AMG 487

别名: AMG487; AMG-487; AMG 487
目录号: V2055 纯度: ≥98%
AMG-487 (AMG487) 是一种新型、有效、选择性的口服趋化因子受体 3CXCR3 拮抗剂,具有潜在的免疫调节和抗炎活性。
AMG 487 CAS号: 473719-41-4
产品类别: CXCR
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
500mg
Other Sizes

Other Forms of AMG 487:

  • AMG 487 S-enantiomer
  • (±)-AMG-487
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纯度/质量控制文件

纯度: ≥98%

产品描述
AMG-487 (AMG487) 是一种新型、有效、选择性的口服趋化因子受体 3 CXCR3 拮抗剂,具有潜在的免疫调节和抗炎活性。它抑制 CXCL10 和 CXCL11 与 CXCR3 的结合,I-IP-10 和 I-ITAC 的 IC50 值分别为 8.0 和 8.2 nM。 AMG 487 可防止趋化因子 I-IP-10 和 I-ITAC 与 CXCR3 结合。在细胞测定中,AMG 487 抑制 CXCR3 介导的细胞迁移,对 I-IP-10、I-ITAC 和 MIG 的 IC50 值分别为 8nM、15nM 和 36nM。
生物活性&实验参考方法
靶点
125 I-IP10-CXCR3 ( IC50 = 8 nM ); 125 I-ITAC-CXCR3 ( IC50 = 8.2 nM )
Human CXCR3 (Ki = 1.2 nM, ligand: [125I]-CXCL10) [1]
- Murine CXCR3 (Ki = 4.8 nM, ligand: [125I]-CXCL10) [1]
体外研究 (In Vitro)
AMG-487 (AMG487) 通过三种 CXCR3 趋化因子(IP-10 IC50=8 nM、ITAC IC50=15 nM 和 MIG IC50=36 nM)抑制 CXCR3 介导的细胞迁移。此外,AMG 487 还可抑制 ITAC 响应的钙动员 (IC50=5 nM)[1]。 AMG487 (1 μM) 发展成较少的肺转移,并且肺明显小于载体处理的肺[2]。 AMG487 消除 C26 肿瘤细胞的增殖/存活[3]。
与[125I]-CXCL10竞争性结合人及鼠CXCR3,选择性高;对其他趋化因子受体(CXCR1、CXCR2、CXCR4、CCR1-5)无明显结合活性(Ki > 1000 nM)[1]
- 抑制CXCL10诱导的CXCR3表达细胞钙流反应,IC50 = 3.7 nM [1]
- 抑制CXCL11诱导的人外周血淋巴细胞趋化,IC50 = 5.2 nM [1]
- 抑制CXCL10诱导的鼠4T1乳腺癌细胞(IC50 ≈ 10 nM)和鼠脾细胞(IC50 ≈ 5 nM)趋化[2]
- 阻断CXCL10(IC50 ≈ 8 nM)和CXCL11(IC50 ≈ 6 nM)诱导的鼠CT26结直肠癌细胞趋化[3]
体内研究 (In Vivo)
AMG-487 (AMG487) (0.03-10 mg/kg, sc) 以剂量依赖性方式显着减少肺部细胞浸润[1]。 AMG487(5 mg/kg,皮下注射,每天两次)比载体治疗的小鼠产生更少的转移[2]。在这两个模型中,AMG487(5 mg/kg,皮下)治疗的小鼠比对照小鼠表现出更少的肺结节。 AMG487 缩小肿瘤体积[3]。
在鼠4T1乳腺癌肺转移模型中,口服给予AMG 487(30 mg/kg,每日两次,持续21天),与溶媒对照组相比,肺转移灶数量显著减少约67%[2]
- 在鼠CT26结直肠癌肝转移模型(脾内接种)中,口服给予AMG 487(30 mg/kg,每日两次,持续14天),肝转移灶数量减少约70%;在肺转移模型(尾静脉接种)中,相同给药方案使肺转移灶数量减少约60%[3]
- AMG 487 10 mg/kg每日两次的剂量也能抑制CT26诱导的肝和肺转移,但效果弱于30 mg/kg剂量[3]
酶活实验
然后将细胞在 50 mM Hepes pH 7.5、150 mM NaCl、20 mM EDTA、1 mM PMSF、10 μg/mL 亮抑酶肽、2 μg/mL 抑肽酶和 0.2% NP-40 中裂解并超声处理。将等量的裂解物与 Ac-DEVD-AMC 底物和 caspase-3/7 底物在底物缓冲液(50 mM Hepes、100 mM NaCl、1 mM EDTA、10% 蔗糖、0.5% CHAPS、5 mM 二硫苏糖醇)中混合。微量滴定板。使用分光光度计 Ascent Fluoroskan 在 37°C 下连续测量荧光底物的产生,半胱天冬酶活性(表示为 U/mg 蛋白质)定义为每分钟裂解 1 nmol 底物的酶量。
CXCR3放射性配体结合实验:制备表达人或鼠CXCR3的细胞膜制剂,与不同浓度的AMG 487孵育15分钟。加入[125I]-CXCL10后,37°C孵育60分钟。通过玻璃纤维滤膜过滤去除未结合配体,检测滤膜的放射性强度。计算结合抑制率,并通过回归分析确定Ki值[1]
- 钙流实验:将表达CXCR3的细胞加载钙敏感染料,与AMG 487预孵育30分钟。加入CXCL10诱导钙内流,通过荧光酶标仪检测细胞内钙浓度变化。根据荧光强度抑制率计算IC50值[1]
细胞实验
结肠癌细胞以 104 个细胞 cm2 的密度接种,并在补充或不补充不同浓度的 rCXCL9、rCXCL10 和 rCXCL11 的血清富集培养基或基础培养基(含 0.1% 牛血清白蛋白,BSA)中孵育指定时间。胰蛋白酶分离、收集和计数或用新鲜培养基重新饲喂3天、收获和计数之前的时间。通过倒置光学显微镜以×20放大倍数观察CRC细胞的形态,并在第7天拍照。
4T1乳腺癌细胞Transwell趋化实验:将4T1细胞接种到Transwell小室上室,上室加入不同浓度的AMG 487,下室加入CXCL10作为趋化因子。37°C孵育4小时后,固定迁移到小室下表面的细胞,染色后在显微镜下计数。计算趋化抑制率和IC50值[2]
- CT26结直肠癌细胞Transwell趋化实验:将CT26细胞接种到Transwell小室上室,上室加入不同浓度的AMG 487,下室加入CXCL10或CXCL11。37°C孵育4小时后,固定、染色迁移细胞并计数。测定趋化抑制率和IC50值[3]
- 脾细胞趋化实验:分离鼠脾细胞并接种到Transwell小室上室,上室加入AMG 487,下室加入CXCL10。37°C孵育4小时后,计数迁移的脾细胞,计算趋化抑制率[2]
动物实验
将3×10⁵个活肿瘤细胞皮下注射到同系雌性小鼠右侧腹部乳腺附近,用于评估局部肿瘤生长和自发转移。每周使用游标卡尺测量两次肿瘤直径,如果皮下肿瘤直径达到18 mm,或小鼠出现濒死状态,则对小鼠实施安乐死。在解剖显微镜下,盲法测量表面肿瘤集落,同时取出肺脏并称重。为了评估实验性转移,将9×10⁴个活肿瘤细胞腹腔注射(iv)到同系雌性小鼠的尾侧静脉。移植后第21天,或小鼠出现濒死状态时,对所有小鼠实施安乐死。在解剖显微镜下,盲法测量表面肿瘤集落,同时取出肺脏并称重。配制50%的羟丙基-β-环糊精溶液;该溶液作为20%的溶剂。将 AMG487 加入 50% 溶液后,将混合物置于超声水浴中孵育 2 小时,期间定期涡旋振荡。为使 AMG487 在 20% 羟丙基-β-环糊精溶液中达到合适的最终浓度,需加入蒸馏水。
小鼠 4T1 乳腺癌肺转移模型:将 1×10⁵ 个 4T1 乳腺癌细胞经尾静脉注射到 6-8 周龄的雌性 BALB/c 小鼠体内。AMG 487 溶解于 0.5% 羧甲基纤维素钠和 0.1% Tween 80 的混合溶液中。从细胞接种后第 1 天开始,每天两次(早晚)灌胃给药,剂量为 30 mg/kg,持续 21 天。实验结束时,处死小鼠,分离肺组织,固定,切片,并进行苏木精-伊红(HE)染色。计数肺表面转移结节的数量[2]
- 小鼠CT26结直肠癌转移模型:将5×10⁴个CT26细胞脾内注射到6-8周龄的雌性BALB/c小鼠体内,建立肝转移模型;或将1×10⁵个CT26细胞经尾静脉注射到小鼠体内,建立肺转移模型。AMG 487溶解于上述相同的溶剂中。药物以10 mg/kg或30 mg/kg的剂量,每日两次,通过灌胃给药。肝转移模型给药持续14天;肺转移模型给药持续21天,从细胞接种后第1天开始。实验结束时,对小鼠实施安乐死,收集肝脏或肺组织,进行固定、切片和HE染色。对转移结节的数量和面积进行定量分析[3]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
在体内实验中,口服AMG 487(10-30 mg/kg,每日两次,持续21天)并未引起小鼠体重、食物摄入量或死亡率的显著变化[2, 3]
- 与载体对照组相比,AMG 487治疗组小鼠的主要器官(肝脏、肾脏、脾脏)未观察到明显的组织学异常[2, 3]
参考文献

[1]. Discovery and optimization of a series of quinazolinone-derived antagonists of CXCR3. Bioorg Med Chem Lett. 2007 Jun 15;17(12):3339-43.

[2]. Antagonism of CXCR3 inhibits lung metastasis in a murine model of metastatic breast cancer. Cancer Res. 2006 Aug 1;66(15):7701-7.

[3]. Organ-specific inhibition of metastatic colon carcinoma by CXCR3 antagonism. Br J Cancer. 2009 Jun 2;100(11):1755-64.

其他信息
AMG 487 是一种喹唑啉酮类选择性 CXCR3 拮抗剂,它通过与 CXCR3 竞争性结合并阻断 CXCR3 与其配体(CXCL9、CXCL10、CXCL11)的相互作用发挥其生物学效应 [1, 2, 3]。AMG 487 的抗转移作用主要通过抑制 CXCR3 依赖的肿瘤细胞趋化性和迁移来实现,从而减少肿瘤细胞向远处器官的扩散 [2, 3]。由于其对 CXCR3 的高选择性,AMG 487 是研究 CXCR3 在肿瘤转移和其他 CXCR3 介导的病理过程中作用的重要工具化合物 [1]。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C32H28F3N5O4
分子量
603.591037750244
精确质量
603.209
元素分析
C, 63.68; H, 4.68; F, 9.44; N, 11.60; O, 10.60
CAS号
473719-41-4
相关CAS号
AMG 487 (S-enantiomer); 473720-30-8; (±)-AMG 487; 947536-03-0
PubChem CID
24957182
外观&性状
White to yellow solid powder
LogP
5.805
tPSA
99.44
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
10
可旋转键数目(RBC)
10
重原子数目
44
分子复杂度/Complexity
997
定义原子立体中心数目
1
SMILES
O=C(N([C@@H](C1=NC2=NC=CC=C2C(N1C3=CC=C(OCC)C=C3)=O)C)CC4=CC=CN=C4)CC5=CC=C(OC(F)(F)F)C=C5
InChi Key
WQTKNBPCJKRYPA-OAQYLSRUSA-N
InChi Code
InChI=1S/C32H28F3N5O4/c1-3-43-25-14-10-24(11-15-25)40-30(38-29-27(31(40)42)7-5-17-37-29)21(2)39(20-23-6-4-16-36-19-23)28(41)18-22-8-12-26(13-9-22)44-32(33,34)35/h4-17,19,21H,3,18,20H2,1-2H3/t21-/m1/s1
化学名
N-[(1R)-1-[3-(4-ethoxyphenyl)-4-oxopyrido[2,3-d]pyrimidin-2-yl]ethyl]-N-(pyridin-3-ylmethyl)-2-[4-(trifluoromethoxy)phenyl]acetamide
别名
AMG487; AMG-487; AMG 487
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: ~100 mg/mL (~165.7 mM)
Ethanol: ~100 mg/mL
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.14 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.14 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.14 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


配方 4 中的溶解度: 5%DMSO + 40%PEG300 + 5%Tween 80 + 50%ddH2O: 5.0mg/ml (8.28mM)

配方 5 中的溶解度: 5 mg/mL (8.28 mM) in 20% HP-β-CD in Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 悬浮液; 超声助溶。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.6568 mL 8.2838 mL 16.5675 mL
5 mM 0.3314 mL 1.6568 mL 3.3135 mL
10 mM 0.1657 mL 0.8284 mL 1.6568 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片
  • Curative effect of AMG487 on the development of pre-established colon cancer metastases. Br J Cancer . 2009 Jun 2;100(11):1755-64.
  • Inhibition of colon carcinoma metastases by preventive treatment with the antagonist AMG487. Br J Cancer . 2009 Jun 2;100(11):1755-64.
  • A-B, experimental lung metastases after tumor-specific or systemic blockade of CXCR3 with the antagonist AMG487. Cancer Res . 2006 Aug 1;66(15):7701-7.
  • A-B, local tumor growth and spontaneous lung metastasis after systemic treatment with AMG487Cancer Res . 2006 Aug 1;66(15):7701-7.
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