋亡。该作用与HSP70的分子伴侣功能无关。 [1] - 与格尔德霉素的比较：与格尔德霉素不同，AEG3482 不占据 HSP90 的 ATP 结合口袋（不阻断 γ-ATP-琼脂糖结合），不降低 HSP90 底物蛋白 Akt 的水平或磷酸化，反而可能增强 Akt 的磷酸化。该化合物被认为与 HSP90 的肽结合域相互作用，促进 HSF1 的释放，同时保持 HSP90 的分子伴侣活性。[1] - 治疗潜力：作者预期 AEG3482 及其类似物将成为基础研究的有用工具，并具有治疗急性和慢性神经系统疾病的潜力。[1] |
| 分子式 |
C10H8N4O2S2
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|---|---|
| 分子量 |
280.32612
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| 精确质量 |
280.008
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| 元素分析 |
C, 42.85; H, 2.88; N, 19.99; O, 11.41; S, 22.87
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| CAS号 |
63735-71-7
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| 相关CAS号 |
63735-71-7
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| PubChem CID |
698112
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| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
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| 密度 |
1.8±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.835
|
| LogP |
1.32
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| tPSA |
126.97
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
2
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| 重原子数目 |
18
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| 分子复杂度/Complexity |
405
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C1=CC=C(C=C1)C2=CN3C(=N2)SC(=N3)S(=O)(=O)N
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| InChi Key |
MQUYTXDAVCOCMX-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C10H8N4O2S2/c11-18(15,16)10-13-14-6-8(12-9(14)17-10)7-4-2-1-3-5-7/h1-6H,(H2,11,15,16)
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| 化学名 |
6-phenylimidazo[2,1-b][1,3,4]thiadiazole-2-sulfonamide
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| 别名 |
AEG-3482; AEG 3482; AEG3482
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~250 mg/mL (~891.8 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.5672 mL | 17.8361 mL | 35.6722 mL | |
| 5 mM | 0.7134 mL | 3.5672 mL | 7.1344 mL | |
| 10 mM | 0.3567 mL | 1.7836 mL | 3.5672 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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JNK-9L
JNK3 Recombinant Human Active Protein Kinase
JNK2 Recombinant Human Active Protein Kinase
JNK-IN-25
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