HSP90 (IC50 = 62 nM); GRP94 (IC50 = 65 nM)
Heat Shock Protein 90 (HSP90) - inhibitor [2]
IKKα (I-κB kinase α) - depleted via HSP90 inhibition [2]
IKKβ (I-κB kinase β) - depleted via HSP90 inhibition [2]
NF-κB (Nuclear factor-κB) signaling pathway - indirect inhibitor [2]

阿维斯霉素（17-DMAG）的EC50值为62 nM，是一种强效的Hsp90抑制剂。人癌细胞系SKBR3和SKOV3过表达Hsp90的底物蛋白Her2，其生长受到阿维斯霉素（17-DMAG）的抑制。这导致Her2表达下调和Hsp70表达上调，与Hsp90抑制作用一致。在SKBR3和SKOV3细胞中，Her2降解的EC50值分别为8 ± 4 nM和46 ± 24 nM，而Hsp70诱导的EC50值分别为4 ± 2 nM和14 ± 7 nM[1]。在浓度范围为 50 nM 至 500 nM 的 Alvespimycin (17-DMAG) 中，与溶剂对照组相比，其表现出剂量依赖性的细胞凋亡（24 小时和 48 小时时间点的平均值 P<0.001），该浓度范围对应于药理学上可达到的剂量。在慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 细胞中，Alvespimycin (17-DMAG) 在 24 至 48 小时的延长暴露后，表现出时间依赖性的细胞凋亡（所有剂量的平均值 P<0.001），这与其他许多药物相当。在治疗 24 小时和 48 小时后，阿维斯霉素 (17-DMAG) 的效力也显著高于 17-AAG[2]。

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对 CLL 细胞的细胞毒性：17-DMAG 对原发性慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 细胞表现出剂量和时间依赖性的细胞毒性。在 1 μM 浓度下，MTT 法和 Annexin V/PI 染色结果显示，17-DMAG 显著降低了细胞活力。[2]
对正常淋巴细胞的选择性毒性：在治疗 24-48 小时后，17-DMAG 对健康志愿者的正常 T 细胞 (P = 0.26) 和 NK 细胞 (P = 0.86) 的毒性极低，即使使用 CpG（B 细胞，P = 0.32）或 CD3（T 细胞，P = 0.63）刺激也是如此。 [2]
半胱天冬酶依赖性细胞凋亡：17-DMAG (1 μM) 诱导线粒体膜去极化（JC-1染色检测）和PARP裂解，而泛半胱天冬酶抑制剂z-VAD-fmk (100 μM) 可抑制该过程。z-VAD显著挽救了细胞死亡（交互作用对比，P < 0.001）。[2]
IKKα和IKKβ的耗竭：与仅耗竭IKKβ的17-AAG不同，17-DMAG (100 nM - 1 μM，24 h) 导致CLL细胞中IKKα和IKKβ均显著耗竭。两种抑制剂均可耗竭AKT。 [2] NF-κB信号通路抑制：17-DMAG（1 μM，24 h）可降低IκBα的磷酸化水平，维持总IκBα水平，并阻止p65和p50的核定位。此外，EMSA实验表明，17-DMAG还能降低NF-κB的DNA结合能力。[2] NF-κB靶基因下调：17-DMAG处理显著降低了BCL2（P = 0.02）和MCL1（P < 0.001）的转录水平，并降低了它们的蛋白表达。z-VAD对MCL1转录水平的降低无显著影响（P = 0.21），表明其并非细胞凋亡所致。 [2]
阻断微环境诱导的NF-κB激活：用17-DMAG（1 μM）预处理可阻断CD40L和CpG诱导的p65核定位和MCL1上调。CD40L不能挽救17-DMAG诱导的细胞死亡，反而增强了其细胞毒性作用（P < 0.001）。[2]

肿瘤培养两个月后，开始每四天进行一次腹腔注射（ip），持续一个月，分别使用0、5、10和20 mg/kg的阿维斯霉素（17-DMAG）或0、50、100和200 mg/kg的二棕榈酰雷迪西醇。尽管样本存在异质性，但接受HSP90抑制剂治疗的动物的肿瘤体积明显小于接受载体对照治疗的动物。在胃肠道肿瘤动物模型中，已证实HSP90抑制剂会引起肝毒性。然而，在 100 mg/kg 剂量下，二棕榈酰雷迪西醇可显著缩小肿瘤体积，而 10 或 20 mg/kg 剂量的阿维斯皮霉素 (17-DMAG) 也可显著缩小肿瘤体积[3]。

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TCL1-SCID 小鼠模型中的生存期延长：在 TCL1-SCID 移植的慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 小鼠模型中，与载体对照组相比，17-DMAG 治疗（10 mg/kg，腹腔注射，每周 5 次）显著延长了生存期（中位生存期分别为 75 天和 66 天，P = 0.027，n = 10/组）[2]。
白血病负荷降低：在治疗开始后第 55 天，与载体对照组相比，17-DMAG 治疗显著降低了治疗小鼠的白细胞计数（P = 0.007，n = 20/组）[2]。

竞争性结合实验。[1]
\n从HeLa细胞（SPP-770）分离的天然人Hsp90蛋白（α+β亚型）和重组犬Grp94（SPP-766）购自Stressgen Biotechnologies公司。基于荧光偏振（FP）的结合实验步骤参考了Chiosis等人^42,43的描述。BODIPY-AG溶液用FP实验缓冲液（20 mM HEPES-KOH，pH 7.3，1.0 mM EDTA，100 mM KCl，5.0 mM MgCl₂，0.01% NP-40，0.1 mg/mL新鲜牛γ-球蛋白（BGG），1.0 mM新鲜DTT和Complete蛋白酶抑制剂）新鲜配制，该缓冲液由DMSO储备液配制而成。将等体积（10 μL）的 BODIPY-AG 溶液和系列稀释的人 Hsp90（或 Grp94）溶液混合于 384 孔微孔板中，得到 10 nM BODIPY-AG、不同浓度的 Hsp90（单体浓度为 0.10 nM 至 6.25 μM）以及 0.05% DMSO。在 30 °C 下孵育 3 小时后，使用 EnVision 2100 多功能酶标仪测量荧光各向异性（激发波长 λEx = 485 nm，发射波长 λEm = 535 nm）。竞争曲线的制备方法为：将 10 μL 含有 BODIPY-AG 和 Hsp90（或 Grp94）的溶液，以及用 FP 检测缓冲液新鲜配制的、由 DMSO 储备液稀释的化合物系列溶液混合。最终浓度为：BODIPY-AG 10 nM，Hsp90（或 Grp94）40 或 60 nM，各化合物浓度变化范围为 0.10 nM 至 10 μM，DMSO ≤0.25%。由于化合物 (1-3)a 在中性 pH 值下易氧化，因此在 LabMaster 手套箱（M. Braun，Stratham，NH）中，于氮气氛围下，与醌类化合物 (1-3)b 平行进行这些化合物的测定。通常，Hsp90 蛋白溶液和化合物储备液以冷冻液体的形式带入手套箱，结合混合物在 FP 测定缓冲液中制备，该缓冲液经反复抽真空和氩气冲洗脱氧。孵育后，将微孔板从手套箱中取出，立即测量荧光各向异性。有趣的是，BODIPY-AG 与 Hsp90 的结合导致荧光各向异性 (FA) 和强度同时增加，而与 Grp94 的结合对荧光强度的影响相对较小。每个结合或竞争曲线均采集了三个重复数据点。竞争结合曲线采用四参数逻辑函数进行拟合[1]。

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\n\n17-AAG 从 Hsp90（复合物）的解离。[1]
\n使用旋转柱法测定 1b 从纯化的人 Hsp90 蛋白或细胞裂解液中的 Hsp90 复合物的解离速率。[烯丙基氨基-3H]-17-AAG（20 Ci/mmol，HPLC 纯度≥97%）购自商业渠道。将 200 μCi (10 nmol) 的 [3H]-17-AAG 乙醇溶液真空干燥，并与 30 nmol 未标记的 1b DMSO 溶液混合，得到浓度为 1 mM 的 [3H]-17-AAG 储备液，其比表面积 (SA) 为 3 × 10⁶−4 × 10⁶ cpm/nmol。结合反应体系包含 400 nM Hsp90、4.0 μM [3H]-17-AAG 和 0.38 mg/mL BGG，反应缓冲液为：20 mM HEPES-KOH (pH 7.3)、1.0 mM EDTA、100 mM KCl、5.0 mM MgCl₂、0.01% NP-40、1.0 mM 新鲜配制的 DTT 和 Complete 蛋白酶抑制剂。牛 γ-球蛋白仅作为纯化 Hsp90 蛋白的载体蛋白。或者，使用正常人真皮成纤维细胞（NHDF，总蛋白浓度为 5.0 mg/mL）或乳腺癌细胞系 SKBR3（1.5 mg/mL）的细胞裂解液（制备方法见 Kamal 等人²⁰）代替纯化的 Hsp90 蛋白。在 37 °C 下孵育 ≥2 小时后，将 65 μL 结合反应液依次通过两个 Zeba 脱盐离心柱以去除未结合的配体。在解离反应（650 μL）中，将含有结合的 [³H]-17-AAG 的脱盐蛋白溶液用未标记的 1b 稀释，使最终浓度为约 40 nM Hsp90、40 μM 17-AAG 和 0.48 mg/mL BGG（溶于测定缓冲液中）。类似地，将脱盐细胞裂解液用 1b 稀释 10 倍，最终浓度为 20 μM。为确保[3H]-17-AAG的解离几乎不可逆，未标记的17-AAG的浓度至少是Hsp90的1000倍。在不同的孵育时间（37 °C）下，取出60 μL解离反应液，并依次通过两个Zeba离心柱。使用MicroBeta微孔板闪烁计数器分析流出液。解离动力学采用单指数函数A = A0 × exp-kt + A∞进行拟合，以获得一级反应速率常数k。

MTT 法用于检测细胞毒性。将来自慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 患者的 1×10⁶ 个 CD19 阳性 B 细胞与 Alvespimycin、17-AAG 或溶剂对照孵育 24 或 48 小时。加入 MTT 试剂后，继续孵育 24 小时，然后进行分光光度法测定。使用碘化丙啶 (PI) 和 Annexin V-FITC 双染法检测细胞凋亡。将细胞暴露于药物后，用磷酸盐缓冲液 (PBS) 清洗，并在结合缓冲液中染色一次。使用流式细胞仪评估细胞死亡情况。使用 System II 软件进行数据分析。每个样本计数一万个细胞。线粒体膜电位的变化通过亲脂性阳离子染料 JC-1 染色并使用流式细胞术分析结果进行评估[2]。

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细胞活力检测 (MTT)：将来自 CLL 患者的 CD19 筛选的 B 细胞（1×10⁶ 个细胞）与 17-DMAG 或载体孵育 24-48 小时。加入 MTT 试剂，并在分光光度计测量前继续孵育 24 小时。[2]
细胞凋亡检测 (Annexin V/PI)：药物处理后，洗涤细胞，用 Annexin V-FITC 和碘化丙啶在结合缓冲液中染色，并通过流式细胞术进行分析（10,000 个细胞/样本）。 [2]
线粒体膜电位（JC-1染色）：用亲脂性阳离子染料JC-1对细胞进行染色，并通过流式细胞术分析以检测去极化的线粒体。[2]
免疫印迹分析：使用NE-PER试剂盒制备核和胞质裂解液。将蛋白质（50 μg/泳道）在聚丙烯酰胺凝胶上进行分离，然后转移至硝酸纤维素膜，用针对AKT、p-IκBα、PARP、p65、p50、RELB、MCL1、BCL2、IκBα、肌动蛋白、IKKα、IKKβ和BRG1的抗体进行探针检测，并通过化学发光法进行检测。[2]
电泳迁移率变动分析（EMSA）：将核蛋白（5 μg）与含有NF-κB共识结合位点的³²P标记探针孵育。复合物经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、干燥后进行放射自显影。抗体超移位实验采用抗p65或抗p50抗体进行。[2]
实时荧光定量PCR：使用TRIzol提取RNA，并用Qiagen RNeasy柱纯化。使用SuperScript第一链合成系统合成cDNA。使用商业引物或定制引物进行实时荧光定量PCR。数据以TBP或18S内参基因进行标准化，并使用线性混合效应模型进行分析。[2]
刺激实验：对于CD40L刺激，细胞用17-DMAG（1 μM）处理0-24小时，然后用CD40L（500 ng/mL）刺激1小时。对于 CpG 刺激，细胞先用 17-DMAG (1 μM) 处理 0-24 小时，然后用 CpG 寡脱氧核苷酸 (3.2 μM) 刺激 3 小时。[2]

小鼠：本研究使用CB-17/IcrHsd-Prkdc-SCID年轻雄性小鼠。将胶原蛋白溶液与1×10⁵个BPH1细胞和2.5×10⁵个CAF细胞混合，每个移植片制备重组异种移植瘤。混合液凝胶后，覆盖培养基，培养过夜。肿瘤形成8周后，每4天腹腔注射一次溶于芝麻油的化合物，持续4周。分别给予三种不同剂量的二棕榈酰雷迪西醇（50、100和200 mg/kg）和阿维斯皮霉素（5、10和20 mg/kg）。12周后处死小鼠，取出肾脏，将移植片切成两半，拍照后进行组织学处理。测量移植片的尺寸，并使用公式“体积=宽度×长度×深度×π/6”计算所得肿瘤的体积。与较小的非侵袭性肿瘤相比，该公式低估了大型侵袭性肿瘤的体积，因此在评估肿瘤体积时应谨慎。切除的移植片经石蜡包埋，用10%福尔马林固定，然后进行免疫组织化学染色。

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TCL1-SCID移植小鼠模型：** 将来自患有活动性白血病的TCL1转基因小鼠脾脏的CD19选择的转化B细胞（1×10⁶）通过尾静脉注射移植到SCID小鼠体内。移植两周后，小鼠每周5次腹腔注射17-DMAG（10 mg/kg）或DMSO溶剂对照。在不同时间点采集血液进行分析。当小鼠出现后肢瘫痪或其他引起不适的疾病症状时，对其进行安乐死。测定总体存活率。在治疗开始后第55天，通过苏木精-伊红染色外周血涂片测定白细胞计数。所有实验均经俄亥俄州立大学机构动物护理和使用委员会批准。[2]

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TCL1-SCID移植小鼠模型：将来自患有活动性白血病的TCL1转基因小鼠脾脏的CD19选择的转化B细胞（1×10⁶）通过尾静脉注射移植到SCID小鼠体内。移植两周后，小鼠每周5次腹腔注射17-DMAG（10 mg/kg）或DMSO溶剂对照。在不同时间点采集血液进行分析。当小鼠出现后肢瘫痪或其他引起不适的疾病症状时，对其进行安乐死。测定总体存活率。在治疗开始后第 55 天，采用苏木精-伊红染色法对外周血涂片进行白细胞计数。所有实验均已获得俄亥俄州立大学机构动物护理和使用委员会的批准。[2]

吸收、分布和排泄
药物浓度升高会导致血浆浓度呈剂量比例增加。在最大耐受剂量 80 mg/m² 下，所有患者的血浆浓度在 24 小时内均超过 63 nM（17-DMAG 在 60 种美国国家癌症研究所 (NCI) 人类肿瘤细胞系中的平均 IC50 值）。在此剂量下，平均峰浓度 (Cmax) 达到 2680 nmol/L。药物主要通过肾脏和胆道排泄。在小鼠研究中，给药 24 小时后，尿液中药物的回收率为给药剂量的 10.6%–14.8%，未观察到代谢。在最大耐受剂量 80 mg/m² 下，平均分布容积 (Vd) 为 385 L。在 80 mg/m² 剂量下，平均清除率为 18.9 L/hr。

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代谢/代谢物
阿维斯匹西辛在纯化的人类细胞色素P450还原酶（CYP3A4/3A5）催化下进行氧化还原循环，生成醌类和氢醌类。它还可以在醌环的19位形成谷胱甘肽结合物。然而，体内和体外研究表明，阿维斯匹西辛在人体内代谢较差。

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生物半衰期
在所有剂量水平下，半衰期范围为9.9至54.1小时（中位数为18.2小时）。

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溶解度和制剂：17-DMAG的溶解度优于17-AAG，并且有口服制剂，这便于给药并可能提高患者的依从性。 [2]
药代动力学特性：在血液系统恶性肿瘤的 I 期研究中，静脉注射 17-DMAG 的半衰期约为 24 ± 15 小时。在低于最大耐受剂量的剂量下，其最大浓度 (Cmax) 达到 291 ng/mL（约 471 nM），该浓度与本研究中显示细胞毒性的浓度相对应。[2]
口服制剂：17-DMAG 的口服制剂显示出与静脉注射制剂相似的药理学特性，并可提供持续的 HSP90 抑制作用。在推荐的 II 期剂量下，观察到 HSP90 抑制作用提高 2 倍，与静脉注射制剂相似。[2]

据报道，蛋白质结合极其罕见。

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剂量限制性毒性：在急性髓系白血病的 I 期研究中，剂量限制性毒性包括最高剂量水平 (32 mg/m²) 下的急性心肌梗死和肌钙蛋白升高。在达到最大浓度 291 ng/mL（约 471 nM）的剂量下未观察到这些毒性，该浓度与本研究中显示显著 CLL 细胞毒性的浓度相对应。[2]
选择性毒性特征：17-DMAG 对 CLL 细胞表现出选择性细胞毒性，对正常 T 细胞和 NK 细胞的毒性极低，表明其免疫抑制作用可能低于其他目前使用的 CLL 疗法。[2]

[1]. Design, synthesis, and biological evaluation of hydroquinone derivatives of 17-amino-17-demethoxygeldanamycin as potent, water-soluble inhibitors of Hsp90. J Med Chem. 2006 Jul 27;49(15):4606-15.

[2]. 17-DMAG targets the nuclear factor-kappaB family of proteins to induce apoptosis in chronic lymphocytic leukemia: clinical implications of HSP90 inhibition. Blood. 2010 Jul 8;116(1):45-53

[3]. Reduced Contractility and Motility of Prostatic Cancer-Associated Fibroblasts after Inhibition of Heat Shock Protein 90. Cancers (Basel). 2016 Aug 24;8(9). pii: E77.

阿维斯霉素是一种19元大环化合物，是格尔德霉素的衍生物，其苯醌部分上的甲氧基被2-(N,N-二甲基氨基)乙基氨基取代。它是一种HSP90抑制剂。它属于仲氨基化合物、叔氨基化合物、茴香霉素类化合物、1,4-苯醌类化合物和氨基甲酸酯类化合物。在功能上，它与格尔德霉素相关。阿维斯霉素是格尔德霉素的衍生物，也是一种热休克蛋白(HSP)90抑制剂。它已在临床试验中用于治疗多种实体瘤，作为一种抗肿瘤药物。与首个HSP90抑制剂坦司匹霉素相比，阿维斯匹霉素展现出多种药理学上更优的特性，例如代谢稳定性降低、血浆蛋白结合率降低、水溶性提高、口服生物利用度更高、肝毒性降低以及抗肿瘤活性更强。
据报道，阿维斯匹霉素存在于库伦菊（Cullen corylifolium）和栝楼（Trichosanthes kirilowii）中，并已有相关数据。
阿维斯匹霉素是抗肿瘤苯醌类抗生素格尔德霉素的类似物。阿维斯匹霉素与HSP90结合，HSP90是一种分子伴侣蛋白，可辅助蛋白质的组装、成熟和折叠。随后，HSP90的功能受到抑制，导致其底物蛋白（例如参与细胞周期调控和信号转导的激酶和转录因子）的降解和耗竭。
药物适应症

目前正在研究其作为抗肿瘤药物用于治疗实体瘤、晚期实体瘤或急性髓系白血病的用途。
作用机制

阿维斯霉素抑制HSP90及其对多种细胞信号蛋白（称为Hsp90底物蛋白）正确折叠和功能的调控。这些底物蛋白，也称为癌蛋白，包括Her-2、EGFR、Akt、Raf-1、p53、Bcr-Abl、Cdk4、Cdk6和类固醇受体。它们参与驱动细胞增殖和抑制细胞凋亡的细胞信号通路。这些蛋白在肿瘤中经常过表达或发生突变，从而促进癌症进展和治疗耐药性。阿维斯霉素通过破坏Hsp90的分子伴侣功能并诱导癌蛋白的蛋白酶体降解来发挥其抗癌活性。研究表明，它能降低 CDK4 和 ERBB2 的水平。

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药效学
阿维斯霉素通过抑制 HSP90 发挥其抗肿瘤活性，从而靶向蛋白酶体降解底物蛋白，包括致癌激酶，例如 BRAF。研究表明，该药物的给药会导致致癌底物蛋白的耗竭，并可能诱导 HSP70（HSP72）的表达。它对肿瘤组织的选择性高于正常组织。一项研究还报道，在人类骨肉瘤的临床前模型中，阿维斯霉素增强了伊美替司他（imetelstat）对端粒酶的抑制作用。

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背景和研发：17-DMAG（阿维斯霉素）是格尔德霉素的衍生物，也是 17-AAG（坦斯霉素）的水溶性类似物。
该药物的研发旨在克服17-AAG溶解度差和递送困难的问题，同时保持其HSP90抑制活性。[2]
作用机制 - NF-κB抑制：17-DMAG是首个被证实能够靶向原代CLL细胞中NF-κB激活激酶IKKα和IKKβ的治疗药物。通过耗竭这些HSP90底物蛋白，它抑制了经典（IKKβ介导）和替代（IKKα介导）NF-κB信号通路，从而导致抗凋亡靶基因（BCL2、MCL1）的下调和caspase依赖性细胞凋亡。 [2]
在慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 中的临床意义：CLL 细胞中 NF-κB 的组成型激活，以及 BCL2 和 MCL1 的过表达，可能导致“癌基因成瘾”，使得 CLL 细胞对 17-DMAG 的敏感性高于正常淋巴细胞。阻断微环境生存信号（CD40L、CpG）的能力进一步支持了其临床应用潜力。[2]
临床开发：基于所提供的数据，一项 17-DMAG 治疗 CLL 的临床研究已通过美国国家癌症研究所的癌症治疗评估项目启动。口服制剂提供了一种更便捷的给药途径，同时保持了生物活性。[2]

C32H48N4O8

616.756

616.347

C, 62.32; H, 7.84; N, 9.08; O, 20.75

467214-20-6

Alvespimycin hydrochloride;467214-21-7

5288674

Pale purple to purple solid powder

1.2±0.1 g/cm3

810.5±65.0 °C at 760 mmHg

444.0±34.3 °C

0.0±6.6 mmHg at 25°C

1.566

2.07

169.52

4

10

8

44

1230

6

O(C([H])([H])[H])[C@]1([H])[C@@]([H])([C@@]([H])(C([H])([H])[H])C([H])=C(C([H])([H])[H])[C@@]([H])([C@]([H])(C([H])=C([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C(N([H])C2=C([H])C(C(=C(C2=O)C([H])([H])[C@@]([H])(C([H])([H])[H])C1([H])[H])N([H])C([H])([H])C([H])([H])N(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=O)=O)OC([H])([H])[H])OC(N([H])[H])=O)O[H] |c:16,31,t:27|

KUFRQPKVAWMTJO-LMZWQJSESA-N

InChI=1S/C32H48N4O8/c1-18-14-22-27(34-12-13-36(5)6)24(37)17-23(29(22)39)35-31(40)19(2)10-9-11-25(42-7)30(44-32(33)41)21(4)16-20(3)28(38)26(15-18)43-8/h9-11,16-18,20,25-26,28,30,34,38H,12-15H2,1-8H3,(H2,33,41)(H,35,40)/b11-9-,19-10+,21-16+/t18-,20+,25+,26+,28-,30+/m1/s1

[(4E,6Z,8S,9S,10E,12S,13R,14S,16R)-19-[2-(dimethylamino)ethylamino]-13-hydroxy-8,14-dimethoxy-4,10,12,16-tetramethyl-3,20,22-trioxo-2-azabicyclo[16.3.1]docosa-1(21),4,6,10,18-pentaen-9-yl] carbamate

17-DMAG; KOS 1022; KOS-1022; KOS1022; Alvespimycin

2934.99.03.00

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~100 mg/mL (~162.1 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。