AG-490 (Tyrphostin B42; zinc0255794) is a tyrosine kinase inhibitor targeting Janus kinase 3 (JAK3), epidermal growth factor receptor (EGFR), and mitogen-activated protein kinase (MAPK), with indirect inhibition of STAT signaling. In recombinant enzyme assays: - IC50 for JAK3 = ~10 μM [2]; - IC50 for EGFR = ~50 μM [1]; - IC50 for MAPK (ERK1/2) = ~25 μM [2]; - No significant inhibition of JAK1/JAK2 (IC50 > 100 μM) or non-kinase proteins (e.g., PARP) at concentrations up to 200 μM [2]

AG490 特异性阻断 JAK2 以防止 Stat-3 激活。 AG490 特异性抑制 JAK/Stat-3 激活。在 10 μM 剂量下，细胞活力得以保留，Stat-3 磷酸化降低了 95% 以上。在 EGF 刺激的 A431 细胞中，10 μM AG490 会导致 pStat-3 下降 > 95%，同时对 Stat-3 质量没有影响[1]。 AG-490 强烈抑制 JAK3/STAT、JAK3/AP-1 和 JAK3/MAPK 通路及其对细胞的影响。 AG-490 以剂量依赖性方式消除 IL-2 诱导的 [3H]胸苷掺入，IC50 为 25 μM。早期研究表明该药物会引发 ALL 细胞死亡，同时似乎对丝裂原刺激的正常 T 细胞的扩增没有影响，而 AG-490 则可有效抑制 T 细胞中 IL-2 介导的增殖[2]。

---

EGFR阳性细胞抗肿瘤活性（联合EGFR抑制剂）：在人鳞状细胞癌A431细胞（高EGFR表达）中，AG-490（Tyrphostin B42; zinc0255794） （10–100 μM）单独处理72小时（MTT法）：50 μM降低细胞存活率35%，100 μM降低55%。与EGFR抑制剂PD153035（100 nM）联合时，50 μM AG-490将存活率抑制率提升至80%，并通过蛋白质印迹法降低p-STAT3（Tyr705，70%）和p-EGFR（Tyr1173，65%）水平[1]
- IL-2介导的T细胞激活抑制：在IL-2（10 ng/mL）刺激的人外周血CD4+ T细胞中，AG-490（Tyrphostin B42; zinc0255794） （5–50 μM）剂量依赖性抑制反应：10 μM降低p-JAK3（Tyr980/981，80%）和p-STAT5（Tyr694，75%）（蛋白质印迹法）；50 μM抑制3H-TdR掺入（T细胞增殖指标）70%。10 μM时还降低p-ERK1/2（MAPK）60%[2]
- 胰岛细胞保护作用：在NOD小鼠原代胰岛细胞中，AG-490（Tyrphostin B42; zinc0255794） （20 μM）预处理1小时，可减少细胞因子混合物（IL-1β+IFN-γ+TNF-α，各10 ng/mL）诱导的凋亡：Annexin V+细胞从45%（单独细胞因子组）降至15%（流式细胞术）。胰岛素分泌得以维持（较细胞因子组提升60%，ELISA）[3]
- DRG神经元疼痛相关细胞因子减少：在LPS（1 μg/mL）刺激的大鼠背根神经节（DRG）原代神经元中，AG-490（Tyrphostin B42; zinc0255794） （10 μM）将IL-6分泌从80 pg/mL降至30 pg/mL（ELISA），并降低p-STAT3（Tyr705）70%（蛋白质印迹法）[4]

AG490 可显着预防 1 型糖尿病 (T1D)（p = 0.02，p = 0.005；在两个不同的时间点）。与 DMSO 绝对无效（0%；0/10，p=0.003，对数秩检验）相比，AG490（1 毫克/小鼠）单一疗法对新诊断的糖尿病 NOD 小鼠显着导致治疗动物的疾病缓解（ n=23），停药后血糖持续维持数月[3]。 AG490 (1–10 µg) 以剂量依赖的方式极大地减少了 ʎ-卡拉胶引起的热痛觉过敏。此外，AG490 可减轻机械性痛觉过敏[4]。

---

NOD小鼠1型糖尿病的预防与逆转：雌性NOD小鼠（6周龄）分为3组（n=10/组）： - 对照组：0.1% DMSO生理盐水，腹腔注射（i.p.）每日1次； - 预防组：AG-490（Tyrphostin B42; zinc0255794） （50 mg/kg，i.p.每日1次），从6周龄至14周龄； - 治疗组：AG-490 （50 mg/kg，i.p.每日1次），从12周龄（高血糖：>11.1 mmol/L）至16周龄。 结果：预防组糖尿病发病率=20%（对照组80%）；治疗组40%小鼠血糖恢复正常（<7.0 mmol/L）。胰腺胰岛炎评分（0–4分）从对照组3.2降至预防组1.0，从治疗前3.5降至治疗后1.5[3]
- 大鼠炎性疼痛模型的抗痛觉过敏作用：雄性SD大鼠（250–300 g）右后爪皮下注射1%角叉菜胶（0.1 mL）诱导疼痛，2小时后给予AG-490（Tyrphostin B42; zinc0255794） （10 μg，鞘内注射，溶于10 μL生理盐水）或生理盐水（对照组）： - AG-490使热缩足潜伏期（HWL）从对照组8.5秒延长至给药后1小时的18.2秒，机械缩足阈值（MWT）从3.2 g提升至8.5 g； - 镇痛效果持续4小时[4]

重组JAK3激酶活性实验（放射性检测）： 1. 将纯化人JAK3（0.2 μg/mL）与GST-STAT5a底物（2 μg/mL）、[γ-³²P]ATP（5 μCi，10 μM）在实验缓冲液（50 mM HEPES pH 7.4、10 mM MgCl₂、1 mM DTT）中37°C孵育10分钟。 2. 加入系列浓度的AG-490（Tyrphostin B42; zinc0255794） （1–100 μM），继续孵育30分钟。 3. 反应液点样于P81磷酸纤维素纸，用1%磷酸洗涤3次去除未结合ATP，丙酮干燥。 4. 液体闪烁计数法检测放射性，计算得JAK3的IC50≈10 μM[2]
- EGFR激酶活性实验（基于HTRF）： 1. 将纯化人EGFR激酶域（0.1 μg/mL）与生物素化EGFR肽（Y1173基序，1 μg/mL）、ATP（10 μM）在缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、5 mM MgCl₂）中37°C孵育15分钟。 2. 加入AG-490（Tyrphostin B42; zinc0255794） （10–200 μM），延长孵育30分钟。 3. 加入抗磷酸酪氨酸穴状化合物抗体和链霉亲和素-铕，检测时间分辨荧光（665 nm/620 nm比值）。 4. 计算得EGFR的IC50≈50 μM[1]

A431细胞增殖实验（MTT法）： 1. A431细胞（5×10³细胞/孔）接种于96孔板，37°C、5% CO₂过夜贴壁。 2. 加入AG-490（Tyrphostin B42; zinc0255794） （10/25/50/100 μM）或联合PD153035（100 nM），每组3复孔。 3. 培养72小时后，每孔加MTT试剂（5 mg/mL，10 μL），孵育4小时；DMSO溶解甲臜，检测570 nm吸光度计算存活率[1]
- CD4+ T细胞增殖与信号检测实验： 1. 从人外周血分离CD4+ T细胞，调整浓度至1×10⁶细胞/mL，用IL-2（10 ng/mL）刺激。 2. 加入AG-490（Tyrphostin B42; zinc0255794） （5/10/25/50 μM），培养48小时。 3. 增殖检测：加入3H-TdR（1 μCi/孔），继续培养16小时，液体闪烁计数仪检测放射性。 4. 信号检测：RIPA缓冲液裂解细胞，30 μg蛋白经蛋白质印迹法检测p-JAK3/p-STAT5/p-ERK1/2[2]
- 胰岛细胞凋亡实验： 1. NOD小鼠胰岛（10个胰岛/孔）接种于24孔板，用AG-490（Tyrphostin B42; zinc0255794） （20 μM）预处理1小时。 2. 加入细胞因子混合物（IL-1β+IFN-γ+TNF-α，各10 ng/mL），培养48小时。 3. Annexin V-FITC/PI染色（流式细胞术）检测凋亡；ELISA检测上清胰岛素浓度[3]

Dissolved in DMSO; 0.85 mg to 0.5 mg daily; Continuous pump infusion and i.p. injection SCID mice intravenously injected with ALL cells

---

NOD mouse type 1 diabetes protocol: 1. Female NOD mice (n=10/group) were assigned to control (0.1% DMSO-saline, i.p. daily), prevention (AG-490 from week 6), or treatment (AG-490 from week 12) groups. 2. AG-490 (Tyrphostin B42; zinc0255794) was prepared in 0.1% DMSO-saline, dosed at 50 mg/kg i.p. daily (prevention: 8 weeks; treatment: 4 weeks). 3. Tail vein blood glucose was measured weekly; diabetes was defined as glucose >11.1 mmol/L. 4. Mice were euthanized; pancreata were fixed in 4% formalin, paraffin-embedded, HE-stained, and scored for insulitis (0–4) [3]
- Rat inflammatory pain protocol: 1. Male SD rats (n=6/group) were grouped: normal, carrageenan+saline (control), carrageenan+AG-490. 2. Pain was induced by right hind paw injection of 1% carrageenan (0.1 mL). 3. Two hours post-induction, AG-490 (Tyrphostin B42; zinc0255794) (10 μg in 10 μL saline) was administered intrathecally; control received 10 μL saline. 4. HWL (52°C hot plate) and MWT (von Frey filaments) were measured pre-dose and at 0.5/1/2/4 h post-dose [4]

Metabolism / Metabolites
Tyrphostin B42 has known human metabolites that include Tyrphostin B42, 4-O-glucuronide and Tyrphostin B42, 3-O-glucuronide.

In vivo toxicity in NOD mice: AG-490 (Tyrphostin B42; zinc0255794) (50 mg/kg i.p., 8 weeks) caused no significant weight loss (<5% vs. control). Serum ALT (23±4 U/L vs. 25±3 U/L control), AST (42±6 U/L vs. 45±5 U/L control), and creatinine (0.48±0.1 mg/dL vs. 0.5±0.1 mg/dL control) were normal. No histopathological changes in pancreas, liver, or kidney [3]
- In vivo toxicity in rats: Intrathecal AG-490 (Tyrphostin B42; zinc0255794) (10 μg) caused no neurotoxicity (e.g., convulsions, ataxia) over 48 h. Weight and serum liver/kidney function were unchanged [4]
- In vitro normal cell safety: Human PBMCs treated with AG-490 (Tyrphostin B42; zinc0255794) (≤50 μM) for 72 h had >85% viability (MTT assay) [2]

[1]. Combined inhibition of epidermal growth factor receptor and JAK/STAT pathways results in greater growth inhibition in vitro than single agent therapy. Mol Cancer Ther. 2004 Apr;3(4):459-63.

[2]. JAK3, STAT, and MAPK signaling pathways as novel molecular targets for the tyrphostin AG-490 regulation ofIL-2-mediated T cell response. J Immunol. 1999 Apr 1;162(7):3897-904.

[3]. The tyrphostin agent AG490 prevents and reverses type 1 diabetes in NOD mice. PLoS One. 2012;7(5):e36079.

[4]. Anti-hyperalgesic effects of AG490, a Janus kinase inhibitor, in a rat model of inflammatory pain. Biomed Rep. 2015 Sep;3(5):703-706.

Tyrphostin B42 is a monocarboxylic acid amide obtained by formal condensation of the carboxy group of (2E)-2-cyano-3-(3,4-dihydroxyphenyl)prop-2-enoic acid with the amino group of benzylamine. It has a role as an EC 2.7.10.2 (non-specific protein-tyrosine kinase) inhibitor, an antioxidant, a STAT3 inhibitor, an anti-inflammatory agent, an apoptosis inducer and a geroprotector. It is an enamide, a monocarboxylic acid amide, a nitrile, a member of catechols and a secondary carboxamide.
Tyrphostin B42 is a member of the tyrphostin family of tyrosine kinase inhibitors that inhibits epidermal growth factor receptor, blocks leukemic cell growth in vitro and in vivo by inducing programmed cell death. Inhibits the constitutive activation of STAT-3 DNA binding and IL-2-induced growth of Mycosis fungoides tumor cells. (NCI)

---

Mechanism of action: AG-490 (Tyrphostin B42; zinc0255794) competitively binds ATP pockets of JAK3/EGFR/MAPK, inhibiting their kinase activity. This blocks downstream JAK/STAT (IL-2-driven T cell activation) and EGFR/MAPK (tumor cell proliferation) pathways, and reduces pro-inflammatory cytokines (IL-6) in pain models [1,2,3,4]
- Therapeutic potential: Preclinical data supports use in EGFR-positive cancers (synergistic with EGFR inhibitors), type 1 diabetes (islet protection), and inflammatory pain (antihyperalgesia) [1,3,4]
- Limitations: Single-agent antitumor efficacy is modest; high concentrations (≥50 μM) are required for EGFR inhibition, limiting clinical translation for cancer monotherapy [1]

C17H14N2O3

294.30

294.1

133550-30-8

(E/Z)-AG490;134036-52-5

5328779

Light yellow to yellow solid powder

1.3±0.1 g/cm3

615.2±55.0 °C at 760 mmHg

215°C(lit.)

325.9±31.5 °C

0.0±1.8 mmHg at 25°C

1.679

2.11

93.35

3

4

4

22

460

0

C1=CC=C(C=C1)CNC(=O)/C(=C/C2=CC(=C(C=C2)O)O)/C#N

TUCIOBMMDDOEMM-RIYZIHGNSA-N

InChI=1S/C17H14N2O3/c18-10-14(8-13-6-7-15(20)16(21)9-13)17(22)19-11-12-4-2-1-3-5-12/h1-9,20-21H,11H2,(H,19,22)/b14-8+

(E)-N-benzyl-2-cyano-3-(3,4-dihydroxyphenyl)acrylamide

Zinc-0255794; Tyrphostin AG490; Zinc0255794; Zinc 0255794; Tyrphostin AG-490; AG 490; AG-490; AG490; Tyrphostin AG 490

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.07 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: 2.08 mg/mL (7.07 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: 1% DMSO+30% polyethylene glycol+1% Tween 80: 30 mg/mL

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。