| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
AMG 333 targets transient receptor potential melastatin 8 (TRPM8) ion channel (human TRPM8: Ki = 6.9 nM for [³H]icilin binding [1]
; IC50 = 14 nM for menthol-induced calcium influx inhibition in TRPM8-expressing HEK293 cells [1] ; IC50 = 22 nM for icilin-induced TRPM8 activation inhibition [1] ; no significant binding/inhibition of other TRP channels (TRPV1, TRPA1, TRPM3) or voltage-gated ion channels (Nav1.7, Cav2.2) with IC50 > 1000 nM [1] ) |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
1. AMG 333是强效、选择性的人TRPM8竞争性拮抗剂，抑制[³H]icilin与TRPM8的结合，Ki为6.9 nM；在稳定表达TRPM8的HEK293细胞中，通过荧光钙成像检测发现，其可剂量依赖性阻断薄荷醇诱导的钙内流（IC50=14 nM）和icilin诱导的钙动员（IC50=22 nM）[1]
2. 在表达TRPM8的HEK293细胞中进行膜片钳电生理实验，结果显示AMG 333（0.01-1 μM）抑制薄荷醇诱导的TRPM8电流，IC50为18 nM，且在100 nM浓度下可完全阻断通道活性[1] 3. AMG 333对TRPM8具有高度选择性：在浓度高达1 μM时，对辣椒素诱导的TRPV1、异硫氰酸烯丙酯诱导的TRPA1或孕烯醇酮硫酸盐诱导的TRPM3均无抑制作用；对电压门控钠通道（Nav1.7）和钙通道（Cav2.2）的活性可忽略不计（IC50>10 μM）[1] 4. 在人三叉神经节（TG）神经元中，100 nM的AMG 333可抑制85%的TRPM8阳性神经元中冷刺激（10℃）诱导的钙内流，而对TRPM8阴性的TG神经元无影响[1] 5. 细胞活力实验（MTT法）显示，AMG 333在浓度高达10 μM时，对HEK293细胞和原代人TG神经元无细胞毒性，24小时处理后细胞活力>95%[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
1. 在大鼠硝酸甘油（NTG）诱导的偏头痛模型中，口服AMG 333（1、3、10 mg/kg）可剂量依赖性减少NTG诱导的三叉神经激活（通过三叉神经尾核（TNC）中c-Fos表达检测），抑制率分别为35%、62%和80%；10 mg/kg剂量在给药后2小时还能使NTG诱导的机械性异常痛敏（von Frey实验）降低75%[1]
2. 在小鼠冷诱导的面部疼痛模型中，AMG 333（3、10 mg/kg口服）分别抑制40%和65%的冷诱发面部理毛行为，证实其可阻断TRPM8介导的伤害性感受[1] 3. 在食蟹猴中，静脉注射AMG 333（1、3 mg/kg）可使三叉神经节（TG）神经元放电频率分别降低58%和72%（通过在体细胞外电生理记录），药效持续至给药后4小时[1] 4. 在大鼠体内，AMG 333（10 mg/kg口服）具有良好的中枢穿透性，给药后1小时三叉神经尾核（TNC）/血浆比值为0.8，且中枢浓度在6小时内均高于TRPM8抑制的体外IC50（14 nM）[1] |
| 酶活实验 |
1. TRPM8放射性配体结合实验：制备稳定表达人TRPM8的HEK293细胞膜蛋白，将其与[³H]icilin（0.5 nM）及系列稀释的AMG 333（0.001-1 μM）在结合缓冲液中4℃孵育120分钟；通过玻璃纤维滤膜真空过滤分离结合型与游离型配体；利用液体闪烁计数仪检测滤膜结合部分的放射性，依据竞争结合曲线并通过Cheng-Prusoff方程计算Ki值[1]
2. TRPM8表面等离子体共振（SPR）结合实验：将重组人TRPM8胞外域蛋白固定在CM5传感器芯片上；在25℃下以30 μL/min的流速将系列稀释的AMG 333（0.001-1 μM）注射到芯片表面；实时记录结合响应值（共振单位，RU），采用1:1结合模型确定动力学参数（ka、kd、KD），以证实其与TRPM8的直接相互作用[1] 3. TRPM8钙流功能实验：将稳定表达人TRPM8的HEK293细胞用荧光钙指示剂（Fura-2 AM）负载45分钟（37℃）；加入AMG 333（0.001-1 μM）孵育20分钟后，用薄荷醇（100 μM）或icilin（1 μM）刺激；通过比率荧光法（激发光340/380 nm，发射光510 nm）检测细胞内钙浓度，从剂量-反应曲线计算抑制作用的IC50值[1] |
| 细胞实验 |
1. 表达TRPM8的HEK293细胞钙内流实验：将稳定转染人TRPM8的HEK293细胞以1×10⁴个/孔的密度接种于96孔黑壁板，培养至80%汇合度；用含0.1% BSA的HBSS缓冲液配制5 μM的Fura-2 AM，负载细胞45分钟（37℃），每15分钟轻柔摇晃一次；洗涤去除多余染料后，向各孔加入系列稀释的AMG 333（0.001-1 μM）；孵育20分钟后，加入薄荷醇（100 μM）或icilin（1 μM）激活TRPM8，利用酶标仪每2秒记录一次荧光比率（340/380 nm），持续5分钟；将数据归一化至载体处理细胞的最大响应值，计算IC50值[1]
2. 人三叉神经节神经元钙成像实验：分离原代人TG神经元并接种于聚-L-赖氨酸包被的盖玻片上；用4 μM的Fluo-4 AM负载神经元30分钟（37℃），洗涤后与AMG 333（0.01-1 μM）孵育15分钟；施加冷刺激（10℃）或薄荷醇（100 μM）激活TRPM8，通过共聚焦显微镜捕获荧光信号（激发光488 nm，发射光525 nm）；量化TRPM8阳性神经元的比例（对冷/薄荷醇有响应）和钙内流的幅度，计算AMG 333的抑制率[1] 3. 细胞活力实验：将HEK293细胞和原代人TG神经元以5×10³个/孔的密度接种于96孔板，用AMG 333（0.01-10 μM）在37℃、5% CO₂条件下处理24小时；加入0.5 mg/mL的MTT试剂孵育4小时，去除培养基后加入DMSO溶解甲臜结晶；在570 nm处检测吸光度，计算相对于载体处理对照组的细胞活力[1] |
| 动物实验 |
1. 大鼠硝酸甘油 (NTG) 诱导偏头痛模型：雄性 Sprague-Dawley 大鼠 (250-300 g) 在实验室适应 7 天；AMG 333 配制于 0.5% 甲基纤维素 + 0.1% Tween 80 中，并在 NTG 注射（10 mg/kg 腹腔注射）前 1 小时通过灌胃法给予 1、3 或 10 mg/kg（体积：5 mL/kg）；NTG 给药 4 小时后，处死大鼠，并收集三叉神经尾核 (TNC) 组织进行 c-Fos 免疫组织化学染色；在注射 NTG 后 1、2 和 4 小时，使用 von Frey 纤维（0.4-15 g）评估机械性痛觉过敏，并记录缩回阈值[1]
2. 小鼠冷诱导面部疼痛模型：雌性 C57BL/6 小鼠（20-25 g）在暴露于冷刺激（4°C 金属板应用于面部 1 分钟）前 30 分钟接受 AMG 333（3、10 mg/kg 口服）或载体治疗；刺激后 5 分钟内记录面部梳理行为（每分钟梳理次数），并计算相对于载体对照组的抑制率[1] 3. 食蟹猴三叉神经节电生理模型：成年食蟹猴（3-5 kg）用异氟烷麻醉，将微电极植入三叉神经节 (TG) 进行细胞外单单位记录；AMG 333溶解于 5% 葡萄糖溶液中，并以 1 或 3 mg/kg 的剂量静脉注射；给药后连续记录 6 小时的神经元放电率，并在 1、2、4 和 6 小时计算放电率降低百分比（与基线相比）[1] 4. 大鼠药代动力学 (PK) 组织分布研究：雄性 Sprague-Dawley 大鼠接受 AMG 333（10 mg/kg 口服或 1 mg/kg 静脉注射）；在给药后 0.25、0.5、1、2、4、6 和 8 小时采集血样，并通过离心分离血浆；在相同时间点采集脑组织（TNC、大脑皮层），在 PBS 中匀浆，并用乙腈沉淀蛋白质；采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)定量分析血浆和组织匀浆中的AMG 333浓度，并计算药代动力学参数（Cmax、Tmax、AUC、组织/血浆比值）[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
1. 在雄性 Sprague-Dawley 大鼠中，口服 AMG 333 (10 mg/kg) 后，1 小时 (Tmax) 血浆峰浓度 (Cmax) 为 320 nM，口服生物利用度 (F) 为 78%，末端半衰期 (t1/2) 为 3.6 小时，分布容积 (Vd) 为 1.2 L/kg，总清除率 (CL) 为 0.3 L/h/kg [1]
2. 在大鼠中静脉注射 AMG 333 (1 mg/kg) 后，t1/2 为 2.8 小时，Vd 为 1.5 L/kg，CL 为 0.4 L/h/kg；该药物表现出良好的中枢神经系统穿透性，给药后 1 小时，三叉神经尾核 (TNC)/血浆比值为 0.8，大脑皮层/血浆比值为 0.6 [1] 3. 在人肝微粒体中，AMG 333 主要通过氧化脱烷基化和羟基化作用，由 CYP3A4 (65%) 和 CYP2C9 (25%) 代谢；主要代谢物 (M1) 对 TRPM8 无活性 (IC50 > 1 μM) [1] 4. 在食蟹猴中，口服 AMG 333 (3 mg/kg) 的 Cmax 为 280 nM (Tmax = 1.5 小时)，t1/2 = 4.2 小时，F = 65%；每日一次给药5天后达到稳态浓度，未观察到药物蓄积[1] 5. 48小时内，大鼠尿液和粪便中原形药物的排出量不足10%；大部分剂量（80%）以代谢物形式排出，其中粪便排泄量（60%）高于尿液排泄量（20%）[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. AMG 333 在大鼠、猴和人血浆中均表现出较高的血浆蛋白结合率（分别为 92%、94% 和 96%）[1]
2. 体外 CYP450 抑制试验表明，AMG 333 在浓度高达 10 μM 时不抑制 CYP1A2、CYP2C19、CYP2D6 或 CYP2E1；它对 CYP3A4 (IC50 = 8.5 μM) 和 CYP2C9 (IC50 = 9.2 μM) 的抑制作用较弱，表明药物相互作用的风险较低[1] 3. 在 CD-1 小鼠中进行的急性毒性研究表明，口服剂量高达 1000 mg/kg 或静脉注射剂量高达 100 mg/kg 时，未观察到死亡或明显的毒性；亚慢性毒性试验（大鼠连续28天口服给药，剂量分别为30和100 mg/kg/天）显示，体重、食物摄入量或肝肾功能指标（ALT、AST、BUN、肌酐）均无显著变化[1] 4. 在接受AMG 333治疗的食蟹猴（10 mg/kg/天口服，持续28天）中，未观察到对心血管参数（心率、血压）或神经功能的不良影响；主要器官（肝脏、肾脏、脑、三叉神经节）的组织病理学检查显示，未发现与治疗相关的病变[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
1. AMG 333 是一种首创的强效选择性 TRPM8 拮抗剂，被开发为治疗急性偏头痛的临床候选药物[1]。2. AMG 333 的作用机制包括与 TRPM8 离子通道孔区竞争性结合，阻断冷/薄荷醇诱导的通道激活，并抑制三叉神经敏化——这是偏头痛发病机制中的关键病理步骤[1]。3. AMG 333 已进入针对健康志愿者的偏头痛 I 期临床试验，结果显示其具有良好的安全性、耐受性和药代动力学特征，在高达 600 mg 的剂量下未观察到剂量限制性毒性[1]。4. 临床前数据显示，AMG 333 通过靶向三叉神经血管系统，在多种偏头痛模型中均有效，并且具有高度选择性。 TRPM8 可最大限度地减少脱靶效应（例如，在治疗剂量下对体温调节无影响）[1]
5. AMG 333 也正在被研究用于治疗其他 TRPM8 介导的疼痛疾病（例如，神经性疼痛中的冷触诱痛），在化疗诱导的周围神经病变啮齿动物模型中观察到了临床前疗效[1] |
| 分子式 |
C20H12F5N3O4
|
|---|---|
| 分子量 |
453.319002151489
|
| 精确质量 |
453.074
|
| CAS号 |
1416799-28-4
|
| PubChem CID |
71144018
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| LogP |
3.5
|
| tPSA |
101
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
11
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
32
|
| 分子复杂度/Complexity |
668
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
|
| SMILES |
FC1=CC=CN=C1C(C1C=CC(=C(C=1)F)OC(F)(F)F)NC(C1C=CC(C(=O)O)=CN=1)=O
|
| InChi Key |
QEBYISWYMFIXOZ-INIZCTEOSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C20H12F5N3O4/c21-12-2-1-7-26-17(12)16(10-4-6-15(13(22)8-10)32-20(23,24)25)28-18(29)14-5-3-11(9-27-14)19(30)31/h1-9,16H,(H,28,29)(H,30,31)/t16-/m0/s1
|
| 化学名 |
(S)-6-(((3-fluoro-4-(trifluoromethoxy)phenyl)(3-fluoropyridin-2-yl)methyl)carbamoyl)nicotinic acid
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| 别名 |
AMG-333; AMG 333; AMG333
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ≥ 125 mg/mL (~275.74 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.17 mg/mL (4.79 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 21.7 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.17 mg/mL (4.79 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 21.7 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.17 mg/mL (4.79 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2059 mL | 11.0297 mL | 22.0595 mL | |
| 5 mM | 0.4412 mL | 2.2059 mL | 4.4119 mL | |
| 10 mM | 0.2206 mL | 1.1030 mL | 2.2059 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
L-R4W2 acetate
TRPM2-IN-1
TRPA1-IN-4
TRPA1 agonist-1
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