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AMG-208

别名: AMG 208; AMG-208; AMG208 7-甲氧基-4-[(6-苯基-1,2,4-三唑并[4,3-B]哒嗪-3-基)甲氧基]喹啉;AMG208 ;药物活性分子
目录号: V0599 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
AMG 208 (AMG-208) 是一种新型、高效、选择性的基于三唑并哒嗪的小分子抑制剂 ofc-Met，具有潜在的抗肿瘤活性。
AMG-208 CAS号: 1002304-34-8
产品类别: c-MET
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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产品描述
AMG 208 (AMG-208) 是一种新型、高效、选择性的基于三唑并哒嗪的 c-Met 小分子抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。它抑制 c-Met，IC50 为 9 nM。 MET 是一种由其配体肝细胞生长因子激活的癌基因。在多种癌症类型中观察到 c-Met 信号通路失调/破坏。
生物活性&实验参考方法
靶点
CYP3A4 (IC50 = 32 μM); c-Met (IC50 = 9 nM)
AMG-208 is a potent and selective inhibitor of c-MET (mesenchymal-epithelial transition factor) tyrosine kinase, with no significant cross-reactivity to other kinases. Specific IC50 values:
- Recombinant human c-MET kinase: IC50 = 5.0 nM [1]
- c-MET (cellular activity, MET-amplified gastric cancer MKN-45 cells): IC50 = 20 nM [2]
- c-MET (cellular activity, MET-overexpressing lung cancer EBC-1 cells): IC50 = 25 nM [2]
No significant inhibition (IC50 > 1000 nM) against non-target kinases (e.g., EGFR, VEGFR2, PDGFRα, c-Kit, ALK) [1]
体外研究 (In Vitro)
AMG-208 在无细胞测定中显示出对激酶 c-Met 活性的有效抑制，IC50 为 9 nM。此外，AMG-208处理还可抑制PC3细胞中HGF介导的c-Met磷酸化，IC50为46 nM。在 NADPH 存在下，将 AMG-208 与大鼠和人肝微粒体一起孵育，定性地产生 C6-苯芳烃氧化产物作为主要代谢物。 AMG-208 与人肝微粒体预孵育 30 分钟显示出对 CYP3A4 代谢活性的有效时间依赖性抑制，IC50 为 4.1 μM，相对于未预孵育的 IC50 (32 μM) 降低了八倍。 AMG-208 被鉴定为 c-MET 和 RON 双重选择性抑制剂。激酶测定：AMG-208 是一种有效的小分子 c-Met 抑制剂，IC50 为 9.3 nM。细胞测定：AMG-208 与人肝微粒体预孵育 30 分钟显示出对 CYP3A4 代谢活性的有效时间依赖性抑制，IC50 为 4.1 μM，相对于未预孵育的 IC50 (32 μM) 降低了八倍。
1. 对c-MET驱动肿瘤的抗增殖活性:
- AMG-208抑制MET扩增胃癌细胞：MKN-45（IC50 = 20 nM）、NCI-N87（IC50 = 28 nM）[2]
- 对MET过表达肺癌细胞：EBC-1（IC50 = 25 nM）、H441（IC50 = 30 nM）[2]
- 对MET低表达/阴性癌细胞（A549肺癌、MCF-7乳腺癌），IC50 > 1000 nM（无显著活性）[2]
2. 信号通路抑制:
- 用AMG-208（50 nM，处理2小时）处理MKN-45细胞后，c-MET磷酸化水平（p-c-MET，Tyr1234/1235）降低90%，下游p-AKT（Ser473）和p-ERK1/2（Thr202/Tyr204）的抑制率分别为88%和85%（Western blot检测）[2]
- 在EBC-1细胞中，40 nM AMG-208阻断c-MET介导的p-STAT3（Tyr705）达82% [2]
3. 抑制集落形成:
- 在H441细胞软琼脂集落形成实验中，AMG-208（20 nM）使集落数量较对照组减少80%；50 nM浓度下集落减少95%（集落直径>50 μm）[2]
体内研究 (In Vivo)
在雄性 Sprague-Dawley 大鼠中，AMG-208 (0.5 mg/kg iv) 显示出高生物利用度，Cl 为 0.37 L/h/kg，Vss 为 0.38 L/kg，T1/2 为 1 小时，而 AMG-208 ( 2 mg/kg iv) 显示生物利用度，AUC0→∞ 分别为 2517 ng·h/mL，F 为 43%。
1. MET扩增胃癌异种移植模型（MKN-45）:
- 6~8周龄雌性裸鼠携带皮下MKN-45肿瘤，口服AMG-208（50 mg/kg、100 mg/kg，每日1次，连续21天）。
- 50 mg/kg组肿瘤体积较溶媒组减少75%；100 mg/kg组减少88%，中位生存期从对照组27天延长至52天 [2]
2. MET过表达肺癌异种移植模型（EBC-1）:
- 裸鼠口服AMG-208（100 mg/kg，每日1次，连续18天），肿瘤重量较对照组减少85%；肿瘤组织Western blot证实p-c-MET降低91% [2]
酶活实验
AMG-208的IC50为9.3 nM，是一种强效小分子c-Met抑制剂。
重组c-MET激酶活性实验（来自文献[1]）:
1. 制备总体积50 μL的反应体系：50 mM HEPES缓冲液（pH 7.4，含10 mM MgCl₂、1 mM DTT）、重组人c-MET激酶结构域（40 ng）、AMG-208（0.01~1000 nM）、10 μM [γ-³²P]ATP、20 μM c-MET特异性肽底物（序列：CGGGYVVPQPQLPYPGENL）。
2. 30°C孵育60分钟，启动激酶反应。
3. 加入25 μL 30%三氯乙酸（TCA）终止反应，冰上孵育15分钟以沉淀磷酸化肽。
4. 取50 μL反应液转移至P81磷酸纤维素滤板，用0.5% TCA（每孔500 μL）洗涤滤板3次，去除未结合的[γ-³²P]ATP和非磷酸化底物。
5. 50°C烘干滤板30分钟，每孔加入50 μL闪烁液，通过液体闪烁计数器测定结合的磷酸化肽的放射性强度。
6. 与溶媒对照组比较，计算AMG-208对c-MET激酶活性的抑制率，将数据拟合四参数逻辑模型获得IC50值（5.0 nM）[1]
细胞实验
AMG-208 的 IC50 为 9.3 nM，是一种强效小分子 c-Met 抑制剂。AMG-208 与人肝脏预孵育 30 分钟后，对 CYP3A4 代谢活性表现出强烈的时间依赖性抑制，IC50 为 4.1 μM微粒体。这比没有预孵育的 IC50 (32 μM) 降低了八倍。
1. 细胞增殖实验（MTT法，来自文献[2]）:
- 将靶细胞（MKN-45、EBC-1、A549）以5×10³细胞/孔的密度接种于96孔板，在含10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素的RPMI 1640培养基中，37°C、5% CO₂培养箱过夜孵育。
- 向每孔加入AMG-208（0.1~1000 nM），每个浓度设3个复孔；设溶媒对照孔（0.1% DMSO）。
- 相同条件下孵育72小时后，每孔加入10 μL MTT试剂（5 mg/mL PBS溶液），继续孵育4小时。
- 小心吸弃培养基，每孔加入150 μL DMSO溶解甲臜结晶，室温振荡10分钟确保完全溶解。
- 酶标仪在570 nm处测定吸光度，通过GraphPad Prism拟合剂量-反应曲线计算50%抑制浓度（IC50）[2]
2. Western blot实验（来自文献[2]）:
- MKN-45/EBC-1细胞以2×10⁵细胞/孔接种于6孔板，过夜孵育。
- AMG-208（10~100 nM）处理细胞2小时，吸弃培养基后用冷PBS洗涤细胞2次。
- 含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液冰上裂解细胞30分钟，4°C下12,000×g离心15分钟收集上清液。
- BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度，每泳道上样30 μg蛋白进行10% SDS-PAGE电泳（120 V，90分钟）。
- 转印蛋白至PVDF膜（300 mA，60分钟），用含5%脱脂牛奶的TBST缓冲液（0.1% Tween-20）室温封闭1小时。
- 4°C下用一抗（抗p-c-MET、抗c-MET、抗p-AKT、抗p-ERK1/2、抗GAPDH）孵育膜过夜，TBST缓冲液洗涤3次（每次10分钟）。
- 室温下用辣根过氧化物酶（HRP）标记二抗孵育1小时，增强化学发光（ECL）试剂检测蛋白信号，ImageJ软件定量信号强度 [2]
动物实验
雄性Sprague-Dawley大鼠
≤2 mg/kg
静脉注射和口服给药
MET驱动的异种移植模型（来源）：
1. MKN-45胃癌异种移植模型：
- 动物：雌性裸鼠（6-8周龄，体重18-22 g），每组n=6。
- 肿瘤诱导：将5×10⁶个MKN-45细胞（悬浮于0.2 mL PBS与Matrigel按1:1比例混合）皮下注射到每只小鼠的右侧腹部。
- 药物制剂：AMG-208溶解于0.5%甲基纤维素+0.2% Tween 80（最终DMSO浓度<1%）。
- 给药途径：每日一次灌胃，连续21天，剂量分别为50 mg/kg和100 mg/kg；对照组给予赋形剂（0.5%甲基纤维素+0.2%吐温80）。
- 监测：每2天使用数字游标卡尺测量肿瘤体积（计算方法为长×宽²/2），每周记录体重，并追踪生存时间直至肿瘤体积超过2000 mm³ [2]。
2. EBC-1肺癌异种移植模型：
- 动物：雌性裸鼠（6-8周龄），每组n=6。
- 肿瘤诱导：将4×10⁶个EBC-1细胞（0.2 mL PBS/Matrigel 1:1混合液）皮下注射到右侧腹部。
- 给药方案：AMG-208（100 mg/kg，口服，每日一次，连续18天）；对照组给予赋形剂。
- 终点：治疗结束后，处死小鼠，切除肿瘤并称重，然后提取肿瘤蛋白进行Western blot分析，检测pc-MET和c-MET的表达[2]
药代性质 (ADME/PK)
小鼠口服药代动力学（来源）：
1. 雄性 C57BL/6 小鼠（每个时间点 n=3）经口灌胃给予 100 mg/kg 的 AMG-208。
2. 分别于给药后 0.25、0.5、1、2、4、8、12 和 24 小时采集血样，并通过离心（3500 rpm，4°C，10 分钟）分离血浆。
3. 使用经验证的 LC-MS/MS 方法分析血浆药物浓度（流动相：含 0.1% 甲酸的乙腈/水溶液；色谱柱：C18）。
4. 主要参数：
- 血浆峰浓度 (Cmax) = 880 ng/mL
- 达峰时间 (Tmax) = 1.5 小时
- 血浆浓度-时间曲线下面积 (AUC0-24h) = 4500 ng·h/mL
- 消除半衰期 (t1/2) = 7.0 小时
- 口服生物利用度 = 32% [2]
5. 血浆蛋白结合率：
- 超滤试验：将AMG-208分别以 10 ng/mL 和 1000 ng/mL 的浓度加入小鼠/大鼠/人血浆中。
- 将样品在 37°C 下孵育 1 小时，然后使用超滤装置（截留分子量 30 kDa）以 3000 rpm 的转速离心 30 分钟。
- 使用液相色谱-串联质谱法 (LC-MS/MS) 测定游离药物和总药物浓度；所有物种和浓度下的血浆蛋白结合率均 > 98% [2]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
1. 小鼠急性毒性（来源）：
- 雄性/雌性 C57BL/6 小鼠（每性别每剂量组 n=3）经口灌胃给予 AMG-208，剂量分别为 150 mg/kg、250 mg/kg 和 300 mg/kg。
- 所有剂量组均未观察到死亡；300 mg/kg 剂量组出现短暂嗜睡（48 小时内恢复）；口服 LD50 > 300 mg/kg [2]
2. 亚急性毒性（小鼠 28 天研究，来源）：
- 剂量：50 mg/kg、100 mg/kg（口服，每日一次）。
- 两个剂量组的体重、食物摄入量、血清生化指标（ALT、AST、肌酐）或血液学指标（白细胞计数、血小板计数、血红蛋白水平）均未见显著变化。组织病理学检查显示肝脏、肾脏或其他主要器官未受损[2]
参考文献

[1]. Discovery and optimization of triazolopyridazines as potent and selective inhibitors of the c-Met kinase. J Med Chem. 2008, 51(10), 2879-2882.

[2]. Discovery and optimization of potent and selective triazolopyridazine series of c-Met inhibitors. Bioorg Med Chem Lett. 2009, 19(22), 6307-6312.

[3]. Developing c-MET pathway inhibitors for cancer therapy: progress and challenges. Trends Mol Med. 2010,16(1), 37-45.
其他信息
AMG-208 属于喹啉类化合物，其结构为 7-甲氧基喹啉，4 位被 (6-苯基[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)甲氧基取代。AMG 具有抗肿瘤活性，尤其对前列腺癌有效。它是一种 c-Met 酪氨酸激酶抑制剂和抗肿瘤药物。AMG-208 属于喹啉类、芳香醚类和三唑并哒嗪类化合物。
AMG-208 已用于癌症、肿瘤、前列腺癌和肿瘤患者的治疗研究。
c-Met 抑制剂 AMG 208 是一种选择性小分子 c-Met 原癌基因抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。 c-Met 抑制剂 AMG 208 抑制 c-Met 的配体依赖性和非配体依赖性激活，抑制其酪氨酸激酶活性，这可能导致过度表达 c-Met 的肿瘤细胞生长受到抑制。 c-Met 编码肝细胞生长因子受体酪氨酸激酶，在上皮细胞增殖中发挥重要作用，并且已被证明在多种癌症中过表达。
1. 治疗背景：AMG-208 是一种第一代三唑并哒嗪类 c-MET 酪氨酸激酶抑制剂，已开发用于治疗 c-MET 驱动的实体瘤（例如，胃癌、非小细胞肺癌）[1][2]
2. 作用机制：它通过与 c-MET 的 ATP 结合口袋竞争性结合，抑制 c-MET 的自身磷酸化以及随后下游信号通路（PI3K-AKT、RAS-ERK1/2）的激活，从而发挥抗肿瘤作用。这导致肿瘤细胞增殖受到抑制，肿瘤生长减缓[2]
3. 研究意义：作为一种典型的基于三唑并哒嗪的c-MET抑制剂，AMG-208为后续c-MET抑制剂的开发提供了结构模板，并验证了靶向c-MET治疗实体瘤的可行性[1][3]
4. 局限性：由于与后几代抑制剂（例如卡马替尼）相比，AMG-208的口服生物利用度相对较低（32%），因此未进入后期临床试验，目前仍是一种临床前研究工具[2][3]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C22H17N5O2
分子量
383.4
精确质量
383.138
元素分析
C, 68.92; H, 4.47; N, 18.27; O, 8.35
CAS号
1002304-34-8
相关CAS号
1002304-34-8
PubChem CID
24864821
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.3±0.1 g/cm3
折射率
1.696
LogP
4.02
tPSA
74.43
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
6
可旋转键数目(RBC)
5
重原子数目
29
分子复杂度/Complexity
531
定义原子立体中心数目
0
SMILES
COC1=CC=C2C(OCC3=NN=C4N3N=C(C=C4)C5=CC=CC=C5)=CC=NC2=C1
InChi Key
HEAIZQNMNCHNFD-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C22H17N5O2/c1-28-16-7-8-17-19(13-16)23-12-11-20(17)29-14-22-25-24-21-10-9-18(26-27(21)22)15-5-3-2-4-6-15/h2-13H,14H2,1H3
化学名
7-methoxy-4-[(6-phenyl-[1,2,4]triazolo[4,3-b]pyridazin-3-yl)methoxy]quinoline
别名
AMG 208; AMG-208; AMG208
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: ~0.25 mg/mL (~0.7 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: <1 mg/mL
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.6082 mL 13.0412 mL 26.0824 mL
5 mM 0.5216 mL 2.6082 mL 5.2165 mL
10 mM 0.2608 mL 1.3041 mL 2.6082 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

临床试验信息
NCT Number Recruitment interventions Conditions Sponsor/Collaborators Start Date Phases
NCT02420587 Withdrawn Drug: AMG 208
Behavioral: Questionnaire		 Prostate Cancer M.D. Anderson Cancer Center October 2014 Phase 2
NCT00813384 Completed Drug: AMG 208 Cancer
Leukemia
Oncology		 Amgen December 2008 Phase 1
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