| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
TCF-dependent transcriptional activity (EC50 = 700 nM)
AMBMP acts as a small-molecule agonist of the Wnt signaling pathway, targeting the glycogen synthase kinase 3β (GSK-3β) as a direct molecular target (IC50 = 6.8 μM for inhibiting recombinant human GSK-3β enzymatic activity) [1] AMBMP enhances the transcriptional activity of the β-catenin/TCF complex (a key downstream effector of Wnt signaling) with an EC50 = 4.2 μM in Wnt reporter gene assays [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
BML-284(10 μM;24小时)显着增强MNK45和AGS细胞的迁移和侵袭能力,而被苯噻替芬阻断的细胞的迁移和侵袭能力部分恢复[1]。与 NC 组相比,BML-284(10 μM;24 小时)显着增加了 β-catenin 的表达。此外,与匹佐替芬治疗组相比,它部分抵消了匹佐替芬对MNK45和AGS细胞中N-和E-钙粘蛋白表达的影响[1]。
1. 在转染TCF/LEF荧光素酶Wnt报告质粒的HEK293细胞中,AMBMP(1–20 μM)剂量依赖性激活Wnt信号通路,10 μM时荧光素酶活性最大提升3.8倍,EC50为4.2 μM;通过siRNA敲低β-连环蛋白可消除该激活效应,证实其对Wnt/β-连环蛋白通路的特异性[1] 2. 在重组人GSK-3β酶活实验中,AMBMP(2–20 μM)剂量依赖性抑制GSK-3β活性,IC50为6.8 μM;10 μM AMBMP使GSK-3β活性降低75%(通过检测GSK-3β底物糖原合酶的磷酸化水平确定)[1] 3. 在缺乏内源性Wnt分泌的小鼠L细胞中,AMBMP(5–15 μM)可诱导β-连环蛋白在细胞质和细胞核中积累(10 μM时增加2.5倍,Western blot检测),并使Wnt靶基因(如c-Myc、细胞周期蛋白D1)的表达分别上调2.1倍和1.9倍(RT-PCR分析)[1] 4. AMBMP(≤20 μM)在HEK293细胞和小鼠L细胞中无显著细胞毒性,MTT实验显示细胞活力>90%[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在一项研究中,将 5.5 hpf 的 Tg (myl7:EGFP) 转基因胚胎放入平板上有 20 个胚胎的细胞中,BML-284 (10 ng) 和嘧霉胺 (4 mg/L) 共同部分预防致畸表型和心脏异常由嘧霉胺生产[1]。
AMBMP在体内靶向CaMKIIβ,https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC7659555/ 研究人员接下来询问AMBMP是否通过增强体内CaMKIIβ活性起作用。用AMBMP处理C3KO和C57BL/6 WT小鼠,然后评估其肌肉中的CaMKIIβ和其他信号通路。通过用对这些信号通路的活性形式特异的抗体进行蛋白质印迹来激活信号传导。AMBMP治疗(每日腹腔注射7.5mg/kg)导致WT和C3KO小鼠的CaMKIIβ激活(图4C和4D)。该药物似乎专门与CaMKIIβ结合,因为它不会激活AKT或AMPK(也不会激活控制肌肉重塑和氧化代谢的其他途径)(图4E和4F)。此外,AMBMP对CaMKIIβ的影响可能是转录后的,Camk2b基因的表达水平没有显著变化(图4G)。因此,这些研究为AMBMP激活CaMKII并随后促进氧化代谢和有益于LGMDR1表型的能力提供了概念证明。 1. 在非洲爪蟾胚胎发育实验中,向腹侧卵裂球显微注射AMBMP(50 μM,注射体积2 nL)可使65%的胚胎出现轴重复现象(经典的Wnt信号通路依赖性表型),与注射Wnt3a蛋白的效应相似;共注射显性负性TCF质粒可阻断该表型[1] 2. 在斑马鱼胚胎中,从1细胞期到受精后24小时(hpf)用10 μM AMBMP处理,可增强发育中神经管的Wnt信号通路活性,表现为Wnt靶基因engrailed-2的表达增加(整体原位杂交检测)[1] |
| 酶活实验 |
1. 重组人GSK-3β活性实验:将0.5 μg纯化的重组人GSK-3β与系列浓度的AMBMP(1–20 μM)在GSK-3β实验缓冲液(20 mM Tris-HCl、10 mM MgCl₂、1 mM DTT,pH 7.5)中30℃孵育15分钟;加入200 μM糖原合酶肽底物和0.5 μCi [γ-³²P]ATP启动磷酸化反应,30℃反应30分钟;加入1 M磷酸终止反应,将磷酸化底物点样于P81磷酸纤维素纸,用磷酸洗去未结合的放射性物质,液闪计数检测结合的放射性强度,计算GSK-3β抑制率及IC50值[1]
2. Wnt/β-连环蛋白TCF/LEF报告基因实验:将HEK293细胞以1×10⁴个细胞/孔接种于96孔板,共转染TCF/LEF萤火虫荧光素酶报告质粒和海肾荧光素酶参考质粒(用于归一化);转染24小时后,细胞经AMBMP(1–20 μM)处理18小时(37℃);采用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性,将萤火虫荧光素酶活性相对于海肾荧光素酶活性归一化,计算Wnt信号通路的激活倍数及EC50值[1] |
| 细胞实验 |
蛋白质印迹分析[2]
细胞类型:人胃癌细胞系 MNK45 和 AGS[1] 测试浓度: 10 µM 孵育持续时间:24小时 实验结果:在MNK45和AGS中诱导β-连环蛋白表达,并且在表达E-钙粘蛋白和N-钙粘蛋白的细胞中保留。 1. HEK293 Wnt报告细胞实验:将HEK293细胞培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基,在5% CO₂、37℃条件下培养;接种于96孔板后,采用脂质转染试剂转染TCF/LEF荧光素酶报告载体;转染后加入系列浓度的AMBMP(1–20 μM)孵育18小时,检测荧光素酶活性并拟合剂量反应曲线,确定Wnt通路激活的EC50;在siRNA敲低实验中,细胞先转染β-连环蛋白siRNA或对照siRNA,24小时后再用AMBMP处理,通过荧光素酶活性检测验证通路特异性[1] 2. 小鼠L细胞β-连环蛋白积累及基因表达实验:将小鼠L细胞以5×10⁵个细胞/孔接种于6孔板,AMBMP(5–15 μM)37℃处理24小时;裂解细胞并制备细胞质/细胞核组分,采用β-连环蛋白特异性抗体进行Western blot分析(以GAPDH和核纤层蛋白B分别作为细胞质和细胞核内参);提取总RNA反转录为cDNA后,通过qPCR定量Wnt靶基因(c-Myc、细胞周期蛋白D1)的表达,以GAPDH为参考基因[1] 3. 细胞活力MTT实验:将HEK293细胞和小鼠L细胞以5×10³个细胞/孔接种于96孔板,AMBMP(1–20 μM)37℃处理48小时;加入0.5 mg/mL MTT试剂孵育4小时,DMSO溶解甲臜结晶后,酶标仪检测570 nm吸光度,以溶媒处理组为基准计算细胞活力百分比[1] |
| 动物实验 |
化合物药代动力学测定
为进行药代动力学研究,采用不同的给药途径(皮下、腹腔、口服、食物内或灌胃)以两种不同的剂量(10 mg/kg 和 30 mg/kg)给予 AMBMP。分别于给药后 0.5 小时、1 小时、2 小时、4 小时和 6 小时通过心脏穿刺采集血液样本。血浆中化合物的浓度由 Integrated Analytical Solutions, Inc. 进行分析。https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC7659555/ 冷冻肌肉提取物的 Seahorse 分析 对于 Seahorse 分析,将经 DMSO 或 AMBMP 处理的小鼠(每日腹腔注射 7.5 mg/kg)的冷冻比目鱼肌置于 200 mL 线粒体缓冲液(70 mM 蔗糖、220 mM 甘露醇、5 mM KH2PO4、5 mM MgCl2、1 mM EGTA、2 mM HEPES,用 KOH 调节 pH 至 7.4)中,在冰上用 Dounce 匀浆器手工匀浆。肌肉匀浆液在 4°C 下以 900×g 离心 5 分钟。将上清液转移至新的离心管中;使用 BCA 蛋白测定试剂盒测定蛋白浓度。样品(4 μg/孔)在加州大学洛杉矶分校线粒体和代谢核心实验室使用 Seahorse XF96 分析仪进行分析。数据以总蛋白量进行标准化。Seahorse 分析按照 Acin-Perez 等人的方法进行。https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC7659555/ 1. 非洲爪蟾胚胎轴复制实验:将非洲爪蟾卵子进行体外受精,并在 22°C 下于 0.1× Marc 改良林格氏液 (MMR) 中培养。在 4 细胞期,将腹侧卵裂球显微注射 AMBMP(50 μM,溶于 2 nL 0.1× MMR)或载体(0.1× MMR + 0.1% DMSO)。在拯救实验中,将显性负性TCF质粒(50 pg)与AMBMP共注射。将胚胎培养至蝌蚪期(35/36期),并在解剖显微镜下计数具有第二轴形成的胚胎百分比(每组n=50个胚胎)[1] 2.斑马鱼胚胎Wnt信号通路检测:通过自然产卵获得斑马鱼胚胎,并在28.5°C的E3培养基中培养。从单细胞期到24 hpf,用AMBMP(10 μM)或载体(E3培养基+0.1% DMSO)处理胚胎。使用地高辛标记的engrailed-2核糖探针进行全胚原位杂交,以检测Wnt靶基因的表达;对染色后的胚胎进行成像,并使用图像分析软件量化神经管中engrailed-2的表达强度[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 体外细胞毒性:AMBMP(≤20 μM)对 HEK293 细胞、小鼠 L 细胞或非洲爪蟾胚胎卵裂球均无显著细胞毒性(细胞/胚胎存活率 >90%)[1]
2. 胚胎毒性:AMBMP 在非洲爪蟾胚胎中浓度 >20 μM 时会导致发育停滞(30 μM 时 15% 的胚胎)和轻微畸形(例如尾部弯曲,25 μM 时 10% 的胚胎),但在浓度高达 50 μM 时未观察到致死毒性[1] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
N4-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基甲基)-6-(3-甲氧基苯基)嘧啶-2,4-二胺是嘧啶类化合物。
1. AMBMP(2-氨基-4-甲基-5-溴-6-苯基嘧啶)是第一个合成的Wnt信号通路小分子激动剂,它是在高通量筛选激活Wnt/β-catenin信号通路化合物的过程中发现的[1] 2. AMBMP通过直接抑制Wnt通路的关键负调控因子GSK-3β发挥其Wnt激活作用;抑制 GSK-3β 可阻止 β-catenin 的磷酸化和降解,从而导致 β-catenin 积累并激活 TCF/LEF 介导的 Wnt 靶基因转录 [1] 3. AMBMP 可诱导非洲爪蟾胚胎出现 Wnt 依赖性发育表型(轴重复),证实其作为 Wnt 激动剂的体内活性;该效应依赖于功能性 β-catenin/TCF 信号通路 [1] 4. AMBMP 是一种有价值的临床前研究工具,可用于研究 Wnt 信号通路在发育和疾病(例如癌症、神经退行性疾病)中的作用,因为 Wnt 通路失调与多种人类疾病相关 [1] |
| 分子式 |
C19H19CLN4O3
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|---|---|
| 分子量 |
350.37
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| 精确质量 |
350.137
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| 元素分析 |
C, 65.13; H, 5.18; N, 15.99; O, 13.70
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| CAS号 |
853220-52-7
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| 相关CAS号 |
BML-284 hydrochloride;2095432-75-8
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| PubChem CID |
11210285
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| 外观&性状 |
White to yellow solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
623.4±65.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
330.8±34.3 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.8 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.684
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| LogP |
3.72
|
| tPSA |
91.5
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
26
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| 分子复杂度/Complexity |
455
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
N1C(NCC2C=C3C(OCO3)=CC=2)=CC(C2C=C(OC)C=CC=2)=NC=1N
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| InChi Key |
FABQUVYDAXWUQP-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C19H18N4O3/c1-24-14-4-2-3-13(8-14)15-9-18(23-19(20)22-15)21-10-12-5-6-16-17(7-12)26-11-25-16/h2-9H,10-11H2,1H3,(H3,20,21,22,23)
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| 化学名 |
C19H18N4O3
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| 别名 |
AMBMP; BML284; BML 284; BML-284; Wnt Agonist
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ≥ 100 mg/mL (~285.41 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.8541 mL | 14.2706 mL | 28.5413 mL | |
| 5 mM | 0.5708 mL | 2.8541 mL | 5.7083 mL | |
| 10 mM | 0.2854 mL | 1.4271 mL | 2.8541 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。