| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
EphA2 (Kd = 12 nM)
EphA2 (receptor tyrosine kinase); RET (tyrosine kinase) - reported to inhibit RET in other models (REF 25). |
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| 体外研究 (In Vitro) |
ALW-II-41-27 可抑制经 Tel 融合蛋白 EphA3、Kit、Fms、KDR、FLT1、FGR、Src、Lyn、Bmx 和 Bcr-Abl 转化的 Ba/F3 细胞，EC50 低于 500 nM。Bcr-Abl 和 ALW-II-41-27 之间存在交叉反应。 ALW-II-41-27 可抑制 b-raf、CSF1R、DDR1、DDR2、EphA2、EphA5、EphA8、EphB1、EphB2、EphB3、Frk、Kit、Lck、p38α、p38β、PDGFRα、PDGFRβ、Raf1 以及众多其他激酶，表明噻吩基团的引入可显著影响激酶选择性[1]。
ALW-II-41-27 在 MTT 实验中以剂量依赖的方式显著抑制 MDA-MB-231 细胞的生长，培养 72 小时后（参考文献 6a）。 与对照组相比，ALW-II-41-27 处理降低了 MDA-MB-231 细胞中 c-Myc 和细胞周期蛋白 E2 的水平，同时提高了 p27/KIP1 的水平（参考文献 6a）。 6b）。 ALW-II-41-27显著降低了MDA-MB-231细胞中酪氨酸588位点的EphA2磷酸化水平（参考文献6b）。 与NG-25对照组相比，ALW-II-41-27处理降低了野生型C3-TAg肿瘤细胞中c-Myc、P-Rb和cyclin E2的表达，并增强了p27/KIP1的表达（参考文献6d）。 ALW-II-41-27显著降低了野生型C3-TAg三维球状体培养物中的集落大小，模拟了EphA2缺陷的影响；对 EphA2 缺陷型 C3-TAg 细胞系的影响并不显著，表明脱靶效应极小（REF 6f, 6g）。 ALW-II-41-27 显著降低了 C3-TAg 细胞中 EphA2 的基础酪氨酸磷酸化和 ephrin-A1-Fc 诱导的酪氨酸磷酸化（REF 6e）。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在两个独立的TNBC PDX细胞系（HCI-001和HCI-010）中，ALW-II-41-27治疗在治疗后3-5天内显著降低了肿瘤体积，且该效果持续至第7天（参考文献6i；S7a）。
接受ALW-II-41-27治疗的动物的肿瘤细胞增殖（Ki67）显著降低（参考文献6j；S7c），而细胞凋亡无变化（S7d，S7e）。 与对照组相比，ALW-II-41-27治疗的肿瘤组织切片中c-Myc蛋白表达降低，p27/KIP1蛋白表达升高（S7f）。 接受两剂ALW-II-41-27治疗的动物的PDX肿瘤裂解物（HCC-010）中EphA2磷酸化水平显著降低。对照处理动物（S7g）。 |
| 酶活实验 |
为了评估 EphA2 磷酸化：将 C3-TAg 细胞饥饿处理，然后在有或无 ALW-II-41-27 或 NG-25 对照的情况下，用 ephrin-A1-Fc (1 μg/ml) 刺激 0、15 和 30 分钟。使用抗 EphA2 抗体（C-20/SC-924 和 D7）从 500 μg 细胞裂解液中免疫沉淀 EphA2，然后用 A/G PLUS-琼脂糖珠进行分离。使用混合的 PY99 和 PY20 抗体检测免疫沉淀产物中的酪氨酸磷酸化以及 EphA2（参考文献 6e）。
为了在 PDX 肿瘤中验证靶点：对一组独立的 HCC-010 PDX 肿瘤荷瘤动物进行治疗，分别在 0 小时和 8 小时给予载体或 ALW-II-41-27 处理。在最后一次治疗后 1 小时收集肿瘤。制备肿瘤裂解液并进行 EphA2 免疫沉淀。用磷酸化 EphA2 (Tyr588) 抗体检测裂解液和免疫沉淀产物，然后剥离膜并重新用总 EphA2 (S7g) 抗体检测。 |
| 细胞实验 |
为了确定EPHA2的功能，将肌源性前体细胞在GM培养基中暴露于ALW-II-41-27（0.5 μM）12小时，之后进行肌源性分化。MTT生长实验：将MDA-MB-231和野生型C3-TAg肿瘤细胞在浓度递增（0.5-1 μM）的ALW-II-41-27存在下培养，并与对照NG-25进行比较。培养72小时后，通过MTT法评估细胞生长情况。将3×10^3个细胞接种于96孔板中，每个处理至少设置四个复孔，培养基为生长培养基。加入MTT试剂后，使用多功能酶标仪读取结果。细胞生长或存活率以对照细胞为基准进行标准化（参考文献 6a、6c）。
三维球状体培养：将野生型和 EphA2 缺陷型 C3-TAg 细胞在 Matrigel 基质上进行三维球状体培养 7 天，分别加入 1 μM ALW-II-41-27 或 NG-25 对照。使用 NIH Image J 软件在显微照片中测量集落大小（参考文献 6f、6g）。 免疫印迹分析：用 ALW-II-41-27 或 NG-25 对照处理细胞，收集细胞裂解物（25-50 μg），并使用针对 P-EphA2 Tyr588、c-Myc、p27/KIP1、cyclin E2、P-Rb 和 β-actin 的抗体进行免疫印迹分析。使用化学发光或 LI-COR Odyssey 检测系统检测信号（参考文献 6b、6d）。 C3-TAg 细胞中 EphA2 磷酸化测定：细胞饥饿后，在有或无 1 μM NG-25 或 ALW-II-41-27 的情况下，用 ephrin-A1-Fc (1 μg/ml) 刺激指定时间。对 EphA2 进行免疫沉淀，并用酪氨酸磷酸化探针检测沉淀产物（参考文献 6e）。 |
| 动物实验 |
PDX 研究：将 2 mm³ 冷冻保存的组织（HCI-001 和 HCI-010 TNBC 衍生细胞系）植入 3-4 周龄 NOD-SCID 受体雌性小鼠经手术清除的腹股沟乳腺脂肪垫中。待肿瘤植入并生长至至少 200 mm³ 后，随机分组，并腹腔注射载体对照或 15 mg/kg 的 ALW-II-41-27（溶于 10% 1-甲基-2-吡咯烷酮和 90% 聚乙二醇 300 的混合溶液中），每日两次，持续 1 周。每周测量肿瘤四次，并根据公式“体积 = 长 × 宽² × 0.52”计算肿瘤体积。治疗结束后，收集肿瘤并分析其增殖（Ki67）、凋亡（cleaved caspase 3）和微血管密度（CD31）（参考文献 6h-6j；S7）。
靶点验证的独立队列：将携带 HCC-010 PDX 肿瘤的动物分别在 0 小时和 8 小时接受载体或 ALW-II-41-27（15 mg/kg）治疗。在最后一次治疗后 1 小时收集肿瘤以验证 EphA2 靶向性（S7g）。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
ALW-II-41-27（CAS#: 1186206-79-0）是一种 EphA2 的小分子酪氨酸激酶抑制剂。 Nathanael Gray 实验室之前的研究测试了 ALW-II-41-27 对 EphA2 激酶活性的亲和力和抑制作用，并将其与其他 Eph RTK 家族成员和其他激酶进行了比较，结果表明 ALW-II-41-27 对 EphA2 激酶活性具有显著的特异性（参考文献 22, 23）。
最近的一项研究报道，ALW-II-41-27 可抑制 RET 转化成纤维细胞、HEK293 细胞以及人甲状腺癌原发肿瘤细胞和细胞系中的 RET 酪氨酸激酶活性和功能（参考文献 25）。 作者在 EphA2 缺失模型（EphA2 缺陷型 C3-TAg 细胞）中测试了 ALW-II-41-27 的潜在脱靶效应，发现其对 EphA2 缺陷型细胞系的影响并不显著，表明该抑制剂的脱靶效应极小（参考文献）。 6f, 6g）。 ALW-II-41-27购自MedChem Express（参见材料和方法）。 此前研究表明，该抑制剂能有效抑制非小细胞肺癌模型中的EphA2功能（参见参考文献22, 23）。 |
| 分子式 |
C32H32F3N5O2S
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|---|---|
| 分子量 |
607.6890
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| 精确质量 |
607.223
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| 元素分析 |
C, 63.25; H, 5.31; F, 9.38; N, 11.52; O, 5.27; S, 5.28
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| CAS号 |
1186206-79-0
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| 相关CAS号 |
1186206-79-0
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| PubChem CID |
42628503
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| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
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| LogP |
7.423
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| tPSA |
112.79
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
9
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
|
| 重原子数目 |
43
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| 分子复杂度/Complexity |
933
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
S1C([H])=C([H])C([H])=C1C1C([H])=NC([H])=C(C=1[H])C(N([H])C1=C(C([H])([H])[H])C([H])=C([H])C(=C1[H])C(N([H])C1C([H])=C([H])C(=C(C(F)(F)F)C=1[H])C([H])([H])N1C([H])([H])C([H])([H])N(C([H])([H])C([H])([H])[H])C([H])([H])C1([H])[H])=O)=O
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| InChi Key |
HYWXBDQAYLPMIX-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C32H32F3N5O2S/c1-3-39-10-12-40(13-11-39)20-23-8-9-26(17-27(23)32(33,34)35)37-30(41)22-7-6-21(2)28(16-22)38-31(42)25-15-24(18-36-19-25)29-5-4-14-43-29/h4-9,14-19H,3,10-13,20H2,1-2H3,(H,37,41)(H,38,42)
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| 化学名 |
N-[5-[[4-[(4-ethylpiperazin-1-yl)methyl]-3-(trifluoromethyl)phenyl]carbamoyl]-2-methylphenyl]-5-thiophen-2-ylpyridine-3-carboxamide
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| 别名 |
ALWII-41-27; ALW-II-41-27; ALW II-41-27; ALW II-4127; ALW-II-4127; ALWII-4127
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~100 mg/mL (~164.6 mM)
Ethanol: ~100 mg/mL (~164.6 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.11 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.6456 mL | 8.2279 mL | 16.4558 mL | |
| 5 mM | 0.3291 mL | 1.6456 mL | 3.2912 mL | |
| 10 mM | 0.1646 mL | 0.8228 mL | 1.6456 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
