p110α (IC50 = 5 nM); p110γ (IC50 = 250 nM); p110δ (IC50 = 290 nM); p110β (IC50 = 1200 nM); p110α-H1047R (IC50 = 4 nM); p110α-E545K (IC50 = 4 nM)

我们研究了阻断ATP位点的新型特异性PI3Kα抑制剂BYL719对骨肉瘤和骨细胞的治疗价值。在人和小鼠骨肉瘤细胞中评估了BYL719对增殖、凋亡和细胞周期的体外影响。使用人间充质干细胞（hMSC）和人CD14+破骨细胞前体测定其对骨细胞的影响。使用两种不同的骨肉瘤小鼠临床前模型来分析BYL719的体内生物活性。BYL719通过阻断G0/G1期细胞周期来降低细胞增殖，对HOS和MOS-J肿瘤细胞的凋亡细胞死亡没有显著影响。BYL719抑制细胞迁移，因此可以被认为是骨肉瘤的细胞生长抑制剂。[4]

---

BYL719 抑制携带 PIK3CA 突变的乳腺癌细胞系的增殖，与抑制 PI3K/Akt 通路的各种下游信号成分相关。

---

BYL719/Alpelisib抑制携带PIK3CA突变的乳腺癌症细胞系的增殖，与抑制PI3K/Akt途径的各种下游信号成分有关。

---

NVP-BYL719在体外有效且选择性地抑制PI3Kα[3]
PI3Kα、β、δ和γ酶具有显著的氨基酸残基同源性，在催化激酶结构域中具有特别高的保守性。基于其结合模式，2-氨基噻唑支架被选为开发强效和选择性PI3K抑制剂的起点，这表明有可能使用氨基上的取代基与ATP袋入口处的非共价氨基酸发生相互作用（21）。因此，对关键部分的系统修饰和药物样性质的优化导致了NVP-BYL719的鉴定。

如参考文献18所述，在生化测定中，NVP-BYL719/Alpelisib对野生型PI3Kα（IC50=4.6 nmol/L）的抑制作用比PI3Kδ（IC50=290 nmol/L”）和PI3Kγ（IC50=250 nmol/L“）亚型更强，对PI3Kβ的活性显著降低（IC50=1156 nmol/L。此外，我们发现NVP-BYL719能有效抑制2种最常见的PIK3CA体细胞突变（H1047R，E545K；IC50≈4 nmol/L）。该化合物对III类家族成员Vps34和相关的IV类PIKK蛋白激酶mTOR、DNA-PK和ATR也缺乏活性，对不同的脂质激酶PIK4β的效力明显较低（表1）。 在体外激酶测定面板中进一步检查了NVP-BYL719的激酶选择性特征。在所有测试的激酶中（不包括I类PI3K和PI4Kβ），与PI3Kα相比，它们各自的IC50或Kd值至少高出50倍（补充图1，补充表1-4）。

为了确定NVP-BYL719在细胞检测系统中的效力和选择性，测试了使用活化形式的PI3Kα、PI3Kβ或PI3Kδ转化的Rat1细胞，并使用RPPA定量Akt的磷酸化（S473）作为PI3K途径活性的标志物（17）。如参考文献18所述，NVP-BYL719能有效抑制PI3Kα转化细胞中的Akt磷酸化（IC50=74±15 nmol/L），并在PI3Kβ或PI3Kδ亚型转化细胞中显示出显著降低的抑制活性（与PI3Kα相比≥15倍）。在这里，我们报告了NVP-BYL719全剂量反应曲线及其在Rat1细胞中S473P-Akt的IC80值（补充图S2）。此外，与阳性对照RAD001相比，用NVP-BYL719治疗TSC1缺失的MEF细胞与RPS6磷酸化的减少无关（S235/236）（IC50值<0.5 nmol/L），表明NVP-BYL719不会抑制mTORC1（补充图S3A和S3B）。同样，NVP-BYL719似乎不会干扰在ATM和ATR依赖性检测系统中确定的参与DNA损伤修复（ATM和ATR）过程的PIKK（补充图S3C和S3D）。这些数据共同有力地支持了NVP-BYL719具有选择性PI3Kα抑制剂的相关体外特性的观点。

---

PIK3CA突变细胞系对NVP-BYL719具有选择性敏感性[3]
上述方法有助于确定哪些肿瘤对PI3Kα抑制有反应。当人们考虑哪种治疗方式是最具选择性的，因此在特定的癌症基因型中可能具有最佳的治疗指数时，会提出一个独立的问题。在这里，我们使用一种新的分析方法来定义小分子抑制剂在CCLE中的选择性指数，比较了不同化合物处理（约1000）的选择性特征，包括PIK3CA突变体与野生型细胞系中的200多种作用机制，并根据其在这两组中的作用程度对化合物进行了排名（图6）。与野生型细胞系群体和pan-PI3K抑制剂相比，NVP-BYL719与3种类似物一起在PIK3CA突变体中显示出显著的选择性功效。相反，与突变体相比，MEK抑制剂在PIK3CA野生型细胞系中的选择性更高。

---

BYL719/Alpelisib抑制骨肉瘤细胞增殖[4]
如图1b所示，BYL719（图1a中的化学结构）迅速抑制了所有评估细胞系中P-AKT和P-mTOR的水平，证实了BYL719对骨肉瘤细胞的功能活性（图1b）。然后进行XTT测定，分析BYL719对骨肉瘤细胞生长的影响（人：MG63，HOS-MNG；小鼠：POS-1，MOS-J和大鼠：OSRGA）（图1c）。治疗72小时后，BYL719以剂量依赖的方式显著抑制了所有骨肉瘤细胞系的细胞生长（图1c和1d），在72小时时IC50范围为6至15µM，IC90范围为24至42µM（图1e）。为了确定BYL719诱导的细胞存活率降低是否与细胞周期改变有关，在添加BYL719后进行了细胞DNA含量的流式细胞术（支持信息数据3）。结果显示，BYL719显著改变了细胞周期阶段的分布，更具体地说，MG-63中G0/G1期的细胞数量从57%增加到70%，HOS中从44%增加到73%（支持信息数据3A），MOS-J中从45-70%增加到58-70%，POS-1细胞中从58%增加到70%（支持信息数据3B）。这些观察结果伴随着S-G2/M期细胞的减少。在大鼠骨肉瘤细胞系OSRGA上获得了类似的结果（支持信息数据4）。

---

BYL719/Alpelisib作为骨肉瘤细胞的细胞生长抑制剂[4]
为了确定这些影响是否是由于抑制细胞增殖和/或诱导细胞死亡，在台盼蓝排斥染色后通过手动计数活细胞来评估BYL719的影响。BYL719以剂量和时间依赖的方式显著减少活HOS和MOS-J细胞的数量，而不影响死细胞的数量。这支持了BYL719在骨肉瘤细胞中具有细胞生长抑制活性的观点（分别为图1d和支持信息数据5A）。此外，BYL719未能诱导凋亡，如HOS和MOS-J细胞中评估的caspase-3/7活性所示（分别为图1e，左图和支持信息5B），并通过BYL719治疗HOS骨肉瘤细胞后没有切割的PARP表达得到证实（图1e，右图）。MG-63、POS-1（数据未显示）和OSRGA细胞系（支持信息数据4D）也获得了类似的数据。还对HOS和MOS-J细胞进行了迁移测定，以确定BYL719对细胞运动的影响，并证明BYL719降低了细胞运动（支持信息数据6A和B）。然后我们进行了回收分析。令人惊讶的是，处理过的细胞能够以与对照条件相同的方式恢复，这表明BYL719仅在药物存在时具有细胞生长抑制作用（图4c）。所有这些数据表明，BYL719在骨肉瘤细胞中具有细胞生长抑制活性。

在啮齿类动物的 PIK3CA 突变异种移植模型中，BYL719（>270 mg/d）表现出统计学上显着的剂量依赖性抗肿瘤功效。 BYL719 的半衰期较短，为 8.5 小时，Cmax 个体间差异较低，在人体中暴露剂量在 30 mg/d 至 450 mg/d 之间按比例增加。 BYL719（270 mg/d）临床疗效的第一个迹象包括 1 名 ER+ 乳腺癌患者确认有部分缓解，在评估的 17 名患者中，有 8 名患者出现显着 PET 缓解 (PMR) 和/或肿瘤缩小。

---

NVP-BYL719/Alpelisib在PI3Kα驱动的肿瘤中显示出强有力的PK/PD/疗效关系[3]
为了检测NVP-BYL719在PI3Kα依赖性体内模型中抑制PI3K/Akt通路的能力，在Rat1-myr-p110α机制肿瘤携带小鼠模型中评估了其药代动力学/药效学（PK/PD）关系。每只雌性无胸腺小鼠接受单次或重复剂量的NVP-BYL719（12.5、25或50mg/kg，口服），并在不同时间点收集血浆和肿瘤样本进行PK和PD分析。在这里，NVP-BYL719治疗与PI3K/Akt通路的剂量和时间依赖性抑制有关，这与肿瘤和血浆中的时间依赖性药物暴露显著平行（图1A）。

为了确定剂量和时间依赖性途径抑制是否与抗肿瘤活性有关，Rat1-myr-p110α荷瘤裸鼠每天口服该化合物，连续8天（图1B）。12.5、25和50mg/kg的治疗耐受良好，并产生了剂量依赖性和统计学上显著的抗肿瘤作用，T/C分别为14.1%和9.6%和65.2%。为了评估体内PI3K的相对选择性，我们在相应的Rate1-myr-p110δ模型中进一步测试了NVP-BYL719。当每天口服50mg/kg的最佳剂量进行测试时，NVP-BYL719仅显示出适度的抗肿瘤作用（T/C为30%；图1C）。

接下来，我们试图更好地了解抗肿瘤疗效所需的PI3Kα抑制程度。为此，我们首先通过使用RPPA测量Akt磷酸化的程度以及来自多个动物和多个时间点的匹配样本中的特定肿瘤药物浓度，确定了给予50%（体内IC50）和80%（体内IC80）S473P-Akt抑制的肿瘤浓度（分别为0.4和4μmol/L）（图1D）。有趣的是，当校正小鼠体内NVP-BYL719的血浆蛋白结合率（PPB=91.2%）时，体内IC50（35 nmol/L）和IC80（352 nmol/L）值分别大致接近74和301 nmol/L的体外细胞IC50和IC80值。接下来，我们试图确定暴露（通过体内IC80的时间测量）与抗肿瘤疗效之间的关系。在这里，我们发现IC80的抗肿瘤疗效幅度和药物暴露时间之间几乎呈线性关系（R2=0.80，P<0.001，n=11；图1E）。从这种关系来看，NVP-BYL719诱导肿瘤停滞需要在至少29%的给药间隔内对Akt磷酸化进行80%的抑制，并且这种途径抑制水平必须在至少45%的给药时间间隔内持续，才能在携带Rat1-myr-p110α肿瘤的裸小鼠中产生30%的肿瘤消退。相比之下，在Rat1-myr-p110δ荷瘤裸鼠中，NVP-BYL719暴露水平没有达到Akt磷酸化的80%抑制率（体内IC80=29μmol/L；小鼠IC80=2552μmol/L中校正了NVP-BYL719血浆蛋白结合），这很可能解释了观察到的适度抗肿瘤作用，并与化合物对p110δ的适度活性相一致。为了排除我们的发现可能是Rat1小鼠肿瘤模型特异性的可能性，将NVP-BYL719以不同剂量在体内给药于裸鼠和携带不同范围癌症细胞系来源的肿瘤异种移植物的裸鼠。在这里，我们还发现IC80的抗肿瘤疗效幅度与药物暴露持续时间之间几乎呈线性关系（R2=0.77，P<0.001，n=27，补充图S4和表S5）。这些数据表明，NVP-BYL719需要在给药间隔的一小部分时间内持续抑制PI3K/Akt通路，才能产生强大的抗肿瘤作用。

---

与泛I级抑制相比，NVP-BYL719/Alpelisib显示出更高的安全性[3]
抗PI3K治疗的预期靶向副作用是胰岛素抵抗和高血糖。为了评估NVP-BYL719是否扰乱葡萄糖稳态，测量了血浆胰岛素和血糖水平，并将其与来自多个动物和多个时间点的匹配样本中的血浆药物浓度进行了比较。这里的数据显示，胰岛素血浆水平与NVP-BYL719血浆浓度成比例增加，而血糖水平在NVP-BYL719高达20μmol/L时保持接近正常水平（图2A和B）。然而，当浓度超过20μmol/L时，我们观察到化合物浓度依赖性的葡萄糖增加，尽管胰岛素血浆水平升高，但仍导致高血糖。因此，我们将20μmol/L定义为小鼠NVP-BYL719相关的高血糖阈值。

---

PIK3CA的基因改变预测NVP-BYL719/Alpelisib体内疗效[3]
接下来，将NVP-BYL719以50 mg/kg的剂量（每天，p.o.）体内给药于携带不同遗传背景的癌症细胞系衍生的肿瘤异种移植物的小鼠（图5A和补充表S5），包括先前描述的决策树的预测特征。大多数携带PIK3CA突变或扩增的肿瘤模型对NVP-BYL719有反应（反应定义为T/C<20%）。相比之下，在大多数携带PTEN突变或PIK3CA野生型的肿瘤模型中，我们观察到疾病进展。在体内，预测因子也显著富集了应答者（阳性预测值=89%）。这些数据表明，从CCLE的体外分析和分析中得出的NVP-BYL719预测特征似乎与预测体内反应有关（P=0.01，Fisher检验）。

---

BYL719/Alpelisib在两种骨肉瘤小鼠模型中同时减少肿瘤生长和肿瘤异位骨形成，并略微调节全身骨参数[4]
接下来，我们测试了BYL719在骨肉瘤小鼠MOS-J同源模型中的作用。与赋形剂组相比，BYL719以剂量依赖的方式显著减少了肿瘤体积（图2a；p<0.01和p<0.001，分别为12.5和50mg/kg BYL719）。事实上，平均肿瘤体积从对照组的1747 mm3降至50 mg/kg BYL719治疗组的938 mm3（图2a，p < 0.001). 此外，对每只小鼠的肿瘤胫骨和对侧胫骨（正常骨）进行µCT分析。胫骨肿瘤的显微CT分析显示肿瘤细胞沉积的异位骨形成，并清楚地表明BYL719显著减少了这种肿瘤异位骨（图2b，左图）。通过测量钙化组织参数，证实了BYL719的益处（图2b，右图）。50mg/kg BYL719显著降低了骨体积（BV），7.08±0.6至4.37±0.21 mm3（p<0.001），骨表面（BS）为99.65±5.74 mm2至63.91±2.3 mm2（p<0.001）。研究了对侧胫骨的组织形态计量学参数，以确定BYL719对无任何肿瘤的正常骨重塑的系统影响（支持信息数据7）。50 mg/（kg·day-1）的BYL719对任何研究的骨小梁参数都没有影响（支持信息数据7）。然而，它显著降低了几个皮质骨参数，包括TV（组织体积）、BV、BV/TV、BS/TV和CTh（p<0.01）（支持信息数据7）。组织学研究显示，BYL719降低了TRAP+破骨细胞的表面，而不影响osterix+细胞的数量（图3a和3b）。此外，BYL719的治疗效果因KI67+细胞数量减少（图3c）和肿瘤血管化减少（图3d）而增强。

基于这些结果，在骨肉瘤异种模型中分析了BYL719的治疗潜力。患有人HOS肿瘤的裸小鼠用50mg/（kg day-1）的BYL719治疗。与MOS-J模型一样，BYL719在治疗期结束时显著减少了肿瘤体积，从对照组的1445 mm3减少到治疗组的650 mm3（图2c；p < 0.01). 这些结果证实了BYL719在第二种临床前骨肉瘤模型中的抑制作用。胫骨肿瘤的显微CT分析显示，BYL719减少了异位骨基质的沉积，骨参数值从64.91±5.2降至36.4±0.70 mm2（p<0.001），从6.2±0.33降至4.0±0.08 mm3（p<0.001） < 0.001), 分别适用于BS和BV（图2d，右侧面板）。通过对侧胫骨的µCT评估BYL719对正常骨的影响，没有任何肿瘤，证实了同基因MOS-J模型中获得的结果（支持信息数据8）。MicroCT证实了BYL719对C57Bl5J小鼠皮质骨的影响。

---

BYL719/Alpelisib与常规化疗药物联合使用的治疗益处[4]
由于BYL719在骨肉瘤细胞中显示出抑制细胞生长的作用，我们随后评估了将BYL719与异环磷酰胺（用于体外实验的mafosfamide）联合治疗骨肉瘤的疗效，异环磷酰胺是一种常规化疗药物。为了确定这种效应是相加的还是协同的，根据Chou和Talalay的中值效应原理，进行了恒定比率设计的剂量依赖效应和组合指数（CI）值的计算。图4a和4b显示了剂量-反应曲线（联合治疗、BYL719或镁磷酰胺单药治疗）和联合指数图，表明BYL719协同增强了镁磷酰胺对肿瘤细胞生长的影响（图4a和4b）。然后，我们进行了集落形成试验，以评估BYL719±mafosfamide治疗2天后的恢复能力。虽然BYL719没有改变菌落数量，但与对照组相比，镁磷酰胺减少了菌落形成（图4c）。然而，与单独使用每种药物相比，BYL719与镁磷酰胺的组合显著诱导了集落形成的最大减少（图4c）。此外，BYL719增强了mafosfamide诱导细胞凋亡的作用，如切割的PARP表达的增加所示（图4d）。

然后，我们研究了BYL719（50mg/（kg day−1））与次优剂量的异环磷酰胺（IFOS，30mg/（kg day-1），持续3天）联合使用的效果，如前所述的同源小鼠模型（图4e）。正如预期的那样，与对照组相比，50mg/kg BYL719对肿瘤发展具有显著的抑制作用。相比之下，与单独使用IFOS（1746 mm3）或单独使用BYL719（1421 mm3）相比，将次优剂量的IFOS与50 mg/（kg day-1）的BYL719联合治疗显著降低了肿瘤生长（1011 mm3）（图4e）。肿瘤骨的MicroCT分析显示，联合治疗对BYL719的治疗反应没有影响，甚至对形成的异位骨也没有观察到协同或相加作用（图4f和4g）。这些结果强烈表明，将BYL719与常规化疗药物联合使用具有治疗意义，可以显著延缓肿瘤生长和肿瘤异位骨形成。

为了评估Alpelisib（NVP-BYL719）在基于细胞的系统中的亚型特异性效力，如参考文献17所述，在Rat1成纤维细胞中表达了每种PI3K IA类亚型的N-末端肉豆蔻酰化形式。生成了含有人p110α、p110β和p110δ的逆转录病毒表达质粒pBabePuro，其具有N-末端肉豆蔻酰化（myr）信号和HA标签。在含有4μg/mL嘌呤霉素的培养基中选择成功感染的Rat1细胞，扩增并表征p110亚型的表达（2006年）。肉豆蔻酰化蛋白的转基因表达通过磷酸化Akt水平的增加得到证实。D.Kwiatkowski博士于2007年获得了mTORC1本构激活的TSC1-/-零MEFs机理模型。[3]

---

Alpelisib (NVP-BYL719) 有效抑制 2 种最常见的 PIK3CA 体细胞突变（H1047R、E545K；IC50~4 nM）。 Alpelisib (NVP-BYL719) 有效抑制 PI3Kα 转化细胞中的 Akt 磷酸化 (IC50=74±15 nM)，并在 PI3Kβ 或 PI3Kδ 异构体转化细胞中显示出显着降低的抑制活性（与 PI3Kα 相比≥15 倍）。

细胞生长和存活率，克隆形成试验[4]
将2000个肿瘤细胞接种到96孔板中，第二天，用Alpelisib（BLY-719；Piqray；NVP-BYL719）（1-50µmol/L）处理细胞72小时。使用3′[1-（苯氨基羰基）-3,4-四唑鎓]-双（4-甲氧基-6-硝基）苯磺酸水合物的比色测定法测定细胞生长/存活率。在490 nm处读取吸光度。细胞活力也通过台盼蓝排斥试验测定；在处理24和48小时后手动计数活细胞和非活细胞。对于克隆形成试验，肿瘤细胞在96孔板中用或不用25µM BYL预处理6小时，然后用/不用5µg/mL甲氟霜胺处理48小时。然后，在6孔板中分裂肿瘤细胞，500个细胞/孔，不治疗7天。结晶紫染色后计数菌落数。

---

半胱天冬酶活性[4]
将20万个细胞接种在6孔板中，与或不与Alpelisib（BLY-719；Piqray；NVP-BYL719）一起培养3-48小时（25µM）。根据制造商的建议，使用CaspACE检测系统试剂盒评估Caspase活性。结果以任意单位表示，根据BCA定量的蛋白质浓度进行校正。将用1µg/mL星孢菌素（Invitrogen）处理过夜的细胞裂解物用作阳性对照。

---

细胞周期分析[4]
将亚流培养物与或不与25µM的Alpelisib（BLY-719；Piqray；NVP-BYL719）一起孵育18小时，胰蛋白酶化，洗涤，并在含有0.12%Triton X-100、0.12 mM EDTA和100µg/mL无DNA酶核糖核酸酶A的PBS中孵育。然后，加入50µg/mL碘化丙啶20分钟。通过流式细胞术测定细胞周期分布，并通过DNA细胞周期分析软件进行分析。

---

蛋白质印迹[4]
用25µM的Alpelisib（BLY-719；Piqray；NVP-BYL719）处理20万个细胞3-24小时，然后在RIPA缓冲液（150 mmol/L NaCl，5%Tris，pH 7.4，1%NP-40，0.25%脱氧胆酸钠，1 mmol/L Na3VO4，0.5 mmol/L PMSF，10 mg/mL亮肽，10 mg/mL抑肽酶）中裂解。使用BCA试剂盒测定的总细胞裂解物（40μg）在10%SDS-PAGE上运行，并电泳转移到Immobilon-P膜上。用PBS、0.05%吐温20和3%BSA中的抗体（支持信息数据1）印迹膜。使用增强化学发光系统观察抗体结合。

---

Alpelisib (0–1000 nM) 以逐渐升高的浓度作用于细胞，持续 72 小时。使用 CyQuant 测定法测量细胞活力。

雌性无胸腺裸鼠
40 mg/kg
og

---

异种移植研究[3]
将CW2细胞重悬于无血清RPMI培养基和生长因子减少的Matrigel（1:1比例）中，并皮下注射到4-6周龄雌性无胸腺裸鼠右侧腹部。当平均肿瘤体积达到约200 mm3时，小鼠每日分别接受载体（0.5%甲基纤维素+0.4%吐温80，口胃灌注）、奈拉替尼（40 mg/kg；口胃灌注）、阿培利西布（30 mg/kg；口胃灌注）或奈拉替尼+阿培利西布。在我们之前的研究中，我们发现奈拉替尼会导致厌食和中度体重下降。为避免这些毒性，所有小鼠除常规饲料外，均预防性补充了 DietGel 76A（Clear H2O）。每周两次使用游标卡尺测量肿瘤直径，并使用以下公式计算肿瘤体积：体积 = 宽度² × 长度/2。

---

细胞系来源的肿瘤模型。[3]
所有活体实验和疗效研究均按先前所述进行。将 3 × 10⁶ 至 1 × 10⁷ 个细胞或植入约 50 mg 的肿瘤碎片，以皮下或原位方式在裸鼠或裸鼠 Rowett 大鼠体内培养肿瘤异种移植瘤。荷瘤小鼠分别接受载体对照、alpelisib/NVP-BYL719或NVP-BKM120（口服，每日一次）治疗，剂量如所示。

---

患者来源肿瘤模型。[3]
通过将未经治疗的癌症患者的手术切除肿瘤组织移植到裸鼠体内，建立了患者来源异种移植（PDX）模型。所有样本均匿名化，并在获得知情同意以及组织提供方和诺华公司机构审查委员会的批准后获得。所有PDX模型均进行了组织学表征，外部诊断由内部病理学家独立确认，并在小鼠体内连续传代后，使用各种技术平台进行基因分型。PIK3CA突变通过RNA和DNA深度测序技术进行检测，PIK3CA扩增通过SNP 6.0芯片进行检测。在疗效研究中，当皮下植入的肿瘤体积达到约 200 mm³ 时，将荷瘤动物纳入研究，并每日以 50 mg/kg 的剂量给予 alpelisib/NVP-BYL719 治疗。疗效以治疗末日肿瘤体积相对于第 0 天（治疗开始日）的百分比变化来表示。

---

体内实验所用制剂：alpelisib/NVP-BYL719 的配制方法如下：将化合物溶解于 N-甲基吡咯烷酮、聚乙二醇 300、Solutol HS15 和水（10%:30%:20%:40%，v/v） 溶液中，或配制成与 NVP-BKM120 类似的悬浮液，悬浮液配制方法如下：[3]

吸收、分布和排泄
口服2小时后，阿培利西布的血浆峰浓度为1320±912ng/mL。阿培利西布的AUC_last为11,100±3760h ng/mL，AUC_NF为11,100±3770h ng/mL。大量高脂餐可使AUC增加73%，C_max增加84%；少量低脂餐可使AUC增加77%，C_max增加145%。
口服剂量的36%以原药形式经粪便排出，32%以主要代谢物BZG791的形式经粪便排出。口服剂量的约2%以原药形式经尿液排出，7.1%以主要代谢物BZG791的形式排出。口服剂量中，81%经粪便排出，14%经尿液排出。
稳态表观分布容积为114升。
平均表观口服清除率为39.0升/小时。进食状态下的预测清除率为9.2升/小时。

---

代谢/代谢物
Alpelisib主要通过水解反应代谢生成主要代谢物。它也通过CYP3A4代谢。Alpelisib的完整代谢途径尚未完全确定，但已提出一系列反应。主要的代谢反应是Alpelisib上的氨基被羟基取代，生成一种称为M4或BZG791的代谢物。 Alpelisib 也可被葡萄糖醛酸化形成 M1 和 M12 代谢物。

---

生物半衰期
Alpelisib 的平均半衰期为 8 至 9 小时。

肝毒性
在alpelisib上市前针对癌症患者的临床试验中，肝功能异常较为常见，但通常是短暂的、无症状的，且严重程度为轻度至中度。接受alpelisib和氟维司群治疗的患者中，高达44%出现不同程度的ALT升高，但仅有3%至4%的患者ALT超过正常值上限（ULN）的5倍。转氨酶升高很少需要调整剂量或中断治疗，而仅服用氟维司群而未服用alpelisib的患者中，转氨酶升高的发生率也略低。在这些入组患者不足1000例的试验中，有数例报告显示血清转氨酶显著升高，导致患者提前停药。然而，这些报告并未提供肝损伤的性质和临床特征，也没有出现临床上明显的肝损伤病例。接受阿培利西布治疗的患者中，皮疹也很常见，通常会给予患者预防性抗组胺药，这似乎可以减少皮疹的发生，并减轻皮疹的程度。然而，中度至重度皮疹仍然可能发生，部分患者还会伴有嗜酸性粒细胞增多症和全身症状的药物反应（DRESS）综合征，其中一定程度的肝损伤（通常无黄疸且无症状）也是其表现之一。
可能性评分：E（未经证实，但怀疑是临床上明显的肝损伤的罕见原因）。

---

妊娠和哺乳期用药
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无阿培利西布在哺乳期用药的信息。制造商建议在接受阿培利西布治疗期间以及末次给药后1周内停止母乳喂养。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

---

蛋白结合率
阿培利西布的蛋白结合率为89%。

[1]. Co-occurring gain-of-function mutations in HER2 and HER3 modulate HER2/HER3 activation, oncogenesis, and HER2 inhibitor sensitivity. Cancer Cell. 2021 Aug 9;39(8):1099-1114.e8.

[2]. Discovery of NVP-BYL719 a potent and selective phosphatidylinositol-3 kinase alpha inhibitor selected for clinical evaluation. Bioorg Med Chem Lett. 2013 Jul 1;23(13):3741-8.

[3]. Characterization of the novel and specific PI3Kα inhibitor NVP-BYL719 and development of the patient stratification strategy for clinical trials. Mol Cancer Ther. 2014 May;13(5):1117-29.

[4]. BYL719, a new α-specific PI3K inhibitor: single administration and in combination with conventional chemotherapy for the treatment of osteosarcoma. Int J Cancer. 2015 Feb 15;136(4):784-96.

[5]. Targeted therapy in patients with PIK3CA-related overgrowth syndrome. Nature. 2018 Jun;558(7711):540-546.

[6]. Inhibition of BTF3 sensitizes luminal breast cancer cells to PI3Kα inhibition through the transcriptional regulation of ERα. Cancer Lett. 2018 Oct 10;440-441:54-63.

药效学
Alpelisib 不会延长 QTcF 间期。服用 Alpelisib 的患者可获得剂量依赖性获益，每日 200mg 剂量较 100mg 剂量获益 51%，每日一次 300mg 剂量较每日两次 150mg 剂量获益 22%。这表明需要较低剂量的患者可能受益于每日两次给药方案。

---

(2S)-N1-[4-甲基-5-[2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)-4-吡啶基]-2-噻唑基]吡咯烷-1,2-二甲酰胺是一种脯氨酸衍生物。
Alpelisib 是一种磷脂酰肌醇 3-激酶 (PI3K) 抑制剂，具有强效抗肿瘤活性。
Alpelisib 的作用机制是选择性抑制 I 类 PI3K p110α，后者是 PI3K 的催化亚基。PI3K 是一种脂质激酶，参与多种生物过程，包括增殖、存活、分化和代谢。Alpelisib 的设计目标是靶向这种酶，该酶在人类癌症中的突变率接近 30%，导致其过度激活。目前有几种针对特定亚型的 PI3K 抑制剂正在进行临床开发或已获批准，例如用于治疗慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 的 [idelalisib]。Alpelisib 于 2019 年 5 月获得 FDA 批准，是首个获批用于治疗激素受体 (HR) 阳性、人表皮生长因子受体 2 (HER2) 阴性、PIK3CA 突变的晚期或转移性乳腺癌的 PI3K 抑制剂，需与 [fulvestrant] 联合用于绝经后女性和男性患者。启动阿培利西布治疗前，必须通过FDA批准的诊断测试确认组织和/或液体活检样本中存在PIK3CA突变。阿培利西布以商品名Piqray上市，为口服片剂。目前正在进行评估阿培利西布在其他癌症（例如卵巢癌和结直肠癌）中疗效的研究。阿培利西布于2019年5月24日获得FDA批准。2022年4月，FDA批准阿培利西布用于治疗需要全身治疗的成人和儿童的PIK3CA相关过度生长谱系（PROS）。
阿培利西布是一种口服选择性磷脂酰肌醇-3-激酶（PIK3）抑制剂，PIK3在多种实体瘤中发生突变，阿培利西布已获准用于治疗特定类型的晚期或转移性乳腺癌。在阿培利西布治疗期间，血清转氨酶升高较为常见，但尚未有报道出现临床上明显的肝损伤伴黄疸，即使出现，也极为罕见。
阿培利西布是一种口服生物利用度高的磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。阿培利西布特异性抑制PI3K/AKT激酶（或蛋白激酶B）信号通路中的PI3K，从而抑制PI3K信号通路的激活。这可能导致易感肿瘤细胞群的生长和存活受到抑制。PI3K信号通路的激活通常与肿瘤发生有关。 PI3K信号通路失调可能导致肿瘤对多种抗肿瘤药物产生耐药性。
ALPELISIB是一种小分子药物，其临床试验阶段最高为IV期（涵盖所有适应症），于2019年首次获批，目前有5项已获批适应症和17项在研适应症。

---

HER2（ERBB2）的激活突变驱动部分乳腺癌和其他癌症的生长，并且往往与HER3（ERBB3）错义突变同时发生。HER2酪氨酸激酶抑制剂奈拉替尼已显示出对HER2突变肿瘤的临床活性。为了阐明HER3突变在HER2突变肿瘤中的作用，我们将计算结构建模与生物化学和细胞生物学分析相结合。计算模型预测，常见的HER3E928G激酶结构域突变会增强HER2/HER3的亲和力，并降低HER2与其抑制剂奈拉替尼的结合。突变型HER2/HER3的共表达增强了HER2/HER3的共免疫沉淀以及HER2/HER3和PI3K/AKT的配体非依赖性激活，从而导致肿瘤生长、侵袭性增强以及对HER2靶向治疗的耐药性，而这些作用可通过与PI3Kα抑制剂联合治疗逆转。我们的研究结果为HER2/HER3共突变的进化选择以及近期临床观察结果（即HER2突变型癌症中HER3突变与neratinib疗效不佳相关）提供了机制上的解释。[1]磷脂酰肌醇-3-激酶α (PI3Kα) 是抗癌药物研究中备受关注的治疗靶点。基于一种能够解释特定系列2-氨基噻唑化合物抑制PI3Kα的高选择性和高效性的结合模型，一项药物化学研究项目发现了临床候选药物NVP-BYL719。[2]

---

体细胞PIK3CA突变常见于实体瘤，由此提出假设：选择性抑制PI3Kα可能对PIK3CA突变型癌症具有显著疗效，同时避免患者承受与广泛抑制I类磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）家族相关的副作用。本文报道了2-氨基噻唑衍生物NVP-BYL719的生物学特性，NVP-BYL719是一种选择性PI3Kα及其最常见致癌突变体形式的抑制剂。该化合物的选择性及其优异的类药特性使其在体内能够剂量和时间依赖性地抑制PI3Kα信号通路，从而在PIK3CA依赖性肿瘤中展现出强大的治疗效果和良好的耐受性。新型靶向治疗药物，例如NVP-BYL719，旨在调节癌症特异性基因改变所引发的异常功能，而这些基因改变正是疾病发生的根源。为了最大限度地发挥其治疗效果并造福患者，此类药物需要明确的患者分层策略。本文还描述了如何将癌症细胞系百科全书（CCLE）作为临床前平台，以完善NVP-BYL719的患者分层策略。研究发现，PIK3CA突变是预测药物敏感性的最主要阳性指标，同时还揭示了其他阳性和阴性关联，例如PIK3CA扩增和PTEN突变。这些患者选择决定因素正在正在进行的NVP-BYL719临床试验中进行评估。[3]

C19H22F3N5O2S

441.47

441.144

C, 51.69; H, 5.02; F, 12.91; N, 15.86; O, 7.25; S, 7.26

1217486-61-7

Alpelisib hydrochloride;1584128-91-5

56649450

white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

1.587

-0.02

133.93

2

8

4

30

663

1

S1C(=C(C([H])([H])[H])N=C1N([H])C(N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(N([H])[H])=O)=O)C1C([H])=C([H])N=C(C=1[H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C(F)(F)F

STUWGJZDJHPWGZ-LBPRGKRZSA-N

InChI=1S/C19H22F3N5O2S/c1-10-14(11-6-7-24-13(9-11)18(2,3)19(20,21)22)30-16(25-10)26-17(29)27-8-4-5-12(27)15(23)28/h6-7,9,12H,4-5,8H2,1-3H3,(H2,23,28)(H,25,26,29)/t12-/m0/s1

(2S)-1-N-[4-methyl-5-[2-(1,1,1-trifluoro-2-methylpropan-2-yl)pyridin-4-yl]-1,3-thiazol-2-yl]pyrrolidine-1,2-dicarboxamide

Alpelisib; NVP-BYL-719; 1217486-61-7; BYL-719; BYL719; Piqray; Vijoice; NVP-BYL719; Alpelisib (BYL719); NVP-BYL719; NVP-BYL 719; BYL-719; BYL719; BYL 719

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (11.33 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: 2.08 mg/mL (4.71 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.71 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

配方 4 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.71 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

---

配方 5 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% Propylene glycol : 30mg/mL

---

配方 6 中的溶解度: 10 mg/mL (22.65 mM) in 0.5% MC 0.5% Tween-80 (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。

---

配方 7 中的溶解度: 10 mg/mL (22.65 mM) in 1% CMC 0.5% Tween-80 (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。